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2025-01-10 10:50:46脂質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品
脂質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品是用于校準(zhǔn)、驗(yàn)證和分析脂質(zhì)類化合物的高純度參考物質(zhì)。它們具有確定的化學(xué)結(jié)構(gòu)和組成，常用于脂質(zhì)研究、食品安全、臨床診斷和藥物開發(fā)等領(lǐng)域。脂質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品可幫助科學(xué)家準(zhǔn)確測定樣品中的脂質(zhì)含量和種類，確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。在脂質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)研究中，脂質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品更是不可或缺的工具，對(duì)于推動(dòng)相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展具有重要意義。

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GLC-110混合物(細(xì)菌脂質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，定性)
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2023-06-07 16:27:23標(biāo)品現(xiàn)貨供應(yīng)！適用GB 5749-2022標(biāo)準(zhǔn)
GB 5749-20222022年3月15日，國家市場監(jiān)督管理總局和國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)，批準(zhǔn)發(fā)布GB 5749-2022《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》，代替GB 5749-2006版本。新標(biāo)準(zhǔn)于2023年4月1日起正式實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類生活飲用水，涉及到多項(xiàng)水質(zhì)檢測指標(biāo)名稱、限值與方法的更新，屬于強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)。迪馬科技依據(jù)GB 5749-2022《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》，定制了符合標(biāo)準(zhǔn)要求的xStandard標(biāo)準(zhǔn)品，方便相關(guān)化學(xué)分析工作者使用。GB 5749-2022《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》，對(duì)應(yīng)的xStandard標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)貨供應(yīng)，詳見下表：混標(biāo)詳細(xì)組分信息，可來電咨詢。
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2023-05-25 16:47:05【ALP-TS-23008A】脂質(zhì)納米粒制備及表征解決方案
