多肽的分析鑒定方法有多肽一級(jí)結(jié)構(gòu)，二級(jí)結(jié)構(gòu)鑒定，多肽一級(jí)結(jié)構(gòu)包括：質(zhì)譜分析，氨基酸組成分析，氨基酸序列分析。二級(jí)結(jié)構(gòu)包括：圓二色譜（CD），NMR，X-衍射等方法。下面就讓小編為你介紹一下合成多肽二級(jí)結(jié)構(gòu)的分析鑒定和純度分析。

合成多肽二級(jí)結(jié)構(gòu)的分析：

X-衍射

有關(guān)化合物晶型的直接信息可以通過(guò)X-衍射來(lái)獲得，并且相對(duì)與構(gòu)型也能夠通過(guò)其來(lái)獲得。

核磁共振(NMR)

隨著分子生物學(xué)、計(jì)算機(jī)處理技術(shù)的發(fā)展，二維、三維以及四維NMR的應(yīng)用，使得NMR逐漸成為大分子結(jié)構(gòu)物質(zhì)分析的主要方法之一。對(duì)于氨基酸序列、分布以及構(gòu)象的確定可以使用NMR。目前為止，對(duì)于分子中含少于30個(gè)氨基酸的小肽的分析，NMR的作用非常大，能夠就非常準(zhǔn)確且快速地獲得分析結(jié)果。

圓二色譜（CD）

圓二色譜是一種特殊的吸收譜，它通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)等生物大分子的圓二色光譜進(jìn)行測(cè)量，從而使生物大分子的二級(jí)結(jié)構(gòu)獲得，其快捷，簡(jiǎn)單，在酶動(dòng)力學(xué)，蛋白質(zhì)構(gòu)象研究，蛋白質(zhì)折疊等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。

圓二色譜紫外區(qū)段（190-240nm），肽鏈為主要生色團(tuán)，生物大分子主鏈構(gòu)象的信息包含于這一波長(zhǎng)范圍的CD譜中。無(wú)規(guī)則卷曲構(gòu)象的CD譜在220nm附近有一小而寬的正峰，在198nm附近有一負(fù)峰。β-折疊構(gòu)象的CD譜在195-198nm處有一強(qiáng)的正峰，在217-218nm處有一負(fù)峰。α-螺旋構(gòu)象的CD譜在190nm附近有一正峰，在222nm、208nm處呈負(fù)峰。

純度分析：

通常均會(huì)采用HPLC來(lái)進(jìn)行多肽的純度分析，選擇洗脫梯度，5%B--65%B，時(shí)間30min，RP-C18，粒徑5μm，孔徑300A，4.6×150mm，流動(dòng)相：A，0.1%TFA/H2O；B，0.1%TFA/ACN。也有些多肽，尤其是短肽，因?yàn)榫哂泻軓?qiáng)的親水性，在C18上保留很弱，需要對(duì)條件進(jìn)行改變，主要有以下兩種方法：

1.將如七氟丁酸，十八烷基磺酸鈉等強(qiáng)離子對(duì)試劑加入到流動(dòng)相中。

2.對(duì)分析梯度進(jìn)行改變，可以將起始梯度改為2%，等度或小梯度洗脫。