生物液相色譜和氨基酸直接分析技術(shù) 生物液相主要應(yīng)用 糖類(lèi) 帶積分安培檢測(cè)的GX陰離子色譜可以直接定量測(cè)定 以下物質(zhì): l 糖蛋白 單糖和低聚糖 l 唾液酸 l 發(fā)酵培養(yǎng)基和食品中的氨基糖和乙二醇 l 多聚糖 氨基酸 生物液相氨基酸分析儀(AAA-DirectTM)的配置可對(duì)以 下物質(zhì)直接測(cè)定(無(wú)需柱前和柱后衍生): l 發(fā)酵液,細(xì)胞培養(yǎng)液,體液和食物.飲料中的 氨基酸和糖 l 蛋白質(zhì)水解中的氨基酸糖和氨基糖圖譜 蛋白質(zhì)和肽 高性能的色譜柱配合淋洗液自動(dòng)發(fā)生裝置使分離效果 大大提高: l 監(jiān)視由于唾液酰化作用,羧基末端截?cái)?氨 基末端焦谷氨酸結(jié)構(gòu),天冬氨酸的脫酰胺作用，以及色 氨酸和蛋氨酸的氧化引起的蛋白質(zhì)成分的差異. l 繪制肽圖 核酸 在多種變化條件下分析核酸 l 正常的(8-30mer)和超長(zhǎng)的(30-70mer)寡 核苷酸單堿基的不同 l 超螺旋質(zhì)粒和線(xiàn)性DNA的分離 l 聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物和硫代磷酸（抗制敏寡 核苷酸）分析 小生物分子 生物液相離子交換柱和超級(jí)檢測(cè)技術(shù)的結(jié)合給以下物 質(zhì)的分析提供了Z高的分辨率和靈敏度 l 肌醇磷酸 l 生物活性胺 l 體液中的有機(jī)酸和無(wú)機(jī)離子 l 維生素 l 抗生素 BioLC--可以滿(mǎn)足全部生物液相需求的系統(tǒng) 生物液相 在為生物分子分析提供**色譜設(shè)計(jì)中，戴安公司突 破了其它GX液相系統(tǒng)的極限使用惰性非金屬的 PEEK流路，消除了對(duì)生物相容性和腐蝕的擔(dān)心，使用 者可以很自由地為分離選擇**的緩沖液生物液相 系統(tǒng)提供了具有Zda靈活性的模塊組件設(shè)計(jì) 自動(dòng)進(jìn)樣器 AS50自動(dòng)進(jìn)樣器具有一個(gè)經(jīng)校驗(yàn)的可移動(dòng)的注射針， 對(duì)少到1L體積的樣品量仍可保證很高的注射精度準(zhǔn) 確度可變的注射體積減少了樣品稀釋的需求，并且 提供穩(wěn)定的操作，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于0.5％，珀?duì)柼?冷可保護(hù)不穩(wěn)定的樣品AS50Z多可存放100個(gè)1.5ml 的樣品瓶 色譜箱 色譜箱內(nèi)有進(jìn)樣閥，柱選擇閥，分析柱，保護(hù)柱和檢 測(cè)池所有組件均設(shè)計(jì)成Z小的死體積極ng確的溫度 控制適合對(duì)溫度敏感的樣品的應(yīng)用 優(yōu)良的泵系統(tǒng) GS50是生物液相系統(tǒng)的泵系統(tǒng)全PEEK流路的雙 柱塞串聯(lián)梯度泵，適合使用2-4.6mm的色譜柱；該泵 可以提供平滑的無(wú)脈沖流動(dòng)以及極ng確的比例和優(yōu)良 的流動(dòng)精度，可滿(mǎn)足敏感穩(wěn)定的生物液相的要求； 泵的死體積小，可提供極ng確的梯度 多種檢測(cè)器 生物液相系統(tǒng)可以使用3種檢測(cè)器檢測(cè)器可提供優(yōu)良 的信噪比和在廣的研究范圍內(nèi)Zda的靈敏度每個(gè)檢 測(cè)器均提供友好的用戶(hù)服務(wù)診斷和屏幕簡(jiǎn)單校正利 用PeakNetTM數(shù)據(jù)管理軟件可進(jìn)行全自動(dòng)檢測(cè) 