液相色譜以液體作為流動相的色譜分離方法。適用于高沸點，大分子，強極性和熱穩(wěn)定性差的化合物分析。流動相具有運載樣品分子和選擇性分離的雙重作用。液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，而后分析鑒定的儀器。本文簡單介紹了液相色譜儀的工作原理及應用。

液相色譜法是目前應用廣泛的分離、分析、純化有機化合物(包括能通過化學反應轉變?yōu)橛袡C化合物的無機物)的有效方法之一。在已知的有機化合物中，約有80%能用GX液相色譜法分離、分析，而且由于此法條件溫和，不破壞樣品，因此特別適合高沸點、難氣化揮發(fā)、熱穩(wěn)定性差的有機化合物和生命物質。

液相色譜儀系統(tǒng)一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數據記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關鍵部位。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、與柱或保護住、柱溫控制器等，現代液相色譜儀還有微機控制系統(tǒng)，進行自動化儀器控制和數據處理。

由于液相色譜儀具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領域。

一、液相色譜儀工作環(huán)境

避免強烈振動；

避免陽光直射；

濕度小于等于80%；

溫度在5-40度之間；

避免強大的電場或磁場；

儀器表面不防水，若有水濺上，應立即擦去。

二、液相色譜儀的工作原理

液相色譜系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數據處理系統(tǒng)。簡易流程圖如下：

1、溶劑

(1)溶劑的選擇

流動相的選擇：

采用“HPLC色譜”級溶劑；避免使用會引起柱效損失或保留特性變化的溶劑；對試樣有適宜的溶解度；溶劑粘度??；與檢測器匹配。

緩沖液的使用：

盡可能使用高級別純度的化學試劑配制;避免使用前必須過濾；使用后一定要進行清洗，以免造成腐蝕，磨損，阻塞;用純水沖洗30min-60min(1ml/min)，再用甲醇沖洗30min；易受到細菌和霉菌的影響。

(2)溶劑的處理

過濾：0.45um或更小孔徑濾膜，目的是除去溶劑中的微小顆粒，避免堵塞色譜柱尤其是使用無機鹽配制的緩沖鹽。

脫氣：除去流動相中溶解或因混合而產生的氣泡。

泵中氣泡使液流波動，改變保留時間和峰面積；柱中氣泡使流動相繞流，使峰變形；檢測器中的氣泡會產生基線波動。

2、柱塞泵

柱塞泵包括串聯式柱塞往復泵和并聯式微體積柱塞往復泵。

3、進樣器

進樣器包括自動進樣器和手動進樣器，手動進樣器的注入方式分為全量注入和部分注入。

部分注入：一般要求進樣量Z多為定量環(huán)體積的一半，如20ul的定量環(huán)，Z多進樣10ul的樣品，并且要求每次進樣體積準確、相同。

全量注入：進樣量Z少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20ul的定量環(huán)Z少進樣60至100ul的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內殘留的溶液，達到所要求的精密度及重現性。

4、柱溫箱

使用柱溫箱，可使分析結果重現性好；提高柱效；降低柱壓；保證檢測穩(wěn)定性。

5、檢測器

原理是：基于被分析組分對特定波長紫外光的選擇性吸收。

其優(yōu)點：靈敏度高；對溫度和流速不敏感；可用于梯度洗脫。

缺點：僅適用于測定有紫外吸收的物質。

常用的檢測器類型：紫外檢測器(包括二極管陣列檢測器)、熒光檢測器、示差折光檢測器、電導檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、質譜檢測器。

三、液相色譜儀應用

液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。

與試樣預處理技術相配合，液相色譜儀所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題Z有前途的方法。

由于液相色譜儀具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領域。GX液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發(fā)展方向。

液相色譜儀的原理和技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等;液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發(fā)烴類，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展和應用。