通過(guò)體外表達(dá)rhIL-12，以供研究其在體內(nèi)外的生物學(xué)效應(yīng)方法外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)粘附細(xì)胞和人口腔表皮樣癌細(xì)胞KB分別經(jīng)SAC(含A蛋白的金黃色葡萄球菌Cowan菌株)IFN-＋LPS和PDBu(12，13-二丁酸佛波酯)刺激，以GIT(異硫氰酸胍)一步法提取細(xì)胞總RNA，經(jīng)RT-PCR技術(shù)獲取IL-12 P40和P35 cDNA，將兩條基因分別插入雙啟動(dòng)子桿狀病毒轉(zhuǎn)染載體pAcUW51的多角子啟動(dòng)子和P10啟動(dòng)子下游，構(gòu)建真核表達(dá)載體pAcUW51/IL-12，與AcNPV共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞Sf9，獲取表達(dá)IL-12的細(xì)胞株，表達(dá)產(chǎn)物分別經(jīng)SDS-PAGE，Western blot，ELISA和生物學(xué)活性鑒定結(jié)果rhIL-12產(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)經(jīng)SDS-PAGE和Western blot鑒定為67×103，表達(dá)水平為15.4～15.7g/106細(xì)胞MTT法檢測(cè)IL-12表達(dá)產(chǎn)物促進(jìn)NK細(xì)胞殺傷K562細(xì)胞的能力比對(duì)照可提高60%，刺激PHA激活的PBMC增殖的能力Z高可達(dá)到58%結(jié)論成功構(gòu)建了雙啟動(dòng)子桿狀病毒表達(dá)載體pAcUW51/IL-12，獲得了共表達(dá)IL-12 P40和P35亞單位的昆蟲細(xì)胞株 超聲波清洗機(jī)