分子雜交（molecular hybridization）是指使單鏈核酸堿基序列確定的技術(shù)。待測(cè)單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸（叫做探針）間通過(guò)堿基配對(duì)使可檢出的雙螺旋片段形成為分子雜交的基本原理。下面就讓小編帶你了解一下Southern雜交方法。

預(yù)雜交

一個(gè)預(yù)雜交的過(guò)程必須在將探針和固定在膜上的DNA片段雜交以前先進(jìn)行。由于既然可以和DNA片段的膜結(jié)合，那么同樣也可以和探針DNA結(jié)合。因此，在雜交以前，必須封閉所有結(jié)合DNA的位點(diǎn)。這即是預(yù)雜交的原因。

在 一個(gè)水浴搖床的封閉塑料袋中浸泡轉(zhuǎn)印后的濾膜進(jìn)行預(yù)雜交，有預(yù)雜交液在袋中，在膜上使預(yù)雜交液不斷地流動(dòng)。事實(shí)上，沒(méi)有探針的雜交液就是預(yù)雜交液，預(yù)雜交液中的大分子能夠?qū)⒛ど纤蟹翘禺愋晕轿稽c(diǎn)封閉。

雜交

雙鏈DNA探針需要加熱并行成單鏈以后再進(jìn)行雜交，在預(yù)雜交液中對(duì)轉(zhuǎn)印后的濾膜進(jìn)行溫育4-6個(gè)小時(shí)，就能夠?qū)⒈順?biāo)記探針DNA加入，也就是雜交反應(yīng)能夠進(jìn)行了。

雜交反應(yīng)進(jìn)行的緩沖鹽溶液的離子強(qiáng)度相對(duì)而言均比較高。溫度越高，離子強(qiáng)度越高，那么雜交就越加的嚴(yán)格。也就是說(shuō)，要想雜交雜交反應(yīng)在低鹽高溫下進(jìn)行，那么探針和待測(cè)順序之間的同源性必須非常的高。

洗膜

在洗膜過(guò)程中，需要不斷振蕩，不斷使用放射性檢測(cè)儀歲膜上的放射強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)，如果放射強(qiáng)度指示數(shù)值高于環(huán)境背景1-2倍，那么洗膜立刻停止。

在2SSC中浸入洗完的膜兩分鐘，將膜取出，使用濾紙將膜表面的水分吸干，并且使用保鮮膜將其包裹，值得一提的是，不能夠有氣泡存在于保鮮膜和NC膜之間。