在體外人對雙鏈DNA分子合成的技術，即是基因合成，不同于寡核苷酸合成：寡核苷酸是單鏈的，大約100nt為其所可以合成的Z長片段?；蚝铣蓞s是雙鏈DNA分子合成，50bp-12 kb是可以合成的長度范圍。

DNA合成常見問題

怎樣按照使用濃度溶解引物?

 記住幾個參數(shù):

1OD引物干粉約為33微克;

堿基的平均分子量為324.5;

引物的分子量=堿基數(shù)x堿基的平均分子量;

引物的摩爾數(shù)=質(zhì)量數(shù)/引物分子量

真空干燥的DNA呈干膜狀或粉末狀在離心管底部,開啟瓶蓋時小心不要丟失;請加入足量的水充分振蕩溶解。

如何保存引物?

我們提供的干粉DNA從有機溶劑中干燥出來,無菌,無核酸酶?？梢允覝鼗?20C密閉長期保存;溶解以后的DNAZ好保存在-200C,溶解引物的水的PH要求大于7,并且無菌。帶有熒光標記的引物請注意避光保存。

已經(jīng)溶解的引物,為什么原先使用正常,而過一段時間再使用就不好了?

如果您溶解引物的水PH過低或污染了菌或核酸酶,會使引物降解。不少實驗室用的雙蒸水PH<6,使用時沒有充分解凍振蕩混合,液體不均勻也可能會造成引物加入量不準確。

如何測定引物的OD值?

用紫外分光光度計在260nm波長測定溶液的光密度來定量。請注意紫外分光光度計的使用,測定時溶液的光密度Z好稀釋到0.2-0.8之間DNA干粉用一定體積的水充分振蕩溶解以后,取部分溶液稀釋到1ml并在1m標準比色杯中測定其光密度,即為所測體積的OD值,進而可以計算出母液的OD值。

如何檢測引物的純度?

實驗室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝膠進行電泳。取0.2-0.5OD的引物,用尿素飽和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到飽和,上樣前加熱變性。加入尿素的目的一是變性二是增加樣品比重,容易加樣。600V電壓進行電泳,一定時間后(約2-3小時),剝膠,用熒光TLC板在紫外燈下檢測帶型,在主帶之下沒有雜帶,說明純度是好的。(有時由于變性不充分,主帶之上可能會有條帶,乃是引物二級結構條帶。)