全文共3826字，閱讀大約需要12分鐘脂質(zhì)納米粒簡介脂質(zhì)納米粒(Lipid Nanoparticle，LNP)是一種粒徑介于 10-1000 nm 的新型藥物遞送載體，由多種有機(jī)材料、無機(jī)材料、金屬 - 有機(jī)框架或這些材料組合而成，可作為化學(xué)與生物制劑之間傳遞的媒介，脂質(zhì)納米粒包裹藥物可顯著提高藥物的穩(wěn)定性與生物利用度。[1]目前脂質(zhì)納米粒廣泛應(yīng)用于mRNA疫苗遞送、腫瘤治 療、抗 炎和抗感染藥物載體、治 療神經(jīng)退行性疾病、抗瘧等領(lǐng)域。脂質(zhì)脂質(zhì)納米?？煞譃楣腆w脂質(zhì)脂質(zhì)納米粒(Solid Lipid Nanoparticles，SLN)和納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(Nanostructured Lipid Carriers，NLC)。固體脂質(zhì)脂質(zhì)納米粒（SLN）主要是由固體脂質(zhì)、表面活性劑、有效成分和水制備的膠體顆粒，具有生物相容性好、有機(jī)溶劑使用少、體內(nèi)穩(wěn)定性高、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。但在儲(chǔ)藏過程中仍存在載藥量低、易凝膠化和藥物泄漏等問題；為此，研發(fā)人員嘗試在固體脂質(zhì)壁材中加入一定量的液體油脂，打亂了原來單純固體脂質(zhì)壁材的有序的晶體結(jié)構(gòu)，負(fù)載活性成分的量得到了提高，也使得晶體結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，不易發(fā)生泄露等現(xiàn)象。[2-3]圖1 LNP的結(jié)構(gòu)[3]脂質(zhì)納米粒靶向性研究是藥物遞送熱點(diǎn)研究方向之一，考慮到納米藥物自身性質(zhì)的影響，可通過對(duì)其自身物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行調(diào)控，如粒徑、表面電荷、表面修飾物等，以此來增加脂質(zhì)納米粒藥物的滲透作用。目前還開發(fā)了各種粒徑可調(diào)控的納米遞藥系統(tǒng)，Li 等[4，5]構(gòu)建了一種酸刺激響應(yīng)型脂質(zhì)納米粒，可以在低 pH 條件下將其粒徑從 100 nm 縮減到5 nm。脂質(zhì)納米粒的初始尺寸有利于長時(shí)間的血液循環(huán)，當(dāng)?shù)竭_(dá)腫瘤部位后，酸性環(huán)境刺激脂質(zhì)納米粒發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，粒徑縮小，有助于脂質(zhì)納米粒外滲和組織滲透。除 pH 響應(yīng)外，腫瘤組織處特異的酶環(huán)境、腫瘤細(xì)胞內(nèi)的還原環(huán)境和光、熱、磁等外部刺激都可以用于調(diào)控納米藥物的粒徑和表面電荷。[5]除平均粒徑外，脂質(zhì)納米粒的尾端大顆粒和過小顆粒也會(huì)影響納米藥物的效果，尾端大顆粒容易造成脂質(zhì)納米粒聚集，影響藥物的穩(wěn)定性和安全性，小顆粒（＜5nm）會(huì)被直接臟快速地過濾清除，影響藥物的有效性。過濾可有效減少脂質(zhì)納米粒藥物中的大顆粒和雜質(zhì)，提高脂質(zhì)納米粒藥物的穩(wěn)定性。Alpharmaca奧法美嘉平臺(tái)提供整套的脂質(zhì)納米粒均一性和穩(wěn)定性的解決方案，可用于快速評(píng)估、優(yōu)化脂質(zhì)納米粒的配方和工藝：高壓微射流均質(zhì)機(jī)、微流控技術(shù)對(duì)脂質(zhì)納米粒進(jìn)行均質(zhì)乳化分散處理、Nicomp粒度分析儀分析平均粒徑、AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器分析大粒子濃度，Lum穩(wěn)定性分析儀快速分析脂質(zhì)納米粒藥物穩(wěn)定性，Entegris-ANOW濾芯過濾雜質(zhì)及大顆粒。脂質(zhì)納米粒的制備技術(shù)傳統(tǒng)的脂質(zhì)納米粒制備技術(shù)，包括乙醇注入法、薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法、凍融法等，存在粒徑分布廣和批間重復(fù)性大等問題，對(duì)藥物開發(fā)的臨床試驗(yàn)和生產(chǎn)具有很大的影響。為了解決傳統(tǒng)制備方法的弊端，微流控混合技術(shù)、高壓微射流技術(shù)、高壓均質(zhì)等新型制備技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。