酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。

問題：顯色淡，靈敏度偏低

原因1：底物作用時(shí)間不足

解決方法：將時(shí)間延長(zhǎng)到標(biāo)準(zhǔn)時(shí)間。

原因2：樣品使用了疊氮鈉防腐，使酶的活性受到Y(jié)Z

解決方法：不可以使用NaN3對(duì)和酶一起加入的樣樣品進(jìn)行防腐。

原因3：蒸餾水受到污染

解決方法：將受到污染的蒸餾水換成合格的去離子水和蒸餾水。

原因4：沒有配置稀釋比例合適的洗滌液，稀釋的倍數(shù)高于1：20

解決方法：配置稀釋比例合適的洗滌液。

原因5：試劑盒的運(yùn)輸時(shí)間過長(zhǎng)，受到高溫的影響

解決方法：在夏天長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)臅r(shí)候，將時(shí)間縮短，采取降低溫度的方法。

原因6：試劑盒失效

解決方法：失效了的試劑不要使用。

原因7：試劑盒沒有在室溫下平衡

解決方法：在實(shí)驗(yàn)前，將檢測(cè)試劑盒放置在室溫下平衡至少半小時(shí)。

原因8：水浴箱溫度沒有達(dá)到37攝氏度

解決方法：將水浴箱的溫度調(diào)節(jié)到37攝氏度，孵育的時(shí)候應(yīng)當(dāng)盡量少開門。

原因9：孵育時(shí)間不足

解決方法：將定時(shí)鐘校準(zhǔn)，使定時(shí)準(zhǔn)確。

原因10：加入樣品的數(shù)量偏少。

解決方法：將吸液器校準(zhǔn)，緊密結(jié)合吸嘴和移液器，吸嘴保證一 次 性使用。

原因11：酶結(jié)合物加樣量偏少

解決方法：瓶身應(yīng)當(dāng)垂直滴加，使液滴確保Zda。

問題：較差的重復(fù)性

原因：

1.孵育時(shí)間不同

2.洗滌條件不一致

3.操作人員不一致

4.樣品的數(shù)量偏多，耗費(fèi)過長(zhǎng)的加樣時(shí)間

5.加樣量不同

解決方法：

對(duì)于標(biāo)本重復(fù)進(jìn)行測(cè)定，移液器盡量使用同一個(gè)，將吸嘴裝緊，應(yīng)當(dāng)盡可能保持和上一次相同的條件和人員，從而使這些原因?qū)е轮貜?fù)性差的可能性得以排除。