流式細胞儀是一類常見的醫(yī)學檢測儀器,其可以對單一的細胞進行多色的染色,而且還能對細胞表面進行標記,分析液體中的可溶性成分,分析細胞的大小顆粒。流式細胞儀操作簡單,測試的結果客觀而精確。
流式細胞儀可以進行細胞周期分析,DNA倍體分析,定量分析檢測細胞增殖標志物、細胞表面標志、癌基因蛋白產物、耐藥蛋白、細胞凋亡等,從而獲得組織形態(tài)學方法難以得到的信息,可為腫瘤的臨床診斷、ZL、預防和預后提供幫助。
DNA非整倍體的出現(xiàn)可能是發(fā)生早期癌變的一個重要指標。淋巴瘤、白血病在病理形態(tài)學還不能進行早期診斷之前,流式細胞儀可以提供確切的診斷信息。流式細胞儀對淋巴瘤的早期診斷比形態(tài)學檢查更為敏感、準確。DNA非整倍體的交界瘤應按惡性腫瘤對待,形態(tài)學表現(xiàn)為良性的腫瘤出現(xiàn)非整倍體提示有惡性轉變的可能。
流式細胞儀主要是利用實體瘤標本或穿刺標本、胃鏡、食管鏡及支氣管鏡、腫瘤沖洗液、尿液等少量組織進行DNA含量測定,進行包括癌前病變及早期癌變的檢出,從而為臨床輔助診斷和進一步ZL如放療中的藥物選擇、強度、時間等提供較確切、可靠的信息。

1、白血病的診斷和ZL
流式細胞儀采用各種抗血細胞表面分化抗原(CD)的單克隆抗體,借助于各種熒光染料(異硫氰基熒光素FITC,藻紅蛋白PE等)測定一個細胞的多種參數(shù),以正確地判斷出該細胞的屬性。各種血細胞系統(tǒng)都具有其獨特的抗原,當形態(tài)學檢查難以區(qū)別時,免疫表型參數(shù)對各種急性白血病的診斷和鑒別診斷有決定性作用。
流式細胞儀通過對人白細胞抗原(HLA)配型的測定,可以為異體干細胞移植病人選擇出Z合適的供體。造血干細胞移植技術主要包括干細胞的鑒別、活性測定、干細胞動員和采集、分離純化、保存擴增、腫瘤細胞的凈化、干細胞回輸以及術后保持移植物抗宿主病的低發(fā)生率等一系列過程。
流式細胞儀測定CD34、HLA-DR、CD33等細胞表面標志物,成為干細胞移植技術重要的監(jiān)測手段。用流式細胞儀檢測一系列指標觀察病人的恢復狀態(tài),可以對預后做出早期的判斷。
2、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿的診斷
根據CD59表達將陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)病人分為三型,研究證明不同亞型對補體的敏感程度不同。特異地分析網織紅細胞的CD59的表達,對于PNH的診斷及病情評估有非常重要的意義。
流式細胞儀檢測并計數(shù)缺乏這類膜蛋白的異常血細胞,是目前診斷PNHZ直接、Z敏感、特異性Z強且可以定量的良好手段,比傳統(tǒng)的溶血試驗具有更高的特異性和靈敏度。
3、網織紅細胞的測定及臨床應用
網織紅細胞計數(shù)是反映造血功能的重要指標,流式細胞儀通過某些熒光染料與紅細胞中RNA結合,定量測定網織紅細胞中RNA,得到網織紅細胞占成熟紅細該病的診斷及ZL監(jiān)測,具有檢測速度快、靈敏度高胞的百分比。
流式細胞儀方法比目測法結果精確度更高。此外,流式細胞儀還可以測量出網織紅細胞的成熟度,對紅細胞增殖能力的判斷很有意義,為干細胞移植術后恢復的判斷、貧血的ZL監(jiān)測等提供了依據。
1、血小板功能的測定
血小板膜糖蛋白(GP)是參與止血、血栓形成的重要分子基礎,這些膜糖蛋白是一類重要的黏附分子。利用針對GP的單克隆抗體對血小板進行免疫熒光標記,并用流式細胞儀分析單個血小板或血小板亞群的GP,是血小板膜糖蛋白檢測分析方法的重大發(fā)展。其方法簡便、快速、標本用量少、靈敏度高、結果準確。
2、血小板相關抗體的測定
免疫性血小板減少性紫瘢病人血漿中可產生血小板自身抗體,結合在血小板表面,稱為血小板相關抗體,其分子可以是IgG、IgA或IgM,用鼠抗人IgG、IgA、IgM熒光抗體標記被測血小板,流式細胞儀可以測定血小板相關抗體含量。直接法檢測血小板表面的相關抗體,間接法可測定血清中的相關抗體。該方法用于的優(yōu)點。
淋巴細胞分為T淋巴細胞(CD3)、B淋巴細胞(CD19)和NK細胞三大群。T淋巴細胞又分為輔助性T細胞(CD4)、細胞毒性T細胞(CD8)。
流式細胞儀檢測T淋巴細胞和B淋巴細胞百分數(shù)可以用來判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病。CD4和CD8T淋巴細胞的百分數(shù)有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病或有免疫反應的病人的免疫狀態(tài)。

造血干細胞移植加強烈化療是治愈某些難治疾病的有效方法。外周血造血干細胞移植(PBSCT)的成功與否,除與是否合并并發(fā)癥有關外,移植物中CD34+細胞的數(shù)量和質量是重要因素。
1995年,血液病ZL及移植國際聯(lián)合會成立了干細胞計數(shù)小組,致力于尋求一種簡單、快速、靈敏的流式細胞儀檢測方法去定量外周血中造血干細胞的數(shù)量。這一方法對于臨床實驗室中不同的流式細胞儀都有效,而且在不同的移植ZX具有可比性。
流式細胞儀泛用于細菌、病原體、毒素、血清抗體及藥敏試驗。在免疫熒光方法中的流式微球捕獲芯片技術是流式細胞儀的一個新應用,它將近似于細胞大小的微珠作為捕獲載體,使其攜帶已知熒光抗原或抗體,來捕獲檢測物中的相關抗體或抗原。由于遮蔽效應可以使熒光微球的發(fā)散光減弱,應用不同大小的熒光微球,可同時檢測同一標本的多種抗原或抗體。
這種方法能同時檢測單一液相樣本中多個目的蛋白(如同時測定多種細胞因子、多種自身抗體),檢測需用標本量少,靈敏度高,重復性好,直接熒光標記易于使用,檢測線性范圍寬,避免酶聯(lián)反應所致的人工假象,可用于單細胞分子水平的多參數(shù)檢驗,也可用于真菌、寄生蟲、病毒或混合感染的檢測。
流式細胞儀在器官移植中也占有重要地位,它被用來判斷供者與受者之間配型是否合適。其檢測手段是檢測受者血清中抗供者的抗HLA的抗體。根據抗體的種型、效價、靶抗原和器官移植的類型不同,抗體介導的排斥反應也有所不同。
流式細胞儀與傳統(tǒng)方法相比更靈敏、操作時間短并可同時檢測細胞亞型、分辨出IgG和IgM抗體。流式細胞儀所分析的靶細胞不只局限于淋巴細胞,為移植的配型提供更有利的支持。移植術后,免疫表型的監(jiān)測也很重要。移植后CD4/CD8比值低下的病人排斥反應發(fā)生較多;受者血清中產生抗供體細胞抗體者預后較差,應及時監(jiān)測以便進行抗排斥的預防和ZL。
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