高壓微射流制備方法：制備水相、油相，經(jīng)過混合、剪切步驟形成初乳，初乳經(jīng)微射流均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，而后除 菌過濾得到脂質(zhì)納米粒。微流控混合技術(shù)制備方法：制備水相、油相，將水相油相經(jīng)過微流控均質(zhì)乳化后，除 菌過濾得到脂質(zhì)納米粒。無論是通過何種方法制備脂質(zhì)納米粒藥物，后續(xù)都需要對(duì)其平均粒徑、尾端大顆粒、穩(wěn)定性進(jìn)行檢測來篩選配方，PSS的Nicomp粒度分析儀可用于測試平均粒徑、AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器可用于測試大顆粒濃度、Lum穩(wěn)定性分析儀可用于快速篩選在不同工藝制備下脂質(zhì)納米粒藥物的穩(wěn)定性。圖2 高壓微射流法制備脂質(zhì)納米粒圖3 微流控混合技術(shù)法制備脂質(zhì)納米粒脂質(zhì)納米粒的粒徑控制脂質(zhì)納米粒的粒徑與其靶向性和有效性緊密相關(guān)，粒徑小且分布窄是脂質(zhì)納米粒藥物的理想粒徑。微流控技術(shù)通過微米通道控制流體的流動(dòng)和混合，具有良好的單分散性、可控性及重現(xiàn)性，可改善脂質(zhì)納米粒的均一性和藥物包封效率，并實(shí)現(xiàn)高通量生產(chǎn)，已成功應(yīng)用于Covid-19 mRNA 疫苗的制備[6]。高壓微射流均質(zhì)技術(shù)使物料在高壓作用下以高速度流經(jīng)腔體，經(jīng)過剪切、碰撞、空穴效應(yīng)等物理作用降低脂質(zhì)納米粒的平均粒徑，可對(duì)脂質(zhì)納米粒初乳進(jìn)一步均質(zhì)分散。高壓微射流均質(zhì)機(jī)PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī)（小試兼中試型）采用固定結(jié)構(gòu)的均質(zhì)腔，通過電液傳動(dòng)的增壓器使物料在高壓作用下以極大的速度流經(jīng)交互容腔的微管通道，物料流在此過程中受到高剪切力、高碰撞力、空穴效應(yīng)等物理作用，使得平均粒徑降低、體系均一穩(wěn)定，由此獲得理想的均質(zhì)、分散、去團(tuán)聚的結(jié)果。圖4 PSI高壓微射流均質(zhì)機(jī)最 高2069 bar的均質(zhì)壓力，最 高處理量20L/h（PSI-20）采用特殊設(shè)計(jì)Y型腔，去除尾端大顆粒效果佳，物料的混合更均一，處理效率高。屏顯界面，數(shù)據(jù)可溯源：支持?jǐn)?shù)據(jù)導(dǎo)出設(shè)定壓力及實(shí)時(shí)壓力、監(jiān)測點(diǎn)溫度、實(shí)時(shí)流量、時(shí)間等。配置K型熱電偶：可用于實(shí)施監(jiān)測料液溫度。低噪音：運(yùn)行音量低于70分貝，工作環(huán)境友好型。NanoSpirit 系列微流控藥物制劑遞送平臺(tái)微流控制備系統(tǒng)通過制造泵和高壓輸送泵與微流控芯片連接。A相和B相可以按一定比例以恒定速度混合和乳化。在微流控芯片中，設(shè)計(jì)不同的流道結(jié)構(gòu)，控制不同的速度，使樣品在微流控芯片中湍流、層流或霧化，可以滿足預(yù)乳化或再乳化的要求。還可以將制備好的樣品通過高壓泵輸送到高壓微流控芯片中，通過沖擊力和剪切力控制粒徑，達(dá)到達(dá)到所需的包封率、粒徑、粒徑分布均一性等要求。圖5 NanoSpirit 系列高精度流量控制（＜5‰）?？商峁┒囗?xiàng)可調(diào)參數(shù)（ 反應(yīng)量、流速等）。多型號(hào)微流芯片通用，適合多種載體類型。注射器規(guī)格：0.25，1，2.5，5，10 ml。自動(dòng)充液、反應(yīng)、前后排廢、清洗等工能平均粒徑與Zeta電位檢測脂質(zhì)納米粒徑不同使藥物富集在不同部位可現(xiàn)不同治 療 效果。應(yīng)用于腫瘤治 療領(lǐng)域的脂質(zhì)納米粒，由于腫瘤組織處血管豐富，血管壁間隙較寬且結(jié)構(gòu)完整性差，具有適宜尺寸的脂質(zhì)納米粒（60-200 nm）可通過 EPR 效應(yīng)在腫瘤處積聚，實(shí)現(xiàn)納米藥物的被動(dòng)靶向。