電化學(xué)檢測(cè)器 是一個(gè)功能強(qiáng)大的并且多用途的檢測(cè)器，提供三 種模式的電化學(xué)檢測(cè)它可以提供脈沖安培直流安 培和YZ型電導(dǎo)檢測(cè) 直流安培 直流安培檢測(cè)器是高靈敏度檢測(cè)器，適用于苯酚兒 茶酚胺氰化物硫化物碘化物和其他分析物的應(yīng) 用連續(xù)直流電壓作用于工作電極進(jìn)行電化學(xué)氧化或 電解目標(biāo)分析物通過(guò)測(cè)量電化學(xué)反應(yīng)的電流達(dá)到定 量分析 脈沖安培 為避免直流安培電極被糖污染，開(kāi)發(fā)了脈沖安培檢測(cè) 器，脈沖安培檢測(cè)利用依次重復(fù)的四重脈沖電位可以 使電極表面保持清潔并確保檢測(cè)器的連續(xù)響應(yīng)氨基 酸乙醇甘醇醛類(lèi)和烷醇胺都可以通過(guò)該種方法 檢測(cè)脈沖安培檢測(cè)（PAD）可提供高的靈敏度和特異 性，無(wú)需衍生反應(yīng) YZ型電導(dǎo) 電導(dǎo)檢測(cè)器用于檢測(cè)無(wú)機(jī)陰陽(yáng)離子如：CL-SO42- F-Na+K+ ，也可檢測(cè)有機(jī)離子如：有機(jī)酸磷 酸和胺類(lèi)生物液相獨(dú)有的離子交換柱配備YZ型電 導(dǎo)檢測(cè)模式可以進(jìn)行極低含量的檢測(cè)并具有非常高的 靈敏度 AD25 紫外可見(jiàn)檢測(cè)器 紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器是應(yīng)用于蛋白多肽核酸維 生素或其他生物小分子的非常常規(guī)的檢測(cè)器AD25檢 測(cè)器是具有雙光束多波長(zhǎng)的光度計(jì)，波長(zhǎng)范圍190- 800nm配備先進(jìn)的纖維光學(xué)技術(shù)可提供簡(jiǎn)單可靠的操 作；內(nèi)置的氧化鈥自動(dòng)波長(zhǎng)矯正功能，可獲得更好的 準(zhǔn)確度；非金屬流路可消除由金屬引起的生物分子變 性；前開(kāi)門(mén)方式便于對(duì)檢測(cè)器中的氘燈鎢燈和流通 池的維護(hù) PDA-100二極管陣列檢測(cè)器 二極管陣列（PDA）檢測(cè)器主要用于對(duì)蛋白和多肽的檢 測(cè)PDA所能提供的關(guān)于分析物的純度和鑒別的信息超 過(guò)傳統(tǒng)多波長(zhǎng)檢測(cè)器PDA-100是具有高分辯率低漂 移的GX檢測(cè)器它的雙光源可提供從190-800nm范 圍內(nèi)的全部波長(zhǎng)使用這種檢測(cè)器，每個(gè)樣品的掃描 時(shí)間只要幾毫秒，光譜的波長(zhǎng)時(shí)間和光度信息是 連續(xù)的，增加了單個(gè)樣品分析的信息量 通過(guò)對(duì)分析物譜圖和儲(chǔ)存在PeakNet6軟件中的譜圖進(jìn) 行比較可鑒別分析物配有雙燈的PDA-100檢測(cè)器可 提供非常低的基線(xiàn)噪聲 色譜工作站PeakNet6 PeakNet6是Z有效的色譜數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)作為色譜工 作站，PeakNet6可為單臺(tái)儀器提供服務(wù)也可同時(shí)管理 多臺(tái)儀器軟件可突出系統(tǒng)優(yōu)勢(shì)，具有強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處 理能力儀器控制能力安全性以及網(wǎng)絡(luò)工作能力 