作為分析儀器的領(lǐng)跑者，沃特世一直致力于質(zhì)譜技術(shù)的創(chuàng)新和傳承，為廣大客戶解決實驗過程中的諸多難題。

Xevo TQ Absolute也不負期待，不僅性能上有了質(zhì)的飛躍，同時也讓用戶的運營成本降低了50%，協(xié)助制藥、食品和飲料以及環(huán)境分析實驗室在開展的各類應(yīng)用中充分滿足痕量水平質(zhì)譜定量分析的相關(guān)法規(guī)要求。

今天，就和大家分享Xevo TQ Absolute在生物分析領(lǐng)域的解決方案，一起來看看這款新產(chǎn)品如何以高靈敏度定量人和大鼠血漿中的華法林和呋塞米。

華法林是?種抗凝劑，用于治 療和預(yù)防血栓栓塞。必須仔細、持續(xù)地監(jiān)測華法林，確保藥物濃度保持在范圍較窄的治 療血藥濃度內(nèi)。呋塞米是?種利尿劑，用于治 療心力衰竭、肝病或腎病患者的水腫。本方案中，我們使用華法林和呋塞米作為代表性分子，在?家典型的發(fā)現(xiàn)生物分析實驗室開展了研究。

實驗部分

1樣品前處理

用100 ng/mL的華法林和呋塞米儲備液加標大鼠和人血漿，建立0.025 - 100 ng/mL的校準曲線。使用單獨儲備液(100 ng/mL)生成LLOQ、LQC、MQC和HQC的QC樣品。使用乙腈按1:3的比例進行蛋白沉淀，所有樣品均提取100 μL，?式三份。將樣品離心，上清液轉(zhuǎn)移到LC-MS樣品瓶以供分析。

2液相色譜條件

• 液相色譜系統(tǒng)：ACQUITY Premier UPLC系統(tǒng)

• 色譜柱：MaxPeak UPLC HSS T3 2.1 x 50 mm色譜柱

• 柱溫：60°C

• 樣品溫度：5°C

• 進樣體積：1 μL

• 流速：600 μL/min

• 流動相A：含0.01%甲酸的100%水溶液

• 流動相B：含0.01%甲酸的100%乙腈溶液

• 梯度：在1.5 min內(nèi)從5%增?95%

• 
  

3質(zhì)譜條件

• 質(zhì)譜系統(tǒng)：Xevo TQ Absolute

• 電離模式：ESI-

• 毛細管電壓：0.5 kV

• MRM通道：

4結(jié)果

使用上述樣品提取和LC-MS方法，我們能夠使大鼠和人血漿中華法林的LLOQ達到25 pg/mL（圖1）。

圖1. 從人和大鼠血漿中提取的華法林的LLOQ。

人和大鼠血漿中呋塞米的LLOQ均確定為100 pg/mL（圖2）。

圖2. 從?和大鼠血漿中提取的呋塞米的LLOQ。

兩種分析物的觀測MS響應(yīng)均呈線性增加，如校準曲線上各濃度樣品的代表性色譜圖所示（圖3）。

圖3. 從人血漿中提取出的華法林和呋塞?在校準曲線上不同濃度點的代表性色譜圖。

將校準曲線和QC上的所有點每天重復(fù)提取三次，各濃度水平上所有點的%CV均<12%（表1）。

表1. 從人血漿中提取華法林和呋塞米的日間準確度和精密度（3天，每天重復(fù)三次）。

結(jié)論

ACQUITY Premier系統(tǒng)采?了新型MaxPeak高性能表面(HPS)技術(shù)可有效降低因金屬相互作用所導(dǎo)致的非特異性吸附損失，顯著減少方法開發(fā)和樣品分析時間，不再需要衍生化等復(fù)雜的樣品前處理步驟，以及高級的色譜柱、緩沖液和流動相。

Xevo TQ Absolute串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀是?種新型的高性能串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀，其設(shè)計緊湊、擁有更強的負離子檢測性能和可拆卸式離子源外殼，能減少樣品基質(zhì)和流動相緩沖鹽帶來的離子源污染。這些屬性使常規(guī)、耐用且靈敏的檢測器能發(fā)揮其理想性能，在正離子模式和負離子模式下均能提供優(yōu)異的靈敏度，并盡可能為每周需要運行數(shù)百個樣品的實驗室減少停機清洗時間。

使用ACQUITY Premier UPLC系統(tǒng)和Xevo TQ Absolute串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀定量從人和大鼠血漿中提取的華法林和呋塞米。能夠?qū)崿F(xiàn)：

• 人和大鼠血漿中華法林和呋塞米的LLOQ分別為25 pg/mL和100 pg/mL；

• 校準曲線和各QC濃度上所有點的%CV均<12%，完全位于生物分析驗收標準的允許范圍內(nèi)。

ACQUITY Premier UPLC系統(tǒng)和Xevo TQ Absolute串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀可提供優(yōu)異的穩(wěn)定性和靈敏度，且方法性能不受影響，因此是適用于發(fā)現(xiàn)生物分析實驗室的理想平臺。