對特定的DNA片段起到放大擴增作用的一種分子生物學技術，被稱為聚合酶鏈式反應。其可以被當作生物體外的特殊DNA復制，能夠大幅增加微量的DNA。1971年Khorana首先提出設想，1985年Mullis發(fā)明了聚合酶鏈反應。下面就讓小編帶你了解一下PCR反應陰性的原因。

值得注意的是，有有時候會忘記將Taq酶或溴乙錠加入。

物理原因：

對于PCR擴增而言，變性可謂非常的重要，如果變性的時間很短并且變性的溫度很低，那么很有可能導致假陰性的出現(xiàn)。退火事有過低的溫度，可能會造成非特異性擴增，從而使得特異性擴增效率降低。如果退火溫度過高，那么會對引物與模板的結合產(chǎn)生影響從而使得PCR擴增效率降低。有些時候，擴增儀或水溶鍋內的變性、退火和延伸溫度也非常有必要使用標準的溫度計檢測一下，因為這些也很有可能造成PCR失敗。

反應體積的改變：

20ul、30ul、50ul、或100ul為進行PCR擴增時常用的體積。科研和臨床檢測的不同目的決定了應用多大體積進行PCR擴增。如果在做小體積如20ul后，又做大體積，必須先對條件進行摸索，否則非常容易失敗。

Mg2+濃度：

PCR擴增效率受到Mg2+離子濃度非常大的影響，如果Mg2+濃度過高，就會使得PCR擴增的特異性降低，如果Mg2+濃度過低，那么可能會對PCR擴增產(chǎn)量產(chǎn)生影響甚至會導致PCR擴增失敗，擴增條帶沒有出現(xiàn)。

引物：

PCR失敗或擴增條帶不理想、容易彌散通常是由引物質量、引物的濃度、兩條引物的濃度是否對稱造成的。若引物合成質量出現(xiàn)問題，兩條引物一條濃度低，另外一條濃度高，導致擴增效率低下以及擴增不均勻，那么有如下方法。

1.對一個好的引物合成單位進行選定。

2.引物的濃度不但要注意OD值而且要注意引物原液做瓊脂糖凝膠電泳，必須要出現(xiàn)引物條帶，并且兩引物帶需要有大體相同的亮度，如果一條引物沒有條帶，另外一條引物有條帶，那么這個時候做PCR有失敗的可能性。如果一條引物亮度低，另外一條引物亮度高，那么在稀釋引物時需要對其濃度進行平衡。

3.當對引物進行保存時，應該高濃度少量分裝保存，避免長期放冰箱冷藏部分或者多次凍融，造成引物變質，降解失效。

4.引物沒有得到合理的設計，若引物沒有足夠的長度，那么二聚體等會在引物之間形成。

靶序列變異：

如果靶序列發(fā)生突變或缺失，那么會對引物與模板特異性結合產(chǎn)生影響，導致靶序列某段缺失使引物與模板失去互補序列，從而造成PCR擴增失敗