BioLC--測(cè)定生物分子的強(qiáng)有力的方法 糖類(lèi)和糖蛋白的分析 戴安公司的 CarboPacGX陰離子交換柱（HPAE）配 合脈沖安培檢測(cè)器（PAD）徹底改變了對(duì)糖類(lèi)的測(cè)定 作為測(cè)定由各種配糖體（如糖酯糖肽低聚糖或氨 基葡萄糖）和其它生物源派生來(lái)的糖類(lèi)的**方法， 無(wú)需衍生的HPAE-PAD法已得到廣泛認(rèn)可 BioLC生物液用于可靠地分析糖基化蛋白，制藥中的糖 類(lèi)高聚物以及發(fā)酵肉湯中的簡(jiǎn)單糖類(lèi) 系統(tǒng)配 置 GS50梯度泵，PEEK材料，真空脫 氣 電化學(xué)檢測(cè)器，檢測(cè) 池 色譜柱參考戴安公司在生物和制YF面色譜柱應(yīng)用的 指南 高分離度分析蛋白質(zhì)和肽 對(duì)于離子交換和反相分離來(lái)說(shuō)，BioLC是Zyou的設(shè)計(jì) 非金屬流路可耐緩沖液的腐蝕此外由于BioLC可在典 型的HPLC的壓力下工作，使其成為分析肽的極好工 具 GS50泵可靈活地選擇微孔或標(biāo)準(zhǔn)孔流速，這兩種流速 均可輸送高精度和高重現(xiàn)性的梯度淋洗液戴安公司 的ProPac柱一次進(jìn)樣即可快速分離小到一個(gè)氨基酸的 脫酰胺基變異體，MAbs，以及其它差異蛋白質(zhì) PDA-100是高分辨率和高靈敏度的光譜檢測(cè)器，可用 于蛋白質(zhì)和肽的定性和定量分析 系統(tǒng)配置 GS50梯度泵，PEEK材料，真空脫氣 PDA-100光電二極管陣列檢測(cè)器，PEEK材料檢測(cè) 池， AD25光度檢測(cè)器，PEEK材料檢測(cè)池， 色譜柱參考戴安公司在生物和制YF面色譜柱應(yīng)用的 指南 特種核酸的測(cè)定 使用戴安du家的DNAPac®柱技術(shù)的生物液相BioLC，給 DNA的分離帶來(lái)了前所未有的高分辨率應(yīng)用戴安 MicroBead™技術(shù)的DNAPac®柱，可分離堿基數(shù)從1-60 的低(聚)核苷酸可在多種變性條件下，如高溫 （80以上），Chaotropic 試劑和高PH值（12.4） 條件下，進(jìn)行對(duì)低(聚)核苷酸的篩分完全消除了次級(jí) 結(jié)構(gòu)的影響并判定未序列 系統(tǒng)配 置 GS50梯度泵，PEEK材料，真空脫 氣 PDA-100光電二極管陣列檢測(cè)器，PEEK材料檢測(cè) 池， AD25光度檢測(cè)器，PEEK材料檢測(cè)池， 色譜柱參考戴安公司在生物和制YF面色譜柱應(yīng)用的 指南 靈敏的生物小分子的分析 BioLC對(duì)復(fù)雜基體中的生物小分子的分離和定量有優(yōu) 勢(shì) 諸如有機(jī)酸，無(wú)機(jī)離子，抗生素和維生素類(lèi)的這些分 析物，均能通過(guò)配有光度檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器或安培 檢測(cè)的BioLC系統(tǒng)，以特定的流速和靈敏度進(jìn)行測(cè)定 系統(tǒng)配 置 GS50梯度泵，PEEK材料，真空脫 氣 電化學(xué)檢測(cè) 器 電導(dǎo)池， DS3 ASRS-ULTRA（4mm）陰離子自動(dòng)再生YZ 器 色譜柱參考戴安公司在生物和制YF面色譜柱應(yīng)用的 指南 不需衍生的氨基酸直接分析 BioLC AAA直接氨基酸分析儀在氨基酸測(cè)定方面從配 置上進(jìn)行了的革新與現(xiàn)有方法不同，采用高靈敏度 的脈沖安培檢測(cè)器（IPAD）直接測(cè)定的方法，無(wú)需柱 