多肽的分析鑒定方法有多肽一級結(jié)構(gòu)，二級結(jié)構(gòu)鑒定，多肽一級結(jié)構(gòu)包括：質(zhì)譜分析，氨基酸組成分析，氨基酸序列分析。二級結(jié)構(gòu)包括：圓二色譜（CD），NMR，X-衍射等方法。下面就讓小編為你介紹一下合成多肽一級分析鑒定方法。

合成多肽一級結(jié)構(gòu)分析鑒定：

氨基酸序列分析

Edman降解為氨基酸序列分析的基本原理。耦聯(lián)、水解、萃取和轉(zhuǎn)換為其主要涉及的4個過程。在pH9.0的堿性條件下，使用苯異硫氰酸酯（PITC）處理蛋白質(zhì)或多肽。PITC與肽鏈的N-端的氨基酸殘基反應(yīng)，使得苯氨基硫甲酰（PTC）衍生物形成，即PTC-肽。之后使用三氟乙酸對PTC-肽進行處理，有選擇地切斷N-端氨基酸殘基肽鍵，將該氨基酸殘基的噻唑啉酮苯胺衍生物釋放出來。接下來從反應(yīng)液中萃取出該衍生物用有機溶劑（例如氯丁烷）而在溶液中依然留有去掉了一個N-端氨基酸殘基。萃取出來的噻唑啉酮苯胺衍生物穩(wěn)定性不高，通過酸的作用，進一步環(huán)化，從而使得一個穩(wěn)定的苯乙內(nèi)酰硫脲（PTH）衍生物形成，即PTH-氨基酸。留在溶液中的減少了一個氨基酸殘基的肽再對上述反應(yīng)過程重復(fù)的進行，通過測序儀自動進行整個測序過程。

氨基酸組成分析

通常，需要純度較高的產(chǎn)品，才能達到氨基酸組成分析的要求，它能夠?qū)⒍嚯闹邪被岬姆N類，數(shù)目給出。

在分析的過程中，首先利用酸將肽鍵水解破壞掉。在真空條件下，110攝氏度下，使用鹽酸水解16-72h。盡管酸水很有用，然而在酸水解條件下獲得的氨基酸分析不是完整的。是由于天冬酰胺和谷氨酰胺的側(cè)鏈含有酰胺鍵，天冬酰胺能夠通過用于切斷蛋白質(zhì)肽鍵的酸轉(zhuǎn)換為天冬氨酸，谷氨酰胺轉(zhuǎn)換為谷氨酸。因為水解具有較高的溫度，空氣能夠很容易將色氨酸的吲哚環(huán)氧化，就算在密封的管中，也基本會破壞色氨酸的吲哚環(huán)。所以，通常會通過蛋白質(zhì)的紫外吸收光譜來對蛋白質(zhì)的色氨酸含量進行估計。色氨酸的含量也能夠通過堿水解來進行分析分析。在酸水解中也不能對半胱氨酸進行精確測定，只有在蛋白質(zhì)水解之前進行氧化或羧甲基化，使得在酸水解之后形成的衍生物可以定量，才能夠精確地測量。

質(zhì)譜分析

對分子量進行確證為質(zhì)譜分析的主要目的，當然，采用MS/MS能夠?qū)Χ嚯男蛄械男畔⑦M行部分的了解，然而這個需要基于比較全的數(shù)據(jù)庫，進行分析才會比較準確。

因為多肽具有不穩(wěn)定的性質(zhì)，需要采用軟電離技術(shù)，目前為止基質(zhì)輔助激光解吸（MALDI-MS）以及電噴霧（ESI-MS）為多肽分析主要使用的儀器。當中，多電荷峰一般會由ESI-MS給出，多肽序列上氨基，胍基，咪唑基的數(shù)目會影響電荷數(shù)目，所以，常常會有雙電荷，三電荷等離子峰給出。

MALDI-MS能夠?qū)Φ鞍状蠓肿舆M行分析，并且在一般的情況下，多電荷很少帶，所以數(shù)據(jù)和分子離子峰直接對應(yīng)，分析比較容易。除此以外，一般在對長肽或蛋白進行分析的過程中，需要將NH4，Na，K等離子加入，以便使靈敏度提高，因此，通常會有一組峰在MS中出現(xiàn)，分別對應(yīng)：（M+H）+，（M+NH4）+，（M+Na）+，（M+K）+。