聚山梨酯 (PS，吐溫) 作為非離子表面活性劑，對治療性蛋白藥物的穩(wěn)定性起著至關重要的作用。聚山梨酯是異質的混合物，容易通過多種途徑發(fā)生降解。聚山梨酯的降解不僅降低了表面活性劑的有效濃度，而且還與可見異物/不溶性微粒的形成有關，影響了藥品有效性和安全性。

圖 1. 抗體制劑中吐溫降解通路與可見異物/不溶性微粒風險示意圖

聚山梨酯兩個主要降解途徑是氧化降解和酶水解。酶水解已被公認為高濃度抗體制劑中吐溫降解的主要途徑，因為宿主細胞蛋白（HCP）中的脂肪酶、酯酶等可以在酯鍵處裂解聚山梨酯，高濃度制劑會增加可水解聚山梨酯的宿主細胞蛋白的濃度。不同途徑之間的降解模式有顯著的不同，降解產物的種類可提示降解作用機制。游離脂肪酸（FFAs）是 PS 的主要水解產物，其中難溶的 FFAs 容易沉淀成顆粒，從而降低制劑的穩(wěn)定性。氧化的降解產物包括過氧化物、醛、酮、脂肪酸酯和游離脂肪酸，其中游離脂肪酸為次要降解產物。

方法難點

隨著監(jiān)管要求的日益嚴格和行業(yè)意識的提升，在開發(fā)的早期階段進行更全面的表征分析至關重要。 但是，使用傳統的 C18 或 C8 HPLC 柱可能難以將游離脂肪酸與聚山梨酯單酯分離，通常需要超過 30 分鐘才能達到基線分離。混合模式色譜柱無法有效進行此類分析，因為它們無法保留聚山梨酯的降解產物，這些降解產物在死體積內就會被洗脫。

理想情況下，這種額外的檢測方法應易于實施，提供易于解讀的數據，實現全面的表征，并盡可能提高通量。

安捷倫高通量應用方案-AdvanceBio 表面活性劑色譜柱

AdvanceBio 表面活性劑分析生物色譜柱在設計時充分考慮了聚山梨酯類分析的痛點，自發(fā)布以來，其高性能廣受客戶好評。現已經廣泛應用于表面活性劑的水解與氧化分析。

在實際應用中，AdvanceBio 表面活性劑分析 HPLC 柱表現出以下多維優(yōu)勢：

更高分離度：可更清晰地分離降解產物峰；

更短分析時間：壓縮至 10 分鐘，可顯著提升樣品通量；

更高效率：可更早發(fā)現降解趨勢，提升質量控制；

更環(huán)保：可減少溶劑使用，同步降低運營成本。

應用案例

案例一：通過 LC/ELSD 表征聚山梨酯組分

由于聚山梨酯缺乏發(fā)色團，因此可以使用通用檢測器（例如蒸發(fā)光散射檢測器 (ELSD)）進行檢測。將 PS 20 和 PS 80 以 100 ppm 加標至制劑緩沖液中，將油酸以 10 ppm 加標至制劑緩沖液中，將月桂酸以 5 ppm 加標至制劑緩沖液中，進行重現性和殘留研究。

新方法能夠提供有關聚山梨酯完整性更詳細的信息，游離脂肪酸與聚山梨酯單酯峰完全分離。采用該耗時 10 分鐘的方法時，為聚山梨酯水解提供了一種高效的篩查工具。

案例二：通過 LC/MS 簡化聚山梨酯氧化副產物的篩查

使用 AdvanceBio 表面活性劑分析 HPLC 色譜柱、Agilent 6546LC/Q-TOF 系統、Agilent MassHunter 定性分析軟件 12.0 和 PolyMatch 軟件鑒定聚山梨酯氧化標志物。

將聚山梨酯 80 與 3% (w/v) 過氧化氫在 40°C 水浴中孵育過夜。在氧化樣品的色譜圖中，單酯、二酯和三酯洗脫位置處的信號降低以及色譜圖前面一段信號略微增加，表明存在一定程度的降解。

結語

新 Agilent AdvanceBio 表面活性劑分析 HPLC 柱的方法優(yōu)點能夠提供有關聚山梨酯完整性更詳細的信息，以及識別宿主細胞蛋白殘留的關鍵因素，從而開展進一步調查。

標簽：安捷倫