細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，指的是細(xì)胞在體外條件下的生長(zhǎng)，在培養(yǎng)的過(guò)程中細(xì)胞不再形成組織，培養(yǎng)物是單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群。細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)都要生活在人工環(huán)境中，由于環(huán)境的改變，細(xì)胞可能會(huì)受一些其他因素的影響，從而導(dǎo)致在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)各種各樣的問(wèn)題，常見(jiàn)問(wèn)題有哪些呢？

一、懸浮細(xì)胞成簇
可能原因：

?培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子；

?支原體污染；

?蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解；

?DNA污染；

解決方法：

?用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕輕吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；

?分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

?用DNase I處理細(xì)胞

二、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
可能原因：

?胰蛋白酶消化過(guò)度；

?支原體污染；

?培養(yǎng)基pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）；

?細(xì)胞老化；

?接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。

解決方法：

?縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度；

?分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

?使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2；

?啟用新的保種細(xì)胞；

?調(diào)節(jié)Z 佳接種細(xì)胞濃度。

三、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢
可能原因：

?由于更換不同培養(yǎng)液或血清；

?培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞；

?培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；

?試劑保存不當(dāng)；

?接種細(xì)胞起始濃度太低；

?細(xì)胞已老化；

?支原體污染 。

解決方法：

?比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；

?換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子；

?用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；

?血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；

?增加接種細(xì)胞起始濃度；

?換用新的保種細(xì)胞；

?分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

四、培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因：

?培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2；

?培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大；

?細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷；

?培養(yǎng)液滲透壓不正確；

?培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積。

解決方法：

?檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；

?檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；

?取新的保存細(xì)胞種；

?檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓；

?換入新鮮培養(yǎng)液。