前和柱后的衍生，用于測(cè)定初級(jí)和次級(jí)氨基酸，氨基 糖類(lèi)，含磷氨基酸，以及含硫氨基酸（如磺基丙氨 酸）中的常見(jiàn)氧化產(chǎn)物，檢測(cè)限可達(dá)10-15~10-10摩 爾 ，與茚三酮法相比，靈敏度至少高出50倍 系統(tǒng)配置 帶有真空脫氣的微孔PEEK GP50泵 電化學(xué)檢測(cè)器（包括PH參比電極） 氨基酸金工作電極 AAA-DirectTM----不需衍生的氨基酸直接分析技術(shù) 技術(shù)特點(diǎn) 氨基酸和氨基糖高分辨分離 陰離子交換分離完全消除了基體影響 一次進(jìn)樣氨基酸和碳水化合物同時(shí)出峰 靈敏度高，檢出限可達(dá)pmol, 至少比茚三酮方法高出 50倍 對(duì)于大部分氨基酸, 檢測(cè)器響應(yīng)的線(xiàn)性超過(guò)三個(gè)數(shù)量 級(jí) 可靠的定量分析-所測(cè)數(shù)據(jù)與陽(yáng)離子交換/茚三酮氨基 酸分析方法所測(cè)的數(shù)據(jù)完全吻合 可以直接地檢測(cè)尚很難檢測(cè)的氨基酸，如：色氨酸， 半胱氨酸，胱氨酸，蛋氨酸和磷酸氨基酸 對(duì)于如膠原蛋白之類(lèi)的復(fù)雜蛋白樣品來(lái)說(shuō),是一種更快 速更便捷的方法 樣品前處理簡(jiǎn)單 可以適用于任何常用的水解過(guò)程,如6M HCI, 4M甲基 磺酸(MSA),過(guò)甲酸氧化/6M HCI,以及4.2M NaOH 脈沖安培檢測(cè)器（IPAD）的直接檢測(cè),免除了費(fèi)時(shí)的樣 品衍生過(guò)程及昂貴的試劑消耗.樣品只需稀釋和過(guò)濾， 圖1所示為100pmol標(biāo)樣的典型譜圖 **保留時(shí)間和檢測(cè)響應(yīng)值 對(duì)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液及諸如細(xì)胞培養(yǎng)液,發(fā)酵液和蛋 白水解液等實(shí)際樣品的分析已證明了,該系統(tǒng)具有優(yōu)異 的檢測(cè)器響應(yīng)和保留時(shí)間穩(wěn)定性.圖2所示是氨基酸標(biāo) 準(zhǔn)混合液連續(xù)進(jìn)樣100次以上檢測(cè)器響應(yīng)值.圖3和圖4 分別為細(xì)胞培養(yǎng)液介質(zhì)進(jìn)樣100次以上保留時(shí)間和檢測(cè) 器響應(yīng)的重現(xiàn)性. 穩(wěn)定可靠的分析柱技術(shù) AminoPac PA10微孔柱是專(zhuān)門(mén)用于氨基酸分離的選擇 性GX陰離子交換柱.與以往的離子交換柱相比,這種 柱子有很多優(yōu)點(diǎn): 梯度淋洗后快速再平衡 優(yōu)異的傳質(zhì)特征,分離效果好 耐酸堿(PH范圍:0-14) 機(jī)械穩(wěn)定性(4000psi)和化學(xué)穩(wěn)定性高,延長(zhǎng)柱子壽 命 復(fù)雜基質(zhì)進(jìn)樣后,可以用常規(guī)有機(jī)溶劑快速清洗 常用的梯度程序 圖5所示為分離22種常見(jiàn)氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)三元梯度. (水,0..25M氫氧化鈉,1.0M醋酸鈉).如果有特殊應(yīng)用, 梯度程序可以自由設(shè)定. 適用于所有標(biāo)準(zhǔn)水解過(guò)程 四種常用的水解過(guò)程,如6M HCI, 4M MSA,過(guò)甲酸氧 化/6M HCI和4.2M NaOH,都適用于AAA-Direct氨基酸 分析系統(tǒng).