將熒光基團加入到PCR反應體系中，通過不斷累積熒光信號從而使對PCR全程的實時監(jiān)測實現(xiàn)，再根據(jù)標準曲線定量分析未知模板的方法，即是熒光定量PCR技術。在實時熒光定量PCR中，實時檢測全程PCR擴增過程，按照反應時間和熒光信號的變化能夠將一條曲線繪制成。

定量方法

在實時熒光PCR中，模板的定量包括相對定量和定量2種方法。相對定量是指在一定樣品中靶序列相對于另一參照序列的量的變化。定量通常根據(jù)已知的標準曲線來使我們所感興趣基因的拷貝數(shù)確定。

1.相對定量法

相對定量法又分為比較Ct值的相對定量法和比較標準曲線的相對定量法兩種方法。

（1）比較Ct值的相對定量法

該方法是同時擴增待測靶基因片段和內參照基因片段，擴增反應既能夠在兩個反應管中也能夠在一個反應管中進行，并且通過兩者的ct值的差來測量。在采用此方法過程中，相對量的計算需要用到數(shù)學公式。靶基因和內源控制物的擴增效率大體上相同是該方法的前提。因此應用過程中效率的偏移會或多或少影響實際拷貝數(shù)的估計。所以，反應體系的優(yōu)化的加強是目的基因和內參基因的擴增效率相等的保障。

（2）比較標準曲線的相對定量法

相對定量法指的是在一定樣本中，靶序列相對于另一參照樣本量變化情況進行分析的方法，在使用該方法過程中，參照物必須準備，因此定量標準曲線的繪制比較容易，只要確定了標準品稀釋度就能夠進行對比分析。

2.定量

定量是通過已知的標準曲線推算出未知樣本的量的方法。該方法，需要對標準樣品的濃度情況進行明確，再將標準樣品稀釋。分為幾個不同梯度濃度然后進行反應測試。縱坐標為測得的Ct值，橫坐標為標準品拷貝數(shù)的對數(shù)值，從而將標準曲線繪制出來，基于標準曲線，在對未知樣品定量分析的過程中樣起始拷貝數(shù)能夠通過ct值被推算出來。

應用

食品安全

食源微生物、轉基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌、食品過敏源等檢測。

科學研究

醫(yī)學、生物、農牧相關分子生物學的定量研究。

臨床疾病診斷

腫瘤標志物及瘤基因檢測實現(xiàn)腫瘤病診斷；遺傳基因檢測實現(xiàn)遺傳病診斷；各型肝炎、結核、性病、艾滋病、禽流感等傳染病診斷和LX評價；地中海貧血、性別發(fā)育異常、智力低下綜合癥、血友病、胎兒畸形等優(yōu)生優(yōu)育檢測。

動物疾病檢測

禽流感、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、新城疫、口蹄疫、豬瘟、寄生蟲病等、炭疽芽孢桿菌。

應用行業(yè)

各級各類YL機構CDC、檢驗檢疫局、獸醫(yī)站、大學及研究所、食品企業(yè)及乳品廠等。