脂質(zhì)納米粒電性一般呈中性或輕微負(fù)電性，在血液循環(huán)中，高正電性的脂質(zhì)納米粒會(huì)吸附蛋白質(zhì)，被迅速清除，進(jìn)而影響脂質(zhì)納米粒的藥代動(dòng)力學(xué)和生物分布。相比之下，中性脂質(zhì)納米粒以及帶有輕微負(fù)電荷的脂質(zhì)納米粒則顯示出延長的半衰期。Zeta電位是衡量藥物穩(wěn)定性指標(biāo)之一，Zeta電位的絕 對(duì)值越高，體系越穩(wěn)定。Nicomp納米激光粒度儀系列Nicomp系列納米激光粒度儀采用動(dòng)態(tài)光散射原理檢測分析樣品的粒度分布，基于多普勒電泳光散射原理檢測ZETA電位。圖6  Nicomp 3000系列粒徑檢測范圍0.3nm-10μm，ZETA電位檢測范圍為+/-500mV搭載Nicomp多峰算法，可以實(shí)時(shí)切換成多峰分布觀察各部分的粒徑。高分辨率的納米檢測，Nicomp納米激光粒度儀對(duì)于小于10nm的粒子仍然顯示較好的分辨率和準(zhǔn)確度。圖7  高斯粒徑分布圖                      圖8  多峰粒徑分布圖顆粒分布檢測尾端大顆粒的存在會(huì)影響藥物本身的穩(wěn)定性，由于表面積增大，使得體系形成熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，容易發(fā)生脂質(zhì)納米粒聚集以降低體系自由能現(xiàn)象。尾端大顆粒的存在還會(huì)對(duì)身體機(jī)能造成影響，較大的顆粒（> 200 nm）容易積聚在肝臟和脾 臟中，影響藥物安全性；粒徑極?。? 5 nm）的顆粒則會(huì)被腎臟快速地過濾清除，影響藥物的有效性。AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器系列AccuSizer系列在檢測液體中顆粒數(shù)量的同時(shí)精確檢測顆粒的粒度及粒度分布，通過搭配不同傳感器、進(jìn)樣器，適配不同的樣本的測試需求，能快速而準(zhǔn)確地測量顆粒粒徑以及顆粒數(shù)量/濃度。圖9 AccuSizer系列檢測范圍為0.5μm-400μm（可將下限拓展至0.15μm）。0.01μm的超高分辨率，AccuSizer系列具有1024個(gè)數(shù)據(jù)通道，能反映復(fù)雜樣品的細(xì)微差異，為研發(fā)及品控保駕護(hù)航。靈敏度高達(dá)10PPT級(jí)別，即使只有微量的顆粒通過傳感器，也可以精 準(zhǔn)檢測出來?？沙鼍叻ㄒ?guī)報(bào)告LumiSpoc單粒子顆粒計(jì)數(shù)器LumiSpoc采用單粒子光散射技術(shù)（SPLS），通過在光學(xué)流通池中進(jìn)行流體動(dòng)力聚焦，將單個(gè)粒子排列成一條直線。通過調(diào)整流動(dòng)條件來調(diào)整樣品濃度，從而避免濃度峰值的影響。當(dāng)單個(gè)納米或者微米顆粒經(jīng)過特殊光束截面的激光束時(shí)，記錄其正向和側(cè)向散射的光強(qiáng)。根據(jù)米氏理論，將分類強(qiáng)度轉(zhuǎn)換為粒度分布密度。通過軟件分析顯示計(jì)數(shù)分布、顆粒濃度。在行業(yè)內(nèi)已有使用Lumispoc用于顆粒濃度的監(jiān)測成功案例。圖10 LumiSpoc單粒子顆粒計(jì)數(shù)器顆粒粒徑檢測范圍：50 nm ~ 8 μm（取決于樣品）顆粒濃度檢測范圍：1 × 106 ml-1 ~ 1 × 109 ml-1進(jìn)樣體積：250 μl穩(wěn)定性分析檢測穩(wěn)定性是評(píng)價(jià)藥物制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，也是確定藥物制劑使用期限的主要依據(jù)。藥物制劑若發(fā)生分解、變質(zhì)，可導(dǎo)致藥效降低，甚至產(chǎn)生或增加毒副作用，危及患者的身體健康和生命安全，Zeta電位、尾端大顆粒濃度都是衡量藥物穩(wěn)定性的指標(biāo)之一。除此之外，還可以使用穩(wěn)定性分析儀測量樣品的分離、沉降、懸浮或澄清、浮離、聚集、凝聚或產(chǎn)品存放期以及粒徑分布。