另外,由于色譜保留機(jī)理是離子交 換,AminoPac PA10對(duì)中性樣品組分沒(méi)有保留,這樣就 完全消除了基體的影響. 同時(shí)測(cè)定氨基酸，氨基糖和碳水化合物 蛋白水解物中通常存在氨基糖AminoPac PA10對(duì)氨 基糖亦有很好的響應(yīng)，因此在測(cè)定氨基酸的同時(shí)可測(cè) 定氨基糖（圖6） 生化工業(yè)中，AAA-Direct氨基酸分析系統(tǒng)已經(jīng)以實(shí)驗(yàn) 和在線(xiàn)方式被用于發(fā)酵池和大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)液中氨基 酸和氨基糖的直接監(jiān)控.這就為蛋白和肽ZL過(guò)程中氨 基酸和碳水營(yíng)養(yǎng)物的監(jiān)控提供了更簡(jiǎn)便的方法. 圖7所示為細(xì)胞培養(yǎng)液的分析結(jié)果.插圖為分析中所用 IPAD的波形,圖中藍(lán)線(xiàn)為積分階段.采用此波形,能同 時(shí)測(cè)定樣品中常見(jiàn)的氨基糖和氨基酸.如果積分階段移 向更低的電壓,羥氨基酸的影響被YZ.同一樣品中的 碳水化合物和羥基氨基酸能被選擇性地檢測(cè). 圖8所示是大腸桿菌發(fā)酵液隨時(shí)間變化的一系列譜圖的 疊加.各種氨基酸隨時(shí)間的變化一目了然.這對(duì)生產(chǎn)過(guò) 程的Zyou化非常有利，因?yàn)榛景被岬牧靠梢愿鶕?jù) 需要簡(jiǎn)便地控制和調(diào)整. 蛋白質(zhì)和肽水解產(chǎn)物 運(yùn)用AAA-Direct氨基酸分析系統(tǒng),已經(jīng)成功地分析了 包括膠原蛋白在內(nèi)的各種蛋白質(zhì)和肽水解產(chǎn)物.檢驗(yàn)數(shù) 據(jù)與柱后茚三酮分析法的結(jié)果完全一致.圖9所示為膠 原蛋白水解物的色譜圖尤其值得一提的是，所有氨 基酸的定量只需一次進(jìn)樣 食品和飲料分析 該系統(tǒng)已經(jīng)用于多種食品和飲料樣品的分析，包括未 加工和加工過(guò)的肉類(lèi)水解物,果汁和蔬菜汁,啤酒和紅 酒 圖10所示為多種不同的未加工肉類(lèi)經(jīng)過(guò)MSA水解后的分 析譜圖.圖11所示為紅酒中的游離氨基酸測(cè)定結(jié)果樣 品前處理非常簡(jiǎn)單,因?yàn)镮PAD的靈敏度非常高,允許樣 品稀釋1000倍,甚至更高 圖12所示為AAA對(duì)胡蘿卜汁中的氨基酸和糖的測(cè)定結(jié) 果，胡蘿卜榨汁后經(jīng)過(guò)濾稀釋即可直接進(jìn)樣分析 對(duì)尚難測(cè)定的色氨酸直接分析 色氨酸在常用的HCI水解過(guò)程中會(huì)分解,影響測(cè)定結(jié)果. 而NaOH水解過(guò)程在柱前柱后衍生分析方法中又比較 麻煩,因?yàn)樗猱a(chǎn)物必須經(jīng)中和稀釋.因此在陽(yáng)離 子交換/茚三酮方法中勢(shì)必會(huì)消耗大量樣品.另外,在衍 生過(guò)程中產(chǎn)生的大量NaC1干擾,也是個(gè)問(wèn)題.在AAA- Direct氨基酸分析系統(tǒng)中，因?yàn)橛肗aOH作為淋洗液， 色氨酸經(jīng)NaOH后可直接進(jìn)樣分析樣品的準(zhǔn)備非常簡(jiǎn) 單，不需中和反應(yīng)進(jìn)樣前只需進(jìn)行水解產(chǎn)物的稀釋 和過(guò)濾 圖13和14分別表示采用幾種不同的水解方法對(duì) 大豆粉和牛初乳水解后分析結(jié)果的比較，其結(jié)果相 近