FPLC全稱為快速蛋白液相色譜（Fast protein liquid chromatography），其原理與GX液相色譜理論類似，是由經(jīng)典的液體柱層析引入氣相色譜理論，并且對(duì)相體進(jìn)行了改革，配用高壓輸液泵，采用高靈敏檢測(cè)器、梯度洗脫裝置、自動(dòng)收集裝置和微機(jī)等發(fā)展起來(lái)的現(xiàn)代液相色譜。

FPLC技術(shù)基本實(shí)驗(yàn)方案

實(shí)驗(yàn)原理

FPLC(fast protein liquid Chromatography)為一種特殊的GX液相層析(HPLC，high pressureliquid chromatography)裝置，快速分離純化和定量測(cè)定蛋白質(zhì)組分是它的主要用途。他的本原理相同于HPLC，就是在高壓條件下(20—200 kg/cm2)，通過(guò)在液相載體中分離物質(zhì)的遷移速率的差異來(lái)進(jìn)行分離純化。

采用HPLC來(lái)對(duì)生物大分子分離純化時(shí)，因?yàn)橐合噍d體通常是有機(jī)溶劑，容易變性失活生物大分子，使得生物大分子的回收率降低。同時(shí)，采用非惰性的不銹鋼來(lái)對(duì)HPLC系統(tǒng)的流通線路進(jìn)行制造，金屬離子工作狀態(tài)下可能會(huì)發(fā)生解離，從而對(duì)某些蛋白質(zhì)組分吸附。

FPLC的層析柱為耐高壓的有機(jī)玻璃管，用耐高壓的非金屬材料制成其它管道，同時(shí)采用惰性液相載體，能夠使蛋白組分安全快速地分離。所以FPLC對(duì)HPLC的操作簡(jiǎn)易、重復(fù)性強(qiáng)、分離速度快等特點(diǎn)加以保留，并且在生物大分子分離純化過(guò)程中分辨率和實(shí)用性更加的高。FPLC有其專用預(yù)裝柱，分子篩、離子交換、疏水層析等各類層析柱也配備了，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、化學(xué)和環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域。

實(shí)驗(yàn)用品

(一)器材

FPLC裝置(Water公司)進(jìn)樣器。

(二)試劑

(1)洗脫緩沖液。

(2)20%乙醇。

(三)材料

若干待測(cè)蛋白質(zhì)樣品。

實(shí)驗(yàn)程序

1.對(duì)儀器連接情況進(jìn)行檢查，將電源開關(guān)打開

2.在控制臺(tái)上對(duì)流速、紙速加以設(shè)計(jì)

3.經(jīng)加樣閥加樣：在Injection位置放置閥桿，樣品使用注射器加入。再扳閥桿至Load位置，樣品進(jìn)入層析柱。

4.對(duì)進(jìn)樣時(shí)間進(jìn)行記錄，之后依次用不同緩沖液洗脫。對(duì)各管組分進(jìn)行收集。

5.結(jié)束實(shí)驗(yàn)之后，以20%乙醇對(duì)管道進(jìn)行沖洗，將電源關(guān)閉，做好記錄 。