相差顯微鏡是利用物體不同結(jié)構(gòu)成分之間的折射率和厚度的差別，把通過(guò)物體不同部分的光程差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹?光強(qiáng)度)的差別，經(jīng)過(guò)帶有環(huán)狀光闌的聚光鏡和帶有相位片的相差物鏡實(shí)現(xiàn)觀(guān)測(cè)的顯微鏡。

　　1、相差物鏡的調(diào)換安裝

　　從相差顯微鏡物鏡轉(zhuǎn)換器上拆下普通物鏡，旋入相差物鏡，與普通目鏡配套使用。

　　2、轉(zhuǎn)盤(pán)聚光器的調(diào)換安裝

　　通過(guò)相差顯微鏡旋轉(zhuǎn)聚光器升降螺旋，把普通明視場(chǎng)聚光器至Zdi位，旋松固緊螺絲，卸下聚光器。把轉(zhuǎn)盤(pán)聚光器安放到相應(yīng)位置上，旋緊固緊螺絲，轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器升降螺旋，使聚光器升至Zgao位置。轉(zhuǎn)盤(pán)聚光器的標(biāo)示孔，朝向操作者。此時(shí)，轉(zhuǎn)盤(pán)聚光器上面的聚光鏡部分，進(jìn)入光路;下面的環(huán)狀光闌轉(zhuǎn)盤(pán)，可視需要轉(zhuǎn)動(dòng)使用，把與物鏡匹配的環(huán)孔旋入光路，使之處于轉(zhuǎn)盤(pán)聚光鏡下。

　　轉(zhuǎn)盤(pán)聚光器調(diào)換安裝后，要進(jìn)行合軸調(diào)中，使聚光器的光軸與相差顯微鏡的主光軸合一。其步驟如下：

　　①把轉(zhuǎn)盤(pán)聚光器的環(huán)狀光闌調(diào)至“0”位，明視場(chǎng)照明的普通可變光闌進(jìn)入光路。

　?、谛D(zhuǎn)聚光器升降螺旋，聚光器升至Zgao位。

　?、劢油ㄕ彰鞴庠?，使視場(chǎng)明亮。

　?、馨驯粰z樣品放到相差顯微鏡載物臺(tái)上，用低倍(4×)物鏡聚焦。

　?、菘s小鏡座上的視場(chǎng)光闌開(kāi)孔，至Z小。

　?、迯哪跨R觀(guān)察，在暗視場(chǎng)中可見(jiàn)一縮小的、明亮的、多角形的視場(chǎng)光闌圖像。

　?、咿D(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)盤(pán)聚光器的兩個(gè)調(diào)中桿，推動(dòng)聚光器，把視場(chǎng)中的明亮的多角形的視場(chǎng)光闌圖像，調(diào)至視場(chǎng)ZY。

　?、嚅_(kāi)放相差顯微鏡視場(chǎng)光闌至視場(chǎng)同大，視兩者周邊是否完全重合;否則，復(fù)用調(diào)中螺桿，使聚光器精神調(diào)中。

　　3、綠色濾色鏡安裝

　　把綠色濾色鏡放入相差顯微鏡鏡座的濾色鏡架上。

　　4、相板圓環(huán)與環(huán)狀光闌圓環(huán)的合軸調(diào)中

　　相差顯微鏡相差物鏡的后焦面裝有相板。按物鏡放大率與反差效果的不同，相板圓環(huán)(共軛面)的大小與結(jié)構(gòu)亦不同。轉(zhuǎn)盤(pán)聚光器的環(huán)狀光闌為一系列的透光的，不同大小的明亮環(huán)孔，與不同放大率的物鏡相應(yīng)。使用時(shí)嚴(yán)格匹配，當(dāng)相差顯微鏡物鏡更換時(shí)，環(huán)狀光闌亦作相應(yīng)的更換或調(diào)整。

　　在相差顯微鏡視場(chǎng)中觀(guān)察所見(jiàn)，環(huán)狀光闌為一明亮的圓環(huán)，而相板的圓環(huán)為一暗環(huán)?；ハ嗥ヅ涞拿鳝h(huán)與暗環(huán)大小一致。在使用時(shí)兩者要合軸，互相重疊。兩環(huán)的重疊，須通過(guò)合軸調(diào)節(jié)方能取得。其方法如下：

