手工測(cè)序以及自動(dòng)測(cè)序均屬于DNA序列測(cè)定，手工測(cè)序可分為maxam-gilbert化學(xué)降解法與sanger雙脫氧鏈終止法，事實(shí)上，目前dna序列分析的主流是自動(dòng)測(cè)序。373型、377型、310型、3700和3100型等多種型號(hào)DNA測(cè)序儀均已經(jīng)被美國(guó)pe abi公司生產(chǎn)出來(lái)了，在這幾款DNA測(cè)序儀中，臨床檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室使用Z多的一種型號(hào)要屬310型。

測(cè)序技術(shù)

高通量測(cè)序技術(shù)又被叫做“下一代”測(cè)序技術(shù)，它的標(biāo)志為可以一次性并行測(cè)定幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子序列。

由于測(cè)序原理和技術(shù)差異、影響力、發(fā)展歷史等，主要包括DNA納米球測(cè)序、離子半導(dǎo)體測(cè)序、454焦磷酸測(cè)序、大規(guī)模并行簽名測(cè)序等

可反轉(zhuǎn)的染料終止法

可反轉(zhuǎn)的染料終止法是由Solexa公司開發(fā)出來(lái)的。首先在與固體介質(zhì)（如玻璃板）交聯(lián)的引物上連接DNA模板，并且擴(kuò)增使得本地微克隆形成。往體系中依次添加四種ddNTPs，在下一種核苷酸添加之前會(huì)將未結(jié)合的ddNTPs沖洗走，這種方法不同于454的焦磷酸測(cè)序，一次只對(duì)一個(gè)堿基進(jìn)行延伸。

454 焦磷酸測(cè)序

并行焦磷酸測(cè)序方法為454公司發(fā)展起來(lái)的。DNA的擴(kuò)增發(fā)生在油溶液包裹的水滴中。剛開始只有一個(gè)鏈接到微珠上的DNA模板分子以及一個(gè)包被大量引物的磁珠包含于一個(gè)水滴中。在特制的PTP板上加載乳狀PCR產(chǎn)物，有上百萬(wàn)個(gè)孔位于板上，每個(gè)微孔只能容納一個(gè)磁珠。dNTP通過(guò)DNA聚合酶往模板上聚合時(shí)，會(huì)有一個(gè)焦磷酸分子釋放出來(lái)。會(huì)有一個(gè)ATP分子由PPi與APS在ATP硫酸化酶的催化作用下生成。在熒光素酶的作用下，熒光素會(huì)被ATP分子氧化成氧化熒光素，與此同時(shí)CCD光學(xué)系統(tǒng)會(huì)捕獲產(chǎn)生的可見光，使一個(gè)特異的檢測(cè)信號(hào)被獲得。信號(hào)強(qiáng)度正相關(guān)于相應(yīng)的堿基數(shù)目，將四種dNTP按照按順序循環(huán)添加，將發(fā)生時(shí)間以及信號(hào)強(qiáng)度讀取出來(lái)，使DNA序列測(cè)定得以實(shí)現(xiàn)。

大規(guī)模并行簽名測(cè)序

大規(guī)模并行簽名測(cè)序技術(shù)是90年代由Lynx Therapeutics公司發(fā)展起來(lái)的?！跋乱淮睖y(cè)序技術(shù)發(fā)展的先驅(qū)，即是大規(guī)模并行簽名測(cè)序。

大規(guī)模并行簽名測(cè)序?yàn)橐环N以磁珠和接頭連接和解碼的復(fù)雜技術(shù)，具有較短的測(cè)定結(jié)果，在轉(zhuǎn)錄組測(cè)序時(shí)常常被使用，對(duì)基因表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定。大規(guī)模并行簽名測(cè)序測(cè)定結(jié)果有序列偏好性從而使DNA中某些特定序列容易丟失，并且具有較為復(fù)雜的操作，新的方法已經(jīng)逐漸將其替代。

聚合酶克隆

聚合酶克隆為05年哈佛George Church實(shí)驗(yàn)室發(fā)展起來(lái)的，其為以自動(dòng)顯微鏡以及乳化PCR等等技術(shù)為基礎(chǔ)的測(cè)序方法。ABI公司的SOLiD測(cè)序技術(shù)平臺(tái)已經(jīng)整合了相關(guān)技術(shù)。

臨床應(yīng)用

1、應(yīng)用于腫瘤診斷

遺傳基因和環(huán)境因素共同作用使腫瘤發(fā)生，內(nèi)因是遺傳基因，和腫瘤易感基因是否在人體內(nèi)相關(guān)聯(lián)。人體內(nèi)是否存在腫瘤易感基因或家族聚集性的致癌因素能夠通過(guò)腫瘤易感基因的檢測(cè)檢測(cè)出來(lái)。

2、應(yīng)用于藥物易感基因

相同的藥物有不同的用藥結(jié)果可能是由于個(gè)體基因型存在差異，通過(guò)對(duì)患者相應(yīng)的基因型進(jìn)行確定能夠使更準(zhǔn)確的用藥得以實(shí)現(xiàn)，使用藥效果得到更大程度的提高。

3、應(yīng)用于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查

胎兒的基因能夠通過(guò)對(duì)孕婦血液的抽取檢測(cè)出來(lái)，胎兒產(chǎn)前篩查可以通過(guò)基因測(cè)序進(jìn)行。使得胎兒的健康狀態(tài)提前知曉。

4.應(yīng)用于感染性疾病診斷

測(cè)序技術(shù)能夠?qū)A基序列進(jìn)行精確的分析，通過(guò)序列比對(duì)，直接行鑒定、分型和溯源各種病原體，使某一感染性疾病對(duì)應(yīng)病原體的基因序列得以明確，使得用藥和預(yù)防能夠有針對(duì)性，使用藥的有效性和安全性得到提高。同時(shí)新型病原體的發(fā)現(xiàn)也能夠使用基因測(cè)，預(yù)防工作可以做得更加的好。

5、應(yīng)用于遺傳性疾病診斷

因?yàn)榛蛲蛔円鸬募膊【哂羞z傳性和終身性的特點(diǎn)，如果患上這種病，會(huì)給自身和整個(gè)家族帶來(lái)痛苦。通過(guò)對(duì)被檢人員進(jìn)行基因測(cè)序，對(duì)基因突變情況進(jìn)行查看，判斷基因遺傳病是否存在，或者對(duì)后代患病的概率進(jìn)行推斷，以便指導(dǎo)婚育，使遺傳性疾病的發(fā)病得以減少。