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DNA提取中實驗試劑作用原理

更新時間:2025-10-19 02:27:44 類型: 閱讀量:1801
導(dǎo)讀:核酸提取儀核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動完成的儀器。其在環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、臨床疾病診斷、生物學(xué)研究以及畜牧業(yè)等多種領(lǐng)域得到廣泛地應(yīng)用。

核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動完成的儀器。其在環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、疾病控制ZX、臨床疾病診斷、生物學(xué)研究以及畜牧業(yè)等多種領(lǐng)域得到廣泛地應(yīng)用。下面就讓小編帶你了解一席DNA提取中實驗試劑的作用以及原理。


1.溶液III--3mol/LNaAc(pH4.8)溶液:

NaAc的水溶液呈堿性,必須將大量的冰醋酸加入從而將pH調(diào)節(jié)至4.8。因此,實際上該溶液是NaAc-HAc的緩沖液。為了將pH12.6的抽提液的pH調(diào)回至中性,使用pH4.8的NaAc溶液,從而使變性的質(zhì)粒DNA可以復(fù)性,并能穩(wěn)定存在。而高鹽的3mol/LNaAc對變性的大分子染色體DNA、RNA以及SDS-蛋白復(fù)合物凝聚而沉淀有利。前者是由于對核酸上的電荷的中和,使得相斥力減少而互相聚合,后者是由于鈉鹽與SDS-蛋白復(fù)合物作用后,可以使較小的鈉鹽形式復(fù)合物形成,從而更加完全的沉淀。


3.jpg


2.溶液II-NaOH-SDS液:

SDS:SDS是離子型表面活性劑。它的主要功能如下:

(1)SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合使得R-O-SO3-…R+-蛋白質(zhì)的復(fù)合物形成,使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來。然而SDS會對核糖核酸酶起到Y(jié)Z的作用,因此,在之后的提取過程中,為了避免在下一步操作中(用RNase去除RNA時)受到干擾,必須先將其去除干凈。

(2)對細胞膜上的脂質(zhì)與蛋白進行溶解,通過膜蛋白的膜蛋白從而使細胞膜被破壞。

(3)將細胞中的核蛋白解聚。


NaOH:當(dāng)溶液pH<9,>5時,核酸是穩(wěn)定的。然而當(dāng)溶液pH<3,>12時,就會導(dǎo)致雙鏈之間氫鍵的解離而變性。在溶液II中的NaOH濃度為0.2mo1/L,將抽提液加入時,該系統(tǒng)的pH就高達12.6,所以促使了質(zhì)粒DNA與染色體DNA的變性。


3.溶液I—溶菌液:

EDTA:(1)因為溶菌酶的反應(yīng)需要有較低的離子強度的環(huán)境,所以EDTA的存在對溶菌酶的作用有利。

(2)對Mg2+、Ca2+等金屬離子螯合,使脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用(DNase作用時需要一定的金屬離子作輔基)得到Y(jié)Z。


葡萄糖:對溶液的粘度進行增加,使?jié)B透壓維持,使DNA受機械剪切力作用而降解得以避免。


溶菌酶:其為糖苷水解酶,其可以將肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵(細胞壁的主要化學(xué)成分)水解,所以其具有溶菌的作用。當(dāng)溶液中pH<8時,會YZ溶菌酶的作用。


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