抗體偶聯(lián)藥物(ADC)由靶向特異性抗原的單克隆抗體與小分子細(xì)胞毒性藥物通過(guò)連接子鏈接而成，兼具傳統(tǒng)小分子化療的強(qiáng)大殺傷效應(yīng)和抗體藥物的腫瘤靶向性。ADC由三個(gè)主要部分組成：負(fù)責(zé)選擇性識(shí)別癌細(xì)胞表面抗原的抗體，負(fù)責(zé)殺死癌細(xì)胞的藥物有效載荷，以及連接抗體和有效載荷的連接子。

有效載荷是什么？

作為新型抗體藥物，ADC兼具抗體的靶向作用和細(xì)胞毒性小分子的良好活性，但因其結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和多樣性，使得其分析檢測(cè)及質(zhì)量控制方面面臨的挑戰(zhàn)較大。有效載荷是ADC的重要組成部分，在ADC領(lǐng)域的未來(lái)發(fā)展中，有效載荷多樣化將發(fā)揮關(guān)鍵作用，其有望將ADC的治 療武器庫(kù)開(kāi)放給其他尚未受益于靶向治 療的癌癥。

開(kāi)發(fā)這些新型有效載荷的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題是如何減輕它們的副作用。目前批準(zhǔn)的ADC已表明，它們具有預(yù)期的（骨 髓抑 制、神經(jīng)毒性）或意想不到的（如眼或肺）毒性。因此，獲得令人滿(mǎn)意的治 療指數(shù)將是創(chuàng)新ADC有效載荷未來(lái)發(fā)展的關(guān)鍵。

分析挑戰(zhàn)在哪里？

由于連接子（Linker，簡(jiǎn)稱(chēng)L）的親水性和有效載荷（Payload, 簡(jiǎn)稱(chēng)P）的親脂性，連接子和有效載荷的多手性，連接子的活性碎片和活性雜質(zhì)會(huì)與有效載荷反應(yīng)，均在不同程度上增加了L+P雜質(zhì)譜的復(fù)雜程度。

基于上述原因，沃特世協(xié)助上海皓元醫(yī)藥股份有限公司共同開(kāi)發(fā)了適用于有效載荷的專(zhuān)屬分析方法。由于有效載荷與連接子反應(yīng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生性質(zhì)相似的雜質(zhì)碎片，給檢測(cè)帶來(lái)了很大的挑戰(zhàn)。該方法使用Waters Arc HPLC液相色譜儀，搭配Waters CORTECS T3色譜柱（150mm×4.6mm，2.7μm），分析有效載荷為喜樹(shù)堿化合物的L+P，結(jié)果如圖1所示：

圖1. 使用沃特世色譜系統(tǒng)與CORTECS T3 色譜柱L+P雜質(zhì)譜色譜圖。

注：1,2號(hào)化合物為反應(yīng)輔料；3-10號(hào)化合物為連接子、有效載荷、有效載荷和活性碎片副產(chǎn)物、L+P降解產(chǎn)物等；11、12、14號(hào)化合物為多手性連接子引入的異構(gòu)體雜質(zhì)等結(jié)構(gòu)相近的副產(chǎn)物；13號(hào)為目標(biāo)化合物；15號(hào)為有效載荷反應(yīng)過(guò)程中消旋引入的異構(gòu)體雜質(zhì)。

該款沃特世色譜柱在較短的時(shí)間內(nèi)完成L+P復(fù)雜雜質(zhì)譜的分析，大大地提高了分析實(shí)驗(yàn)室的工作效率。而使用其他廠(chǎng)家色譜柱時(shí)，L+P目標(biāo)峰附近結(jié)構(gòu)相似的化合物無(wú)法滿(mǎn)足基線(xiàn)分離的要求，見(jiàn)圖2。

圖2. 其他廠(chǎng)家色譜柱結(jié)果。

性能優(yōu)異的CORTECS T3色譜柱

由于CORTECS系列色譜柱采用實(shí)心核顆粒，柱效更高，且能夠靈活、快速地分離多種化合物，即使用于棘手樣品也能夠發(fā)揮更高的分離度。而T3填料的柱子能夠使用100%水性流動(dòng)相并提升極性化合物的保留性能。所以在進(jìn)行L+P雜質(zhì)譜這種復(fù)雜且挑戰(zhàn)的分析時(shí)，使用 CORTECS T3色譜柱，真是有如神“柱”！