前言 目前一般生物標(biāo)志物實(shí)驗(yàn)的終點(diǎn)是發(fā)現(xiàn)公認(rèn)的標(biāo)志性蛋白名單，接下來的一步就應(yīng)該是在擴(kuò)展患者群體內(nèi)完成對這些靶向蛋白的定量測定，以評價(jià)它們作為標(biāo)志物的有效性對這些在復(fù)雜基體中的靶向蛋白進(jìn)行可靠的定量分析，其分析準(zhǔn)確度和精密度是必需的對低豐度蛋白質(zhì)進(jìn)行高通量檢測，對于寬動態(tài)范圍高靈敏度和穩(wěn)健性都有嚴(yán)格的要求基于串連質(zhì)譜的選擇反應(yīng)監(jiān)測（SRM）流程，對于復(fù)雜生物基體中所研究蛋白的特異肽可以進(jìn)行高靈敏度合高選擇性的定量，同時(shí)也可以獨(dú)立進(jìn)行生物標(biāo)志物驗(yàn)證1-4該方法的主要優(yōu)點(diǎn)是具有很低的檢測限，即，該方法可以在具有高化合物背景的復(fù)雜基體中檢測低濃度水平肽，同時(shí)保證良好的定量準(zhǔn)確度和精密度 由于大多數(shù)標(biāo)志性蛋白沒有標(biāo)準(zhǔn)品可用，所以，為進(jìn)行蛋白定量有必要對SRM實(shí)驗(yàn)中所出現(xiàn)的峰進(jìn)行鑒定傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常應(yīng)用SRM模式MS/MS 全掃描，通過數(shù)據(jù)庫搜索，對導(dǎo)向肽進(jìn)行鑒定5得到全掃描MS/MS質(zhì)譜圖的另外一個好處是可以對選擇母離子-子離子躍遷的方法進(jìn)行改進(jìn)，獲得Zda靈敏度然而，當(dāng)肽峰和基體中的同量異位干擾化合物產(chǎn)生共淋洗時(shí)，就損害了MS/MS掃描圖譜的質(zhì)量2相較于SRM實(shí)驗(yàn)而言，該方法的檢測限也較高另外，在一個LC運(yùn)行周期中，該方法對肽同時(shí)進(jìn)行鑒定和定量的循環(huán)時(shí)間過長，因而其應(yīng)用受到了限制5 另一個鑒定導(dǎo)向肽的方法是增加監(jiān)測的每個肽產(chǎn)生的b-或者y-型離子的數(shù)目6該方法應(yīng)用三級四極桿質(zhì)譜SRM模式，通過搜索標(biāo)記物來對導(dǎo)向肽進(jìn)行可靠的鑒定，在靈敏度工作循環(huán)時(shí)間和選擇性方面都很好，獲得了**檢測結(jié)果 兩種方法的成功都取決于儀器選擇母離子的能力二者均需要母離子通過離子中性碰撞穿過**級質(zhì)量分析器Q1離解這樣，干擾化合物穿過Q1時(shí)的時(shí)候被削減，從而提高了檢測信號的質(zhì)量大多數(shù)商品化儀器采用單位分辨（0.7 FWHM）進(jìn)行母離子選擇Thermo Scientific生產(chǎn)的TSQ Quantum Ultra質(zhì)譜儀是**可以進(jìn)行高分辨（0.2 FWHM）母離子選擇的三級四極桿質(zhì)譜儀，可以采用高選擇性反應(yīng)監(jiān)測模式（H-SRM）這就極大的降低了背景化合物的干擾，并保證了高傳輸效率7此外，該儀器可以監(jiān)測LC運(yùn)行中超過每段300對的H-SRM離子躍遷，并采用定量增強(qiáng)數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)掃描(QED-MS/MS)來進(jìn)行肽序列鑒定4這些獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)使得TSQ Quantum Ultra質(zhì)譜儀成為定量分析蛋白質(zhì)組的理想儀器 本文驗(yàn)證了TSQ Quantum Ultra質(zhì)譜儀在用于人血清消解液中待測肽的定量分析時(shí)，顯示出高選擇性和高靈敏度的優(yōu)勢研究建立了通過高分辨率的母離子分離和導(dǎo)向肽多碎片離子時(shí)間序列檢測，同時(shí)進(jìn)行導(dǎo)向肽的鑒定和定量的測定方法將該方法與傳統(tǒng)的SRM模式MS/MS肽定量檢測方法進(jìn)行了對比，其中，TSQ Quantum Ultra質(zhì)譜儀采用定量增強(qiáng)數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)掃描(QED-MS/MS)方法，4000 Q TRAP® 質(zhì)譜儀(Applied Biosystems, Foster City, CA)采用多反應(yīng)監(jiān)測模式增強(qiáng)子離子掃描（EPI MS/MS）方法H-SRM方法的分析精密度和應(yīng)用TSQ Quantum Ultra/4000 Q TRAP質(zhì)譜儀的SRM方法分析精密度在相同的傳輸數(shù)和駐留時(shí)間條件下做了對比評價(jià)Z近對H-SRM方法的定量準(zhǔn)確度也進(jìn)行了評價(jià) 賽默飛TSQ Quantum Access MAX液質(zhì)聯(lián)用