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流式細(xì)胞儀的技術(shù)發(fā)展

更新時(shí)間:2025-10-20 13:47:01 類型: 閱讀量:3058
導(dǎo)讀:流式細(xì)胞儀與其他細(xì)胞分析儀器相比,具有突出的技術(shù)特征,這些技術(shù)特征的不斷改進(jìn)就大致地代表了流式細(xì)胞儀的技術(shù)發(fā)展過程。

  流式細(xì)胞儀與其他細(xì)胞分析儀器相比,具有突出的技術(shù)特征,這些技術(shù)特征的不斷改進(jìn)就大致地代表了流式細(xì)胞儀的技術(shù)發(fā)展過程。

  1、高速度:

  分析速度以每秒可分析的細(xì)胞數(shù)來表示。流式細(xì)胞儀是以高速度的數(shù)據(jù)處理電子系統(tǒng)信號(hào),配合GX的液流控制系統(tǒng),有力地保證了流式細(xì)胞儀的檢測功能。

  流式細(xì)胞儀對細(xì)胞的檢測速度一般為1000~5000個(gè)/s;而到目前為止,對細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)分析速度已達(dá)到了2×104個(gè)/s,Zda分析速度可達(dá)到6×104個(gè)/s。

  2、高靈敏度:

  靈敏度的高低是衡量流式細(xì)胞儀檢測微弱熒光信號(hào)的重要指標(biāo),一般是以能檢測到單個(gè)微球上Z少標(biāo)記有異硫氫酸熒光素(FITC)或藻紅蛋白(PE)熒光分子數(shù)目來表示。

  以前,每個(gè)細(xì)胞要帶有1000~3000個(gè)FITC分子才能在流式細(xì)胞儀上測量出來;目前,一個(gè)細(xì)胞上只要帶600個(gè)熒光分子,甚至帶100個(gè)FITC分子,即可以被檢測和分選出來。

流式細(xì)胞儀的技術(shù)發(fā)展.jpg

  3、高準(zhǔn)確度:

  以前,在兩個(gè)細(xì)胞間待測細(xì)胞成分存在5%以上的差異時(shí),流式細(xì)胞儀才能檢測出來;目前,兩個(gè)待測細(xì)胞間細(xì)胞成分僅相差1%左右時(shí),流式細(xì)胞儀便可檢測出來。例如,在檢測男人和女人外周血淋巴細(xì)胞DNA含量時(shí),僅僅是X染色體和Y染色體DNA含量之間有所區(qū)別(大約相差約占整個(gè)細(xì)胞的2%左右),應(yīng)用流式細(xì)胞儀便可以輕而易舉地把男人和女人的淋巴細(xì)胞區(qū)分開并分選出來。

  4、高精度:

  分辨率是衡量流式細(xì)胞儀測量精確度的指標(biāo),通常用變異系數(shù)(CV)值來表示。用流式細(xì)胞儀檢測某種細(xì)胞成分時(shí),比用其他分析細(xì)胞學(xué)技術(shù)的CV值都要小得多,分辨率要高得多。眾所周知,用某種儀器分析細(xì)胞時(shí),其CV值越大,分析結(jié)果越不精確。

  以前的流式細(xì)胞儀,在分析細(xì)胞樣品時(shí),CV值只能達(dá)到5%~7%左右,前向角散射光分辨率僅為0.3μm。流式細(xì)胞儀前向角散射光的分辨率已達(dá)到0.02μm。流式細(xì)胞儀的電信號(hào)脈沖通道,從當(dāng)初的128道→256道→1024道,直到目前一般已達(dá)到40%道,有的甚至還可以達(dá)到5120道。

  信號(hào)脈沖通道數(shù)分布越多,對細(xì)胞的分辨率就越高,對細(xì)胞的分析就越精確。例如,目前,各流式細(xì)胞儀生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀,都能以高精確度來分析人類染色體的畸變,通過二維圖顯示擴(kuò)展群體分布,極大地提高了流式細(xì)胞儀的分辨率。另外,通過對脈沖系統(tǒng)功能的改進(jìn),也提高了細(xì)胞參數(shù)分析的質(zhì)量。

  5、多參數(shù):

  流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞時(shí),可以從一個(gè)細(xì)胞中同時(shí)獲得多種細(xì)胞信息。由于流式細(xì)胞儀采用的光源不斷改進(jìn)從開始的單一的激光器或紫外光器,至目前發(fā)展為采用2-3個(gè)激光器,或再加一個(gè)紫外光器。

  有的采用立體空間激光系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)多熒光道分析,Zda程度地減少熒光信號(hào)之間的補(bǔ)償,提高檢測的靈敏度,所以,利用空間立體激發(fā)的多激光系統(tǒng)可以提高多參數(shù)的分析質(zhì)量。

  目前的單激光四色分析或雙激光四色分析的流式細(xì)胞儀,488nm激光器激發(fā)出的4種不同熒光光譜之間常有重疊,做4色分析時(shí),難以避免熒光過多重疊而導(dǎo)致的補(bǔ)償困難。利用該系統(tǒng)對488nm激光產(chǎn)生的3色熒光與635nm激發(fā)而產(chǎn)生的第4種熒光分成兩種信號(hào),能Zda程度地減少補(bǔ)償,使4色熒光達(dá)到Zwan美的效果。

  因此在一個(gè)細(xì)胞中,除分析前向角和側(cè)向角的散射光參數(shù)外,還可以檢測到3種、4種、6種,甚至到8種熒光參數(shù),這顯著增加了流式細(xì)胞儀的信息量,提高了工作效率和科學(xué)性。

流式細(xì)胞儀.jpg

  6、高純度:

  流式細(xì)胞儀的重要功能之一是能分選出實(shí)驗(yàn)者所需要的任何細(xì)胞。其分選指標(biāo)主要包括:分選速度、分選純度和細(xì)胞回收率。這些指標(biāo)均隨流式細(xì)胞儀的技術(shù)發(fā)展而逐漸得到改善和提高。

  目前流式細(xì)胞儀分選細(xì)胞速度已達(dá)到6×104~1×105個(gè)/s,分選純度為99.9%以上,分選回收率也達(dá)90%以上。

  7、其他幾方面的技術(shù)改進(jìn):

 ?、贌晒庑盘?hào)從線性測量到對數(shù)測量的改進(jìn),由于對數(shù)測量可以放大電信號(hào),使之對弱熒光和某些藥物自發(fā)熒光標(biāo)本檢測才得到滿意的結(jié)果;

 ?、诠庾V重疊的校正,通過補(bǔ)償修飾軟件的開發(fā)應(yīng)用,從而保證了各種不同激發(fā)熒光檢測分析的質(zhì)量;

 ?、跠NA含量分析時(shí),通過分析脈沖的面積、寬度,區(qū)分實(shí)體瘤組織標(biāo)本中的粘連細(xì)胞群體,剔除DNA檢測中的二聯(lián)體細(xì)胞,Zda程度地減少假陽性,從而解決了實(shí)體瘤DNA分析時(shí)長期存在的關(guān)鍵性的難題;

  ④過去采用激光的一種波長(如488nm)的發(fā)射光僅能激發(fā)樣品中一種波長的繼發(fā)光,因此,只能檢測細(xì)胞中一種細(xì)胞成分。現(xiàn)在流式細(xì)胞儀采用一種488nm激發(fā)波長的發(fā)射光,可以同時(shí)激發(fā)樣品中三種或四種不同波長的繼發(fā)光,這便可用于同一細(xì)胞不同成分的同步分析。

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