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儀器網(wǎng)/ 應(yīng)用方案/ 重組結(jié)核分枝桿菌Mr 38 000蛋白的表達(dá)純化和鑒定

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從H37Rv基因組中擴(kuò)增Mr38 000 蛋白基因并GX表達(dá)和純化用PCR技術(shù)從結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組中擴(kuò)增Mr 38 000蛋白序列,將其與pGEM-T-Easy 載體連接轉(zhuǎn)化E.coli DH5,構(gòu)建重組克隆載體pGEM-T-Easy/ Mr 38 000,測序正確后將目的基因片斷克隆入pQE-80L原核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化E.coli DH5,IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá) 經(jīng)Western-blot 鑒定目的基因與(His)6融合表達(dá),將已表達(dá)的蛋白質(zhì)通過Ni-NTA親和色譜柱進(jìn)行純化PCR得到結(jié)核分枝桿菌Mr 38 000蛋白基因,測序結(jié)果與GeBank 中報(bào)道的完全一致SDS-PAGE顯示, 在Mr為38.5×103處有相應(yīng)的蛋白質(zhì)表達(dá)條帶,Wesern blot鑒定為(His)6融合表達(dá)蛋白經(jīng)Ni-NTA親和色譜柱進(jìn)行純化后可得到純化的蛋白成功克隆了鐵調(diào)節(jié)蛋白基因Mr38 000 蛋白序列,并在E.coli DH5GX表達(dá),親和層析后獲得了純化目的蛋白 超聲波清洗機(jī)

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