核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來(lái)使得樣本核酸提取工作自動(dòng)完成的儀器。其在環(huán)境微生物檢測(cè)、食品安全檢測(cè)、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、疾病控制ZX、臨床疾病診斷、生物學(xué)研究以及畜牧業(yè)等多種領(lǐng)域得到廣泛地應(yīng)用。下面就讓小編帶你了解一下DNA提取的常見(jiàn)問(wèn)題。

常見(jiàn)問(wèn)題

1.加核糖核酸酶降解核糖核酸后，為什么再要用SDS與KAc來(lái)處理？

加進(jìn)去的RNase本身是一種蛋白質(zhì)，必須將其去除以便純化DNA，將SDS加入能夠使它們成為SDS-蛋白復(fù)合物沉淀，再將KAc加入，能夠使這些復(fù)合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}形式的SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，使沉淀更加完全。也能夠使用飽和酚、氯仿抽提再沉淀，將RNase去除。在溶液中，NaAc使用KAc代替，效果同樣比較好。

2.為什么在保存或抽提DNA過(guò)程中，一般采用TE緩沖液？

在基因操作實(shí)驗(yàn)中，保持DNA的穩(wěn)定性以及不會(huì)干擾緩沖液成分是選擇緩沖液的主要原則。盡管磷酸鹽緩沖系統(tǒng)（pKa=7.2）和硼酸系統(tǒng)（pKa=9.24）等均符合細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍（pH），，能夠用作NA的保存液，然而在轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時(shí)，磷酸根離子的種類(lèi)及數(shù)量將與Ca2+產(chǎn)生Ca3（PO4）2沉淀。在DNA反應(yīng)時(shí)，不同的酶對(duì)輔助因子的種類(lèi)及數(shù)量有著不同的要求，有的則要求低鹽濃度，有的要求高離子濃度，采用Tris-HCl（pKa=8.0）的緩沖系統(tǒng)，由于對(duì)于金屬離子的干擾作用不存在，ris-HCl系統(tǒng)大都用于DNA的提取或保存，而TE緩沖液中的EDTA能夠使得DNA的活性更加的穩(wěn)定。

3.為什么用無(wú)水乙醇沉淀DNA？

實(shí)驗(yàn)中Z常用的沉淀DNA的方法為使用無(wú)水乙醇來(lái)對(duì)DNA進(jìn)行沉淀。能夠和水以任意比相混溶相混溶是乙醇的優(yōu)點(diǎn)，與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng)，對(duì)DNA很安全，所以其是理想的沉淀劑。DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在即是DNA溶液，當(dāng)將乙醇加入時(shí)，DNA周?chē)乃肿訒?huì)被乙醇奪去，導(dǎo)致DNA失水而使聚合變得容易。通常實(shí)驗(yàn)中，是將2倍體積的無(wú)水乙醇加入與DNA相混合，乙醇含量的Z終占比大約為67%。由于和95%乙醇相比較，無(wú)水乙醇的價(jià)格要昂貴的多，然而加95%的乙醇會(huì)增大總體積，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，所以也增加了DNA損失，特別多次使用乙醇沉淀時(shí)，就會(huì)對(duì)收得率產(chǎn)生影響。Z后的沉淀步驟要使用無(wú)水乙醇，初次沉淀DNA時(shí)使用95%乙醇為折中的做法。也能夠用0.6倍體積的異丙醇對(duì)DNA選擇性沉淀。通常在室溫下放置15-30分鐘就行。

4.在用乙醇沉淀DNA時(shí)，為什么一定要加NaAc或NaCl至Z終濃度達(dá)0.1~0.25mol/L？

在溶液pH大約為8時(shí)，DNA分子是帶負(fù)電荷的，將一定濃度的NaAc或NaCl加入，Na+會(huì)對(duì)DNA分子上的負(fù)電荷進(jìn)行中和，從而使少DNA分子之間的同性電荷相斥力減少，使互相聚合形成DNA鈉鹽沉淀變得容易。當(dāng)加入濃度過(guò)低的鹽溶液時(shí)，只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合，如此會(huì)導(dǎo)致DNA沉淀不完全，，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太高時(shí)，也沒(méi)有很好的效果。在沉淀的DNA中，因?yàn)榇嬖谶^(guò)多的鹽雜質(zhì)，對(duì)DNA的酶切等反應(yīng)產(chǎn)生影響，必須要進(jìn)行洗滌或重沉淀。