核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動完成的儀器。其在環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、疾病控制ZX、臨床疾病診斷、生物學(xué)研究以及畜牧業(yè)等多種領(lǐng)域得到廣泛地應(yīng)用。下面就讓小編帶你了解一下總RNA提取方法。

原理

在中性條件下，核酸由于磷酸基解離而帶負(fù)電荷，這一部分因為水化而在水中溶解。但是，在酸性條件下，磷酸基的負(fù)電荷消失，水溶性降低。所以，經(jīng)過酸性酚的處理，DNA移向酚層，而RNA有親水性移向水層。

異硫氰酸胍以及苯酚為TRlzol試劑中的主要成分，其中，異硫氰酸胍能夠?qū)⒓毎呀?，對解離蛋白體起到促進作用，分離蛋白質(zhì)和RNA，并且在溶液中釋放RNA。當(dāng)將氯仿加入時，它能夠進行酸性苯酚的抽提，而酸性苯酚能夠?qū)NA進入水相起到促進作用，離心之后能夠使水相層和有機層形成，如此，就能夠分離開依然留在有機相中的DNA和蛋白質(zhì)與RNA。有幾層主要為DNA和蛋白質(zhì)，水相層為RNA。

實驗準(zhǔn)備

1.器材

凝膠成像系統(tǒng)、電泳設(shè)備、電子天平、馬克筆、定時器、移液器、紫外分光光度計、酒精噴霧、臺式高速離心機、微波爐、錐形瓶、試劑瓶、量筒等。

2.耗材

一次性手套、一次性口罩、各規(guī)格Tip、1.5毫升EP管。

3.試劑

DEPCH2O、75％乙醇、異丙醇、氯仿、TRLZOL

4.實驗材料

新鮮細胞

去除RNase污染

1.操作時，穿實驗服、戴手套、口罩以及帽子。

2.使用專用器械、專用RNA操作室。

3.試劑處理：新開無水乙醇、氯仿、異丙醇后RNA專用。配制75％酒精使用0.1％DEPC水。

4.塑料器皿處理：先使用0.1％DEPC水溶液將其浸泡過夜，之后再使用高溫高壓滅菌。

5.玻璃器皿處理：必須在200攝氏度下烘烤量筒、試劑瓶等玻璃器皿超過2h。

樣本準(zhǔn)備

血液樣本

將淋巴細胞從新鮮血液中分離出來，待用或者將TRlzol加入后在-80攝氏度下將細胞沉淀凍存起來。

細胞樣本

新鮮收集，待用或者將TRlzol加入后在-80攝氏度下將細胞沉淀凍存起來。

植物或者動物組織樣本

新鮮取材或者組織立體后液氮速凍，在-80攝氏度或者液氮中保存，應(yīng)當(dāng)小份分裝從而使反復(fù)凍融得以避免。

實驗步驟

收集-裂解變性-抽提-上層溶液-異丙醇沉淀-離心洗滌-干燥溶解-RNA溶液。