引言

隨著人們生活水平的不斷提高，大家對(duì)化妝品的使用需求和要求也在逐漸提高，并且隨著網(wǎng)絡(luò)代購(gòu)的快速發(fā)展，各種歐美、日本、韓國(guó)等不同國(guó)家不同功效的化妝品逐漸走進(jìn)人們的視野，其安全性也為廣大消費(fèi)者所關(guān)注，化妝品中所添加的化學(xué)物質(zhì)對(duì)人體健康具有潛在的危害，其中糖皮質(zhì)激素外用可降低毛細(xì)血管的通透性，減少滲出和細(xì)胞浸潤(rùn)，具有抗 炎、抗過(guò)敏、免疫抑 制等多種作用，長(zhǎng)期使用易導(dǎo)致皮膚變薄、發(fā)紅、發(fā)癢，甚至出現(xiàn)血糖升高、骨質(zhì)疏松、胎兒畸形、免疫功能下降等現(xiàn)象，短期使用雌激素、雄激素、孕激素等性激素可使皮膚保濕，回復(fù)彈性，減少皺紋，但長(zhǎng)期使用含有性激素的化妝品會(huì)導(dǎo)致色素沉積，皮膚萎縮變薄，甚至具有致癌性。

2022年3月31日，中國(guó)食品藥品檢定研究院發(fā)布了關(guān)于公開(kāi)征求《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》修訂意見(jiàn)的通知，將化妝品中曲安西龍等63種激素類(lèi)原料定義為原料，并在《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015版)的基礎(chǔ)上對(duì)部分?jǐn)?shù)據(jù)做了調(diào)整。本文采用QSight LC-MS/MS聯(lián)用系統(tǒng)對(duì)化妝品中的63種激素原料進(jìn)行定性定量分析，其定量限完全滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)及相應(yīng)的技術(shù)規(guī)范檢測(cè)需求，輕松應(yīng)對(duì)日常檢測(cè)分析要求。

1、實(shí)驗(yàn)方法

樣品處理：

膏霜乳液類(lèi)、液態(tài)水基類(lèi)、凝膠類(lèi)、面膜類(lèi)樣品

稱(chēng)取樣品0.2g（精確到0.001g），置于10mL具塞比色管中，加入少量乙腈（3:1），在渦旋混合儀上震蕩30s至試樣與提取溶劑混合均勻，然后加入乙腈至近刻度，超聲提取20min，靜置至室溫，用乙腈（3:1）定容至刻度，搖勻，以4000r/min離心10min，濾過(guò)（必要時(shí)取上清液適量用50%乙腈溶液稀釋?zhuān)♂屢航?jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾），濾液作為待測(cè)溶液。

液態(tài)油基類(lèi)

稱(chēng)取樣品0.2g（精確至0.001g），置于離心管中，加入2mL正己烷，在渦旋混合儀上分散，然后加入70%乙腈3mL，渦旋震蕩2min，4000r/min ,離心10min，吸取下層溶液至10mL比色管中，上層正己烷層用70%乙腈3mL，自“渦旋震蕩2min，…”起，重復(fù)上述步驟一次，合并兩次溶液，加50%乙腈定容至刻度，濾過(guò)（必要時(shí)用適量50%乙腈溶液稀釋?zhuān)♂屢航?jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾），濾液作為待測(cè)液。

2、LC-MS/MS儀器方法

珀金埃爾默 LX50 UHPLC參數(shù)：

色譜柱：Shim-pack XR-ODSIII 2.0mm× 150 mm , 2.2 μm

柱溫：35℃

流速：0.3 mL/min

進(jìn)樣量：10 μL

質(zhì)譜參數(shù)：

儀器采用珀金埃爾默 QSight 420? 三重四極桿質(zhì)譜儀，離子源參數(shù)及目標(biāo)原料質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)文末解決方案原文件。

QSight三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀具有自清潔功能的專(zhuān) 利設(shè)計(jì)，減少對(duì)日常維護(hù)的需求。與其他質(zhì)譜產(chǎn)品相比，可獲得更多的儀器運(yùn)行時(shí)間（35天/年）。采用雙離子源的設(shè)計(jì)，避免了多路聯(lián)用方法開(kāi)發(fā)的復(fù)雜性，擁有更短的樣品運(yùn)行時(shí)間，從而提高了生產(chǎn)效率。同時(shí)，利用真空壓力差產(chǎn)生層流傳輸離子，具有更好的靈敏度和系統(tǒng)穩(wěn)定性，另外樣品制備簡(jiǎn)單，可以獲得更高的重現(xiàn)性。

3、結(jié)果與討論

本方法采用一針進(jìn)樣，通過(guò)Time Managed MRM正負(fù)切換模式同時(shí)測(cè)定63種激素類(lèi)原料，其中59種原料采用正離子模式采集，4種原料采用負(fù)離子模式采集。圖1中展示了63種原料部分MRM譜圖。各個(gè)原料的峰型對(duì)稱(chēng)，并獲得優(yōu)異的色譜分離效果，保證每個(gè)色譜峰上有足夠的采集點(diǎn)數(shù)，以便獲得準(zhǔn)確的結(jié)果及優(yōu)異的重復(fù)性。

圖1 63種激素類(lèi)原料的部分MRM譜圖（2ng/ml）

采用50%的乙腈溶液將63種激素類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液稀釋成0.6ng/mL?60 ng/mL的系列校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。圖2為隨機(jī)挑選的不同流出時(shí)間時(shí)的原料的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)情況。其中各個(gè)原料在線(xiàn)性范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系均較好，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99。考察了10ng/ml濃度下的加標(biāo)回收率和6針的重現(xiàn)性測(cè)試（見(jiàn)表1），實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有良好的回收率和重現(xiàn)性，完全滿(mǎn)足化妝品中激素類(lèi)原料的日常檢測(cè)分析。

圖2 不同流出時(shí)間原料色譜圖的采集點(diǎn)數(shù)情況示例

表1 63種原料的部分回收率、重現(xiàn)性及檢出限數(shù)據(jù)

圖3 4個(gè)原料的線(xiàn)性情況示例

4、結(jié)論

本文采用LX50 UHPLC-QSight 420三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立了快速，高靈敏度和可靠的LC-MS/MS實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定化妝品中63種激素原料，一針進(jìn)樣，正負(fù)切換同時(shí)檢測(cè)，為化妝品中的激素測(cè)定提供了可靠的高通量檢測(cè)手段，且檢出限遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中的檢出限要求，同時(shí)數(shù)據(jù)顯示，其重復(fù)性和線(xiàn)性均較好，為后期高通量樣品的測(cè)定提供可靠的保障。