生命科學的發(fā)展速度往往受到生命分析化學水平的制約，在后基因時 代，人們面臨的是比基因研究更為復雜的蛋白質(zhì)組的研究，人類基因組有3－ 4萬個基因，而表達的蛋白質(zhì)可能達到十幾萬或幾十萬，如何在如此復雜的基 質(zhì)中高靈敏度高選擇性高通量和高準確性地分析待測組分，是生命分析 化學需要解決的重要問題 由于蛋白樣品量稀少珍貴，要求分析柱具有高靈敏度和高容量，同時質(zhì) 譜的在線聯(lián)用要求盡可能少樣品量，因此希望有在極復雜基質(zhì)中高靈敏 度高選擇性高通量和高準確性地分析待測組分的方法和儀器，毛細管/ Nano級的液相色譜就應(yīng)運而生了，為了獲得更好的分離效果，又發(fā)展了2D Na noLC 技術(shù) 戴安公司/LC PARKING典型的UltiMate Nano LC系統(tǒng)2D分離的流程： 樣 品用FAMOS微量自動進樣器吸取樣品后，加樣泵注入到BioX-SCX 強陽離子交 換柱上(at 30 µl/min) ，再次使用FAMOS，分別用不同濃度的鹽從 BioX-SCX 強陽離子交換柱 向RP捕獲柱重復淋洗肽的碎片，當捕集到肽后，系統(tǒng)開始除 鹽，NanoLC梯度(200 nl/min) 開始從捕獲柱反沖肽片段進入NanoLC的分析 柱，肽在這里被分離且結(jié)果非常容易辨認，通過改變鹽的濃度，還可降低識 別的復雜性盡管以上的工作是全自動進行，大大改進了峰的識別，但仍有 弱點，由于向陽離子交換柱上注入的是一段一段的不同濃度的鹽（我們暫時 稱它為鹽栓），使分離能力受到限制，色譜的分辨率不高，同時有很多高豐 度肽被共洗脫和重復地檢測，而產(chǎn)生大量的不必要的質(zhì)譜數(shù)據(jù)另外高豐量 肽的拖尾影響了低豐量肽的識別，從而降低了峰容量，為克服這些弱點，戴 安/LC PACKING又發(fā)展了2D雙梯度的并聯(lián)技術(shù) 雙梯度的并聯(lián)技術(shù)，使用兩個獨立的梯度泵，用連續(xù)不斷的線性鹽梯度 取代鹽栓，我們稱它為并聯(lián)毛細管/NanoLC，它的特點是增加了對蛋白的識別 能力，同時可以大大增加MS的通量 圖中的例子中，我們用的是毛細管泵做一維分離，Nano泵做二維分離， 兩個泵均通過毛細管/Nano流速傳感器實時監(jiān)控流速**個梯度泵做鹽梯度 淋洗，兩個反相捕獲柱交替工作以增加通量，第二個泵將兩個捕獲柱中的片 段交替地反沖入75微米分析柱 后面左圖是用0－100mM KCl 分7個濃度淋洗 SCX柱再經(jīng)反相分離后得到的總離子圖，大部分離子在中性淋洗和5－10mM KC l期間被淋洗出來，右圖是500mM KCl 從0－30％線性梯度，可以看到有更多 的肽片段在不同的階段被淋洗出來，對選中的峰做質(zhì)譜分析的結(jié)果：不同濃 度鹽栓洗脫可識別53個蛋白，而線性梯度的結(jié)果可識別98個，特別是低豐度 的蛋白，并聯(lián)2DNanoLC大大增加了對蛋白的識別能力 （注：戴安公司將于11月25日在北京首都大酒店舉辦上述技術(shù)的技術(shù)交 流會，將由戴安荷蘭公司的國際銷售經(jīng)理做技術(shù)報告，有意參加者請登陸我 們的中文網(wǎng)站www.dionex.com.cn下載會議邀請函，或直接與我們聯(lián)系索要， 聯(lián)系電話：010 64434148 常先生） 納升級/毛細管液相色譜