光阻法VS顯微計數(shù)法——脂質(zhì)體注射液不溶性微粒檢測不同方法測試對比

研究背景：

注射液的不溶性微粒檢測項是中國藥典中的必需檢測項，在2020版《中國藥典0903 不溶性微粒檢查》章節(jié)中推薦了兩種檢測方法，包括光阻法和顯微計數(shù)法。法規(guī)中對于不同類型的樣品應(yīng)該采用哪種方法進行檢測給出了一個簡短說明，該文件中指出：光阻法不適用于黏度過高和易析出結(jié)晶的制劑，也不適用于進入傳感器時易產(chǎn)生氣泡的注射劑。

然而隨著各種新型制劑的出現(xiàn)，僅依據(jù)上述對于樣品性狀的描述，很難判斷應(yīng)該采用哪種方法進行樣品的不溶性微粒檢測。其中脂質(zhì)體類注射劑在近些年內(nèi)發(fā)展的尤為迅速，因為它們的形態(tài)與細胞類似，并且可以通過一定的設(shè)計結(jié)合各種物質(zhì)，成為藥物遞送技術(shù)的理想載體。本文將對一些脂質(zhì)體注射液采用不同的方法進行不溶性微粒檢測，通過不同檢測方法的結(jié)果對比，以找出脂質(zhì)體類注射液不溶微粒檢測的Zjia方案。

測試案例：

案例一：某公司脂質(zhì)體注射液（樣品裝量信息：0.5毫升/瓶*4批）

光阻法測試方案：樣品原液0.5毫升稀釋10倍之后進行測試，每次測試取樣1毫升，連續(xù)測四次，舍棄第yi次測試結(jié)果，Z終統(tǒng)計每容器中尺寸≥10 μm的顆粒數(shù)以及≥25 μm的顆粒數(shù)；

顯微計數(shù)法測試方案：樣品原液進行測試，統(tǒng)計每容器中尺寸≥10 μm的顆粒數(shù)以及≥25 μm的顆粒數(shù)；

圖1：（a）不同批次樣品光阻法測試每次取樣的測試結(jié)果；（b）Z終統(tǒng)計的每容器中的不同尺寸范圍的微粒數(shù)量；

圖2：顯微計數(shù)法測試結(jié)果，每容器中不同尺寸范圍的微粒數(shù)量；

在兩項檢查中可以看到樣品中的不溶性微粒數(shù)量都在藥典要求范圍之內(nèi)，但是該樣品進行光阻法測試前對樣品進行了稀釋操作，可能會引發(fā)樣品內(nèi)的顆粒數(shù)量發(fā)生變化。

案例二：某公司的脂質(zhì)納米粒（樣品裝量信息：1.5 mL*1批）

光阻法測試方案：樣品原液測試，單次進樣量為0.1 mL，連續(xù)測四次，舍棄第yi次結(jié)果，Z終統(tǒng)計每毫升中尺寸≥10 μm的顆粒數(shù)以及≥25 μm的顆粒數(shù)；

顯微計數(shù)法測試方案：樣品原液進行測試，統(tǒng)計每毫升中尺寸≥10 μm的顆粒數(shù)以及≥25 μm的顆粒數(shù)；

圖3：采用光阻法和顯微計數(shù)法對樣品進行不溶性微粒檢測的不同尺寸范圍的顆粒數(shù)量統(tǒng)計

該樣品采用兩種方法進行測試的結(jié)果測試對比差距較大，光阻法測試結(jié)果中不同尺寸范圍的顆粒比較少，這歸因于測試過程中的進樣量比較少，可能無法完整覆蓋光阻法設(shè)備的光學檢測窗口；另外通過顯微計數(shù)法測試結(jié)果的原始圖片數(shù)據(jù)可以看出，樣品中較大尺寸顆粒主要包括纖維、藥物聚集及膠塞等，這些顆粒的存在可能是造成樣品中不溶性微粒增多的原因之一。

數(shù)據(jù)分析與討論：

從上面的數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果分析來講，脂質(zhì)體類樣品更適合用顯微計數(shù)法來進行樣品的不溶性微粒檢測，其原因如下：

1、脂質(zhì)體類樣品裝量較小，通常為幾毫升，甚至不到一毫升，樣品的稀釋可能會對樣品體系里的顆粒數(shù)量產(chǎn)生影響，另外少量的樣品不一定能覆蓋光阻法設(shè)備的檢測窗口，從而會產(chǎn)生測試誤差；

2、脂質(zhì)體類樣品具有一定的濁度，采用光阻法進行測試時，會形成測量誤差，可以看到單個樣品每次測試數(shù)據(jù)不穩(wěn)定，這主要是歸因于光阻法原理設(shè)備測試渾濁樣品粒度存在固有缺陷；

3、脂質(zhì)體類樣品中的顆粒大小會隨物理環(huán)境的變化形成聚集態(tài)，圖像法粒度儀可以直接觀察到這些顆粒，亦可以觀察到外來顆粒，有利于顆粒的溯源分析；

總結(jié)：

回歸到藥典法規(guī)文件的要求，文件中指出：當光阻法的測定結(jié)果不符合規(guī)定或者供試品不適用于用光阻法進行測定時，應(yīng)采用顯微計數(shù)法進行檢測，并且以顯微計數(shù)法的測定結(jié)果為判定依據(jù)。經(jīng)過對脂質(zhì)體案例測試結(jié)果的分析可以看出，脂質(zhì)體類注射劑的不溶性微粒檢查項應(yīng)優(yōu)先推薦顯微計數(shù)法。

相關(guān)設(shè)備介紹：

YH-LEIP-0201 光阻法不溶性微粒分析儀

√完全滿足《中國藥典》要求；

√可直接檢測注射液、無菌液、輸液器具及包材等不溶性微粒的數(shù)量及大??；

√可檢測有色樣品。

YH-MIP-0205 Pro顯微計數(shù)法不溶性微粒分析儀

√ 全濾膜自動掃描，操作簡單，節(jié)約時間；

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√ 符合各國藥典/ 國標法規(guī)，一鍵自動出具對應(yīng)報告；

√ 符合 21CFR Part11 及 GMP 對數(shù)據(jù)完整性的要求。

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