大腸桿菌測定儀是測定飲用水、食品中大腸桿菌的儀器。大腸桿菌是食品和飲用水安全的重要指標，對飲食安全有重要意義。那么大腸桿菌測定儀如何使用，如何測定大腸桿菌呢？

一、大腸桿菌測定儀操作流程

1、除去培養(yǎng)瓶外包裝，打開其瓶蓋；

2、在培養(yǎng)瓶中注入測試水直至100ml；

3、輕輕攪拌至培養(yǎng)基完全溶解，注意：不要起泡沫

4、用瓶蓋將培養(yǎng)瓶蓋緊；

5、將培養(yǎng)瓶放入AquasurePro3000TM測試單元中并蓋好；

6、使用AC220V，DC12V，輸出電流為1A的電源適配器（每臺儀器均配置一個），電源適配器的一端插在儀器上，另一端插在220V電源上后，檢查是否接好電源線，長按電源開關至綠燈亮，顯示儀器開始正常運轉。

7、在完成溫孵（24小時以內，主要由使用樣品決定）后，觀察樣品顏色變化與否，即可表明其中是否含有大腸桿菌。

二、大腸桿菌檢測儀細菌的分離鑒定

1、標本：腸道外感染取中段尿、血液、膿液、腦脊液等，腹瀉者取糞便。

2、分離培養(yǎng)與鑒定：糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基。血液需先經肉湯增菌，再轉種血瓊脂平板。其他標本可同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基。37℃孵育18～24小時后，觀察菌落并涂片染色鏡檢。采用一系列生化反應進行鑒定。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要時檢定腸霉毒素。

泌尿系統(tǒng)除確定大腸桿菌外，還應計數，每毫升尿含菌量≥100，000時，才有診斷價值。

三、大腸桿菌檢測儀衛(wèi)生細菌學檢查

大腸桿菌不斷隨糞便排出體外，污染周圍環(huán)境和水源、食品等。取樣檢查時，樣品中大腸桿菌越多，表示樣品被糞便污染越嚴重，也表明樣品中存在腸道致病菌的可能性越大。故應對飲水、食品、飲料進行衛(wèi)生細菌學檢查。

1、細菌總數：檢測每毫升或每克樣品中所含細菌數，采用傾注培養(yǎng)計算。ZG規(guī)定的衛(wèi)生標準是每毫升飲水中細菌總數不得超過100個。

2、大腸菌數指數：指每立升中大腸菌群數，采用乳糖發(fā)酵法檢測。ZG的衛(wèi)生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群；瓶裝汽水、果汁等每100ml大腸菌群不得超過5個。

四、大腸桿菌檢測儀食品檢測方法

大腸菌群MPN 計數法

1、樣品的稀釋

1.1 固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品,放入盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內,

8000 r/min～10000 r/min 均質1 min～2 min,或放入盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質袋

中，用拍擊式均質器拍打1 min～2 min，制成1:10 的樣品勻液。

1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL 樣品置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶

（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。

1.3 樣品勻液的pH 值應在6.5～7.5 之間，必要時分別用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 調節(jié)。

1.4 用1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩緩注入9 mL 磷酸鹽緩沖液

或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1 支1 mL 無菌

吸管反復吹打，使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。

1.5 根據對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋

1 次，換用1 支1 mL 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15 min。

2、初發(fā)酵試驗

每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3

管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯，每管接種1mL（如接種量超過1 mL，則用雙料LST肉湯），36

℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h，觀察倒管內是否有氣泡產生，24 h±2 h產氣者進行復發(fā)酵試驗，如未產氣則繼續(xù)

培養(yǎng)至48 h±2 h，產氣者進行復發(fā)酵試驗。未產氣者為大腸菌群陰性。

3、復發(fā)酵試驗

用接種環(huán)從產氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管中，36 ℃±1

℃培養(yǎng)48 h±2 h，觀察產氣情況。產氣者，計為大腸菌群陽性管。

4、大腸菌群Z可能數（MPN）的報告

按3確證的大腸菌群LST陽性管數，檢索MPN表（見附錄B），報告每g（mL）樣品中大腸菌群的

MPN值。

五、大腸菌群平板計數法

1、樣品的稀釋

按上一方法稀釋

2、平板計數

2.1 選取2個～3個適宜的連續(xù)稀釋度, 每個稀釋度接種2個無菌平皿，每皿1 mL。同時取1 mL生理鹽

水加入無菌平皿作空白對照。

2.2 及時將15 mL～20 mL冷至46 ℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）約傾注于每個平皿中。小心

旋轉平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA復蓋平板表層。翻轉平

板，置于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h。

3、平板菌落數的選擇

選取菌落數在15 CFU～150 CFU 之間的平板，分別計數平板上出現的典型和可疑大腸菌群菌落。

典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5 mm 或更大。

4、證實試驗

從VRBA 平板上挑取10 個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于BGLB 肉湯管內，36 ℃±1 ℃

培養(yǎng)24 h～48 h，觀察產氣情況。凡BGLB 肉湯管產氣，即可報告為大腸菌群陽性。