背  景

紫外-可見光譜法是一種廣泛應用于質量保證/質量控制（QA/QC）和藥物研究領域的分析技術。為保證紫外-可見分光光度計分析結果合規(guī)有效，儀器的確認就顯得尤為重要。

2022 年 12 月 1 日起，美國藥典章節(jié) <857> 紫外可見光譜學的新修訂版開始執(zhí)行。2020 年 1 月 1 日起，歐洲藥典（Ph. Eur. 第 2.2.25 章）《紫外可見分光光度法》開始執(zhí)行。這兩個法規(guī)都描述了如何驗證紫外-可見分光光度計的分析性能是否適用于預期的分析操作范圍。

安捷倫 ACE 軟件中Z 新版本 UV-VIS 確認方案，具有滿足這些美國藥典和歐洲藥典當前要求的必要測試，以幫助客戶完成儀器確認，滿足法規(guī)監(jiān)管需求。

Z 新法規(guī)要求下

安捷倫 ACE 方案如何滿足法規(guī)要求

波長控制

USP 和 Ph. Eur. 列出了三種可用于確定波長準確度和精密度的三種標準物質：原子線光譜、稀土氧化物溶液、稀土氧化物玻璃。

安捷倫 ACE 方案：

標準測試：波長準確度-原子線光源、波長準確度-氧化鈥高氯酸

可選方案：波長準確度-釹鐠、波長準確度和重現(xiàn)性-鈰硫酸、波長準確度-汞線、波長準確度和重現(xiàn)性-氧化鈥玻璃濾光片

ACE 方案中的兩個標準波長準確度和重現(xiàn)性測試使用原子線光譜和氧化鈥溶液作為標準物質。這兩個測試確定 UV-Vis 分光光度計的 UV 和可見光范圍的準確性和重現(xiàn)性，大多數(shù)藥典 UV-Vis 方法都在這些范圍內(nèi)。如上圖所示，如有必要，可選測試仍然可使用 USP 和 Ph.Eur. 中推薦的標準物質確定剩余的使用范圍。

吸光度的控制

USP 和 Ph. Eur.：在預期光譜范圍內(nèi)的適當波數(shù)下使用合適的濾光片/濾光液確認系統(tǒng)的吸光度準確性。建議使用多種具有不同吸光度水平的濾光片/濾光液測試相同波長下的吸光度準確度。

ACE 方案光度準確度和重現(xiàn)性

• UV（200-400nm）標準測試

重鉻酸鉀測試：在 40-120 mg/L 3 個濃度，規(guī)定的波長下測量，提供了至少三個吸光度水平。

• VIS（400–780 nm）可選測試

NIST 玻璃濾鏡測試通過使用三個獨立的玻璃濾光片來滿足提供至少三個吸光度級別的要求，這三個濾光片分別在規(guī)定的波長 440、465、546.1、590 和 635 nm 處進行測量。

對于上述每項測試，吸光度的準確度在每個濃度、濾光片、每個規(guī)定的波長值下確定。精密度(或重現(xiàn)性)也是由在每個濃度、濾光片、每個規(guī)定的波長值下的至少 6 個測量值。精確度（或重現(xiàn)性）也是使用至少六個測量值來計算的，每個濃度或濾光器水平在每個規(guī)定的波長值。

光度測量線性控制

USP 和 Ph. Eur.：使用合適的有證標準物質，如果相關系數(shù)（R2）不小于 0.999，則光度測量線性可接受。

ACE 方案：

標準測試“光度線性-重鉻酸鉀”測試符合 Ph.Eur. 客戶對用于在紫外線區(qū)域進行測量的儀器的當前線性要求。

可選的光度線性- NIST 玻璃濾光片測試也可用于確認用于在可見光區(qū)域進行測量的儀器。

雜散光控制

USP 和 Ph. Eur.：用合適的液體濾光片或濾光液，規(guī)定了在給定的波長下檢測出每個波長的光譜范圍及推薦了四種濾光液。

ACE 方案：

標準測試“雜散光-氯化鉀（KCl）、可選測試：雜散光-碘化鈉（NaI）、雜散光-亞硝酸鈉（NaNO2）、雜散光-丙酮。

客戶可根據(jù)監(jiān)管法規(guī)和日常使用要求，選擇使用標準測試和可選測試進行雜散光項目的測試。

分辨率的控制

USP 和 Ph. Eur.：以正己烷為參照物，計算了 0.002%v/v 甲苯在正己烷（UV 級）標準物質中的吸光度比，Z 大值在 269 nm 左右，Z 小值在 266 nm 左右。USP 驗收標準規(guī)定，當使用小于 2 nm 的光譜帶寬（這是大多數(shù)簡明定量目的的常見光譜帶寬）時，計算的吸光度比 ≥ 為 1.3。

ACE 方案：

使用和上述相同的程序來確定分辨率，但有更嚴格的限值，即 ≥ 1.6。

結 論

對于制藥實驗室而言，確保紫外-可見分光光度計能夠按要求運行，滿足相應的 QA/QC 測量需求至關重要。全 球藥典對如何測試儀器的預期操作范圍進行了規(guī)定，安捷倫將定期根據(jù)法規(guī)要求更新確認方案，以幫助客戶滿足合規(guī)要求。