大腸埃希菌是人體不可缺少單細(xì)胞生物。大腸埃希菌，俗名大腸桿菌（ 革蘭氏陰性短桿菌），周身鞭毛，能運(yùn)動，無芽。是人和動物腸道中的正常棲居菌。大腸埃希菌的致病物質(zhì)之一是血漿凝固酶。下面就讓小編帶你了解一下大腸桿菌生長曲線的測定。

基本原理

向恒容積的液體培養(yǎng)基里進(jìn)行一定量的細(xì)菌接種，如果其培養(yǎng)條件適宜，那么該群體就會有規(guī)律的增殖，細(xì)菌的生長曲線指的是以細(xì)胞數(shù)量的對數(shù)或者生長速率作為縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)的時(shí)間作為橫坐標(biāo)繪制而成的曲線。此曲線包含延滯期、指數(shù)期、穩(wěn)定期以及衰亡期四個(gè)階段。

使用分光光度計(jì)進(jìn)行光電比濁測定不同培養(yǎng)時(shí)間下細(xì)菌懸浮液的光密度值，然后對生長曲線進(jìn)行繪制。

實(shí)驗(yàn)材料

1.培養(yǎng)基：LB液體培養(yǎng)基  2.菌種：大腸桿菌

3.儀器與耗材：無菌吸管、無菌試管、恒溫?fù)u床、722型分光光度計(jì)。

操作步驟

1.配置100毫升LB液體培養(yǎng)基，用1支試管（每支5毫升），向250毫升的三角瓶中裝入剩余的培養(yǎng)基，在121攝氏度下進(jìn)行20分鐘的滅菌。

2.取無菌大試管11支，將培養(yǎng)時(shí)間分別在這11支大試管上用記號筆標(biāo)記出，就是0h、1.5h、3h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h以及20h。

3.使用5毫升無菌吸管往裝有LB液體培養(yǎng)基的三角瓶里轉(zhuǎn)入培養(yǎng)了12個(gè)小時(shí)的2.5毫升大腸桿菌培養(yǎng)液?；靹蚝笸鶚?biāo)記過的11支大試管內(nèi)放入5毫升混合液。

4.往搖床上放上已經(jīng)接種的試管經(jīng)過37攝氏度200rpm振蕩培養(yǎng)，在相應(yīng)的時(shí)間取出試管放入冰箱，Z后一起對OD600的值進(jìn)行測定。

5.在進(jìn)行光密度的測定時(shí)，將沒有接種的LB液體培養(yǎng)基作為空白對照，從開始取出的培養(yǎng)液依次進(jìn)行測定，對于細(xì)胞密度比較大的培養(yǎng)液需要使用液體培養(yǎng)基后再進(jìn)行測定，讓OD600的值保持在0.1到0.65的范圍以內(nèi)。

注意事項(xiàng)

1、選用的試管規(guī)格必須一致。

2.每支試管需要有相同的裝液量（5ml/支）。

3.在向比色皿中加入混勻的菌懸液后應(yīng)該快速地對OD的值進(jìn)行讀取。

4.對比色皿進(jìn)行保護(hù)，不能磨損其透光面，不要直接使用手指接觸。

5.在未測樣品時(shí)應(yīng)該及時(shí)打開分光光度計(jì)的蓋子。