Picodroplet數(shù)字PCR檢測Kras突變亞克隆與抗EGFRZL晚期大腸癌的臨床相關性研究

Clinical Relevance of KRAS-Mutated Subclones Detected with Picodroplet Digital PCR in Advanced Colorectal Cancer Treated with Anti-EGFR Therapy

期刊：AACR

影響因子：8.911

通訊作者單位：American Association for Cancer Research

背景

結直腸癌是世界上第三大Z常見的癌癥，每年確診病人超過100萬，其中50%將發(fā)展為轉(zhuǎn)移性疾病。為了改善晚期轉(zhuǎn)移性結直腸癌（MCRC）的ZL，人們開發(fā)出了單克隆抗體，如西妥昔單抗。但有證據(jù)表明，KRAS突變型腫瘤患者作為單一藥物或聯(lián)合化療獲得很少或沒有益處。所以部分藥物限制使用在KRAS野生型腫瘤患者身上。

目的

KRAS突變可預測轉(zhuǎn)移性結直腸癌（MCRC）抗EGFRZL無效，只有50%的非突變患者從中受益，傳統(tǒng)方法無法檢測到低頻的KRAS突變是早期研究無進展的原因。為了驗證這一假設，需要高靈敏度和高精度的分子分析技術。

實驗設計

從兩個MCRC患者隊列中選擇136個KRAS、NRAS和BRAF野生型腫瘤樣本41個KRAS突變腫瘤。所有患者均接受抗EGFRZL，DPCR用于KRAS或BRAF突變篩查，并與QPCR進行比較。根據(jù)KRAS突變等位基因分數(shù)分析無進展生存率（PFS）和總生存率（OS）。

結果

除確認41例KRAS突變腫瘤外，DPCR還鑒定出22例經(jīng)QPCR鑒定為KRAS野生型的KRAS突變。DPCR定量的KRAS突變等位基因比例與抗EGFRZL反應率呈負相關（P<0.01）。KRAS等位基因突變率低于1%的患者與野生型KRAS腫瘤患者的PFS和OS相似。

討論

dPCR的高靈敏度和高精度使得稀有的檢測和定量成為可能，區(qū)分、量化和監(jiān)控單個亞克隆的能力是基于液滴的dPCR程序的優(yōu)點之一。隨著高度敏感技術的發(fā)展，有必要保證突變等位基因檢測的臨床針對性，腫瘤由不同突變的各種細胞群體組成，選擇性ZL即選擇特定的藥物對特定細胞群體進行ZL，從而達到較好的治LX果。在Z初的ZL過后，總是會出現(xiàn)耐藥性，限制了ZL的臨床效益。dPCR，有助于追蹤個別克隆，這將使真正個性化的藥物定制ZL方案，以推遲疾病的復發(fā)。

結論

這項研究表明，具有KRAS突變腫瘤的MCRC患者（至少那些KRAS突變亞克隆分數(shù)低于或等于1%）可以從抗EGFRZL中獲益，而KRAS突變亞克隆分數(shù)大于1%的腫瘤患者從EGFRZL中獲益甚小甚至無治LX益。

圖一.對基于抗EGFR的ZL，由常規(guī)程序(QPCR)或基于液滴的dPCR確定的突變狀態(tài)。

圖二.采用qPCR和dPCR方法檢測患者Kars突變的等位基因(包括多個亞克隆)。主要克隆為全黑方格，附加亞克隆為空黑方格。

圖三. 患者對西妥昔單抗的反應是根據(jù)Kras突變等位基因的分數(shù)，突變DNA的分數(shù)表示完全應答（CR）、部分應答（PR）、穩(wěn)定疾病（SD）或進展性疾?。≒D）的平均值

圖四.腫瘤中KRAS等位基因突變率與患者生存率的相關性。根據(jù)檢測到的KRAS等位基因的分數(shù)，將177例患者的A、PFS和（B）OS分為四分位數(shù)。常規(guī)QPCR法檢測為野生型的136例患者的C、PFS和（D）OS與KRAS等位基因NM分數(shù)的函數(shù)關系。