　　①相差物鏡與環(huán)狀光闌的匹配：

　　正確地匹配取決于相差顯微鏡所用物鏡放大率。例如，當(dāng)使用40×相差物鏡時(shí)，環(huán)狀光闌轉(zhuǎn)向ph3或40位，使相應(yīng)地環(huán)狀光闌進(jìn)入光路。

　　②把CT放入目鏡筒：

　　從相差顯微鏡目鏡筒取出一個(gè)目鏡，換入調(diào)中合軸望遠(yuǎn)鏡(CT)。CT為一眼透鏡，也是可行升降調(diào)節(jié)的望遠(yuǎn)目鏡，專(zhuān)為觀(guān)察視場(chǎng)中明環(huán)與暗環(huán)圖像之用。因?yàn)橛靡话隳跨R看不見(jiàn)兩環(huán)的清晰圖像。CT在使用前眼透鏡應(yīng)處于Zdi位，即CT為Z短小的狀態(tài)。

　　③明環(huán)與暗環(huán)的聚焦：

　　一手固定位于相差顯微鏡目鏡筒中的CT鏡筒，使其透鏡位置不能上移，另一手逆時(shí)針轉(zhuǎn)到CT上部可調(diào)的眼透鏡部分。轉(zhuǎn)動(dòng)的同時(shí)，通過(guò)CT向現(xiàn)場(chǎng)中觀(guān)察，剛旋轉(zhuǎn)時(shí)，兩環(huán)可能為模糊的圖像，繼續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)CT目鏡可調(diào)部分至清晰地窺見(jiàn)明環(huán)與暗環(huán)止。

　　④明環(huán)與暗環(huán)的調(diào)中重疊：

　　相板的暗環(huán)是固定不動(dòng)的，處于光路之中，暗環(huán)的ZX，即相差顯微鏡光軸的ZX。環(huán)狀光闌的亮環(huán)可調(diào)節(jié)移動(dòng)。轉(zhuǎn)盤(pán)聚光器環(huán)狀光闌的位置，因聚光器的可調(diào)其ZX位置，往往偏離光軸軸心，需調(diào)整，使其歸中。環(huán)狀光闌的調(diào)中裝置或部件，因廠(chǎng)家或型號(hào)的不同而有別。

　　相差顯微鏡在調(diào)節(jié)過(guò)程中，如亮環(huán)比暗環(huán)小，并位于暗環(huán)內(nèi)側(cè)時(shí)，應(yīng)降低聚光器位置，使亮環(huán)放大。若亮環(huán)大于暗環(huán)時(shí)，應(yīng)提升聚光器，使亮環(huán)縮小。如聚光器已升至Z頂點(diǎn)還不能完全重合，可能是載玻片過(guò)厚之故。

　　⑤回裝觀(guān)察目鏡：

　　待相差物鏡的暗環(huán)與環(huán)狀光闌的亮環(huán)調(diào)中、重疊后，從相差顯微鏡目鏡筒中取出CT，放回觀(guān)察用的接目鏡，以便鏡檢觀(guān)察。

　　5、相差物鏡的選擇

　　相差物鏡有不同倍率、不同反差類(lèi)別和反差程度之分。相差物鏡的反差類(lèi)別和反差程度以及放大倍數(shù)，皆用英文字母和數(shù)字標(biāo)示在物鏡殼中。

　　使用相差顯微鏡時(shí)，依被檢樣品的種類(lèi)、結(jié)構(gòu)和反差程度的不同，而確定應(yīng)選用相差物鏡的種類(lèi)。這不存在死硬的規(guī)定，可依觀(guān)察者的習(xí)慣和愛(ài)好而變。通常是哪一種相差物鏡都能得到清晰的像，只是有的物鏡更好些而已，因此可任意選擇。暗反差物鏡對(duì)習(xí)慣于明視場(chǎng)鏡檢者適宜。當(dāng)與染色標(biāo)本進(jìn)行比較或進(jìn)行測(cè)定以及加強(qiáng)半透明物體的反差時(shí)，多用暗反差;而計(jì)算數(shù)量或觀(guān)察物體運(yùn)動(dòng)以及研究極小的樣品時(shí)，多使用明反差。

　　總之，在相差顯微鏡使用時(shí)，于諸多的相差物鏡中選一物鏡，絕非易事。Z佳方法是通過(guò)各種類(lèi)型的相差物鏡進(jìn)行實(shí)際鏡檢測(cè)定，找出Z宜相差物鏡。