核移植技術的操作過程 1．供體核的分離技術 (1)胚細胞 用0.2％鏈霉蛋白酶預處理胚胎，然后機械法剝離透明帶，鈍頭玻璃吸管反復吹吸以分離成單個卵裂球有兩大重要進展：1)胚胎干細胞系的建立發(fā)育階段上類似于內(nèi)細胞團細胞，是早期胚胎經(jīng)體外分化YZ培養(yǎng)建立的多能性細胞系，可以傳代增殖，通過核移植可望獲得無數(shù)個遺傳上完全一致的動物現(xiàn)僅在小鼠上獲得成功，在豬牛綿羊等家畜只分離到類胚胎干細胞，是今后一個重要的研究方向2)綿羊4細胞系的建立一顯微分離胚盤細胞并在體外進行缺血饑餓傳代培養(yǎng)，誘使細胞處于靜止狀態(tài)以便調(diào)整染色質結構，有助于核的重組與發(fā)育，形態(tài)上類似于胚胎干細胞，但更偏平上皮化該方法系Campbell等1996)所創(chuàng)立，曾被評為1996年世界十大科技新聞之 (2)體細胞 1997年，Wilmut等取綿羊乳腺細胞在特定實驗條件下增殖培養(yǎng)6天，誘使細胞處于靜止狀態(tài)，以便其染色質結構調(diào)整，核進行重組，經(jīng)核移植后獲得了后代，開創(chuàng)了哺乳動物體細胞核移植成功的前例 2．受體細胞的去核技術 (1)以原核期受精卵或2細胞期胚胎為受體卵 去除原核或細胞核，成功率低，已很少采用 (2)以排出卵為受體卵 將超排回收的卵母細胞或體外培養(yǎng)成熱的卵母細胞置于含細胞松馳素B和秋水仙胺的培養(yǎng)液中，通過操縱顯微操作儀，一端用固定吸管吸住胚胎，另一端用一尖玻璃吸管(30um)穿透透明帶進入卵周隙，或用一細長玻璃針刺破并切一部分透明帶，再用呈直角的去核吸管經(jīng)切口抵住細胞膜，操縱去核吸管從第1極體處吸除第1極體以及處于分裂中期的染色體和周圍的部分細胞質 Sutter電動式顯微操作儀MP225 雙電動顯微操作儀MPC325-2 顯微操作儀MPC-385-2 顯微操作儀 sutter顯微操作儀MP-85