在GX液相色譜分析中，根據(jù)流動(dòng)相和固定相相對(duì)極性的不同，可分為正相色譜和反相色譜所謂正相色譜是指固定相極性大于流動(dòng)相極性的情況，反之，固定相的極性小于流動(dòng)相的極性，則稱為反相色譜 正相色譜與反相色譜的區(qū)別是社么呢？由于極性化合物更容易被極性固定相所保留，所以正相色譜系統(tǒng)一般適用于分離極性化合物，極性小的組分先流出相反，反相色譜系統(tǒng)一般適用于分離非極性或弱極性化合物，極性大的組分先流出因此在應(yīng)用上，正相色譜用于分離極性較大的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)生物堿等反相色譜多用于分離極性較小的物質(zhì)，在流動(dòng)相的選擇上，反相色譜的優(yōu)勢(shì)更大，在實(shí)際工作中反相色譜的應(yīng)用更為廣泛 正相色譜用的固定相通常為硅膠，以及其他具有極性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)和氰基團(tuán)的鍵合相填料由于硅膠表面的硅羥基或其他團(tuán)的極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小，即極性強(qiáng)弱的組份Zxian被沖洗出色譜柱 反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相反相譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)組合Zxian被沖出，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留常用的反相填料有C18C8C4C6H5等 反相液相色譜柱效高分離能力強(qiáng)保留機(jī)理清楚，是液相色譜分離模式中使用Z為廣泛的一種，對(duì)于生物大分子蛋白質(zhì)及酶的分離分析，反相液相色譜正受到越來越多的關(guān)注．反相色譜法是以表面非極性載體為固定相，以比固定相極性強(qiáng)的溶劑為流動(dòng)相的一種液相色譜分離模式．反相色譜固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團(tuán)，基于樣品中的不同組分和疏水基團(tuán)之間疏水作用的不同而分離．在生物大分子分離中，多采用離子強(qiáng)度較低的酸性水溶液，添加一定量乙腈異丙醇或甲醇等與水互溶的有機(jī)溶劑作流動(dòng)相．普通的反相色譜固定相和孔徑大于300Å的硅膠鍵合烷基固定相應(yīng)用較為普遍，聚合物基質(zhì)的反相色譜固定相也有較多應(yīng)用． 在分析實(shí)驗(yàn)中需將反相色譜切換正相色譜的方法如下： 1先將色譜柱用相應(yīng)的溶劑沖洗干凈，然后將色譜柱拆下來密封保存用雙通將進(jìn)樣器與檢測(cè)器連接； 2將貯液瓶?jī)?nèi)裝入300ml的二次蒸餾水，將流速漸次提高到2.0ml/min沖洗系統(tǒng)1.5h注意觀察泵壓； 3將流速漸次降到0ml/min，把二次蒸餾水更換為甲醇，，將流速漸次提高到2.0ml/min沖洗系統(tǒng)1h； 4用同樣的方法將甲醇更換為異丙醇四氫呋喃，各沖系統(tǒng)1h； 5Z后將四氫呋喃更換為預(yù)先配制好的流動(dòng)相沖系統(tǒng)1h，同時(shí)將柱塞桿清洗系統(tǒng)內(nèi)的10%異丙醇更換為流動(dòng)相，保持50-60滴/min的速度清洗柱塞桿再將雙通更換為正相色譜柱，待色譜柱平衡好以后就可分析樣品了 本文地址：www.hxsj17.com