對(duì)特定的DNA片段起到放大擴(kuò)增作用的一種分子生物學(xué)技術(shù)，被稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。其可以被當(dāng)作生物體外的特殊DNA復(fù)制，能夠大幅增加微量的DNA。1971年Khorana首先提出設(shè)想，1985年Mullis發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)。下面就讓小編為你介紹一下PCR反應(yīng)污染原因以及監(jiān)測(cè)。

較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性是PCR反應(yīng)所具有的Zda特點(diǎn)，然而，其有一個(gè)令人頭痛的問(wèn)題，就是其非常容易受到污染。哪怕污染極其微量，都可能導(dǎo)致發(fā)生假陽(yáng)性。

污染原因

標(biāo)本間交叉污染：

1.一些微生物標(biāo)本特別是病毒，能夠隨著或者生成氣溶膠而擴(kuò)散，使得標(biāo)本相互交叉污染。

2.在提取標(biāo)本核酸模板的過(guò)程中，因?yàn)槲鼧訕屖艿轿廴?，從而使得?biāo)本相互交叉污染。

3.在放置標(biāo)本時(shí)，因?yàn)槿萜髅芊獠粐?yán)，標(biāo)本溢出，和容器的外粘有標(biāo)本相互交叉污染。

4.收集標(biāo)本的容器受到污染

PCR試劑的污染：

在在PCR試劑配制過(guò)程中，加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液受到PCR核酸模板污染。

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染：

PCR反應(yīng)中Z主要也是Z常見(jiàn)的污染問(wèn)題是PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染。由于PCR產(chǎn)物具有非常大的拷貝量（通常為1013拷貝/ml），相比于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限要高出許多許多，因此只要是極微量的PCR產(chǎn)物污染，就很有可能導(dǎo)致假陽(yáng)性。氣溶膠污染是一種Z有可能也是Z容易被忽視的導(dǎo)致PCR產(chǎn)物污染的形式。氣溶膠能夠在在空氣與液體面摩擦?xí)r形成，當(dāng)操作的時(shí)候，搖動(dòng)反應(yīng)管，開(kāi)蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠從而導(dǎo)致污染。

實(shí)驗(yàn)室中克隆質(zhì)粒的污染：

這個(gè)問(wèn)題在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室及某些用克隆質(zhì)粒做陽(yáng)性對(duì)照的檢驗(yàn)室比較常見(jiàn)。由于在單位容積內(nèi)克隆質(zhì)粒有相當(dāng)高的含量，除此以外，在在純化過(guò)程中需要用到的試劑和材料很多，并且，在活細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒，由于活細(xì)胞具有非常強(qiáng)大的生命力以及非常容易生長(zhǎng)繁殖，因此，可能會(huì)造成非常大的污染。

污染的監(jiān)測(cè)

時(shí)刻注意污染的監(jiān)測(cè)對(duì)于一個(gè)好的實(shí)驗(yàn)室是非常必要的，對(duì)什么原因?qū)е碌奈廴疽约坝袩o(wú)污染進(jìn)行考慮，從而為采取措施提供便利，避免和消除污染。

一個(gè)好的實(shí)驗(yàn)室，要時(shí)刻注意污染的監(jiān)測(cè)，考慮有無(wú)污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。

1、陰性對(duì)照：

只要進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)，就一定要做陰性對(duì)照，陰性對(duì)照包含：

（1）試劑對(duì)照：不將模板DNA或RNA加入到PCR試劑中，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)試劑是否污染進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

（2）標(biāo)本對(duì)照：血清就是被檢的標(biāo)本，就使用鑒定后的正常血清作對(duì)照。組織細(xì)胞就是被檢的標(biāo)本，就使用相應(yīng)的組織細(xì)胞作對(duì)照。

2、陽(yáng)性對(duì)照：

PCR陽(yáng)性對(duì)照對(duì)于被建立PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室及一般的檢驗(yàn)單位都是必需設(shè)有的，對(duì)于產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求以及

PCR反應(yīng)是否成功，PCR陽(yáng)性對(duì)照都是一個(gè)重要的參考標(biāo)志。陽(yáng)性對(duì)照需要選擇的標(biāo)本需要滿足經(jīng)各種鑒定、重復(fù)性好、擴(kuò)增度中等的要求。若使用重組質(zhì)粒為陽(yáng)性對(duì)照，那么含量低一點(diǎn)比較好（100個(gè)拷貝以下）。然而陽(yáng)性對(duì)照特別是高濃度陽(yáng)性標(biāo)本以及重組質(zhì)粒，其很有可能導(dǎo)致檢測(cè)或者擴(kuò)增的樣品的污染。

3.選擇不同區(qū)域的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增

4.重復(fù)性試驗(yàn)