免疫印跡（immunoblotting）又叫做蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是通過抗原抗體的特異性結(jié)合來對復(fù)雜樣品中的某種蛋白進(jìn)行檢測的方法。此方法是一種新的免疫生化技術(shù)。

免疫印跡法 (Western blotting) 是一種結(jié)合了免疫化學(xué)分析和技術(shù)高分辨率凝膠電泳的雜交技術(shù)。免疫印跡法是對蛋白質(zhì)特性、表達(dá)與分布進(jìn)行檢測Z常用的一種方法，例如病毒的抗體或抗原檢測、多肽分子的質(zhì)量測定與組織抗原的定性定量檢測。免疫印跡法具有很強的特異性，很高的敏感度以及很大的分析容量。免疫印跡法(immunoblotting test,IBT)也叫做酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),由于其類似于Southern早先建立的檢測核酸的印跡方法 Southern blot ，因此也被叫做Western-blot。

電轉(zhuǎn)移方法

一般需要利用電泳方法將經(jīng)電泳分離后的蛋白轉(zhuǎn)移到固相載體上，這個過程被叫做電泳印跡。以下為常用的兩種電轉(zhuǎn)移方法。

1.半干法:

用緩沖溶液浸濕的濾紙將凝膠和固相載體夾在中間，通電10-30min。

2.濕法：

在轉(zhuǎn)移緩沖溶液中浸放凝膠和固相載體夾心，由45min延長到過夜為轉(zhuǎn)移時間。

因為濕法有更大的使用彈性而且沒有對更多的時間和原料產(chǎn)生明顯地浪費，所以這里僅對濕法的基本操作過程進(jìn)行描述。

需要采用可以識別一抗的第二抗體來識別目的蛋白，往往將購買的成品，即是如辣根過氧化物酶般已經(jīng)被結(jié)合或標(biāo)記了特定的試劑作為抗體。利用辣根過氧化物酶所催化的一個比色反應(yīng)，即是這種標(biāo)記，該反應(yīng)的產(chǎn)物在固相載體上固定以及有特定的顏色，鑒別非常容易。所以能夠根據(jù)識別二抗來對一抗進(jìn)行識別，從而使目標(biāo)蛋白所在的位置被判斷出來。堿性磷酸酶系統(tǒng)和125I標(biāo)記系統(tǒng)均屬于其他的識別系統(tǒng)。

實驗原理

蛋白質(zhì)印跡法又叫做免疫印跡法，這是一種能夠?qū)潭ㄔ诠滔噍d體上蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測的免疫化學(xué)技術(shù)方法。待測蛋白除了可以為粗提物，而且還能夠經(jīng)過一定的分離和純化。應(yīng)用該項技術(shù)，待測蛋白的單克隆或多克隆抗體需要被利用來進(jìn)行識別。可溶性抗原也就是待測蛋白的分離首先需要按照如分子量，分子大小，電荷以及其等電點等性質(zhì)的差異采用不同的電泳方法。凝膠中的蛋白質(zhì)通過電流被轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜上。目的蛋白的釣取可以以抗體作為探針利用抗體（一抗）與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的原理來進(jìn)行。尤其留心的是在將一抗加入之前，首先需要將非特異性蛋白加入，例如膜被牛血清白蛋白“封阻”，而使膜的非特異性結(jié)合得以避免。

實驗?zāi)康?/span>

對蛋白質(zhì)印跡法的基本原理及其操作和應(yīng)用進(jìn)行了解。