LUM穩(wěn)定性分析儀Lum穩(wěn)定性分析儀可以直接測量整個(gè)樣品的分散體的穩(wěn)定性，檢測和區(qū)分各種不穩(wěn)定現(xiàn)象，如上浮、絮凝、聚集、聚結(jié)、沉降等，通過測量結(jié)果可用來開發(fā)新的配方和優(yōu)化現(xiàn)有的配方及工藝。圖11 LUM穩(wěn)定性分析儀快速、直接測試穩(wěn)定性，無需稀釋，溫度范圍寬廣可同時(shí)測8個(gè)樣品，測量及辨別不同的不穩(wěn)定現(xiàn)象及不穩(wěn)定性指數(shù)加速離心，最高等效2300倍重力加速度過濾經(jīng)高壓微射流均質(zhì)機(jī)或微流控技術(shù)處理的脂質(zhì)納米粒，還需進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪^濾工藝，用于去除脂質(zhì)納米粒藥物中的尾端大顆粒和雜質(zhì)，提高藥物的穩(wěn)定性和安全性。濾膜的材質(zhì)和型號(hào)將影響脂質(zhì)納米粒藥物的過濾效率和效果，綜合考慮膜與納米藥物配方的兼容性、成本、效率等多方面因素選擇合適的濾膜。Entegris濾芯Entegris-Anow是一家高分子微孔膜過濾企業(yè)，專業(yè)從事MCE、Nylon、PES、PVDF、PTFE等（膜孔徑為0.03μm~10μm）微孔膜的研發(fā)及生產(chǎn)，具有二十多年服務(wù)與醫(yī)藥客戶經(jīng)驗(yàn)，并為全 球生物制藥、醫(yī)療器械、食品飲料、實(shí)驗(yàn)室分析、微電子及工業(yè)等領(lǐng)域的客戶提供過濾、分離和凈化解決方案。
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2023-07-28 13:52:52Antylia集團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)品業(yè)務(wù)再添新成員-Chiron AS!
▲ Antylia集團(tuán)宣布收購Chiron As充實(shí)其標(biāo)準(zhǔn)品業(yè)務(wù)Antylia集團(tuán)收購Chiron AS近日，Antylia集團(tuán)宣布，收購位于挪威的先進(jìn)化學(xué)品制造商Chiron AS，通過與我們現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)品業(yè)務(wù)（包括Spex CertiPrep，HPS和NSI）合作，擴(kuò)展我們的產(chǎn)品組合和提高我們的全qiu球地位。Chiron為世界各地的科學(xué)界提供了復(fù)雜的化學(xué)分析解決方案。自1983年以來，Chiron一直為毒理學(xué)、環(huán)境、食品安全和石油分析提供參考材料、精細(xì)化學(xué)品和試劑。Chiron的產(chǎn)品包括15000多種獨(dú)特的產(chǎn)品，并輔以微克至公斤的定制合成服務(wù)。多年的投資、員工的熱情和開拓性團(tuán)隊(duì)精神，以及與全qiu學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)和客戶的密切合作，使Chiron走上了分析化學(xué)的前沿。Antylia集團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)品業(yè)務(wù)▲ 現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)品：Spex Certiprep、NSI、hps + ChironAntylia集團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)品業(yè)務(wù)關(guān)于Spex CertiprepSPEX CertiPrep成立于1954年，是認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（CRM）市場的行業(yè)領(lǐng)_導(dǎo)者，公司通過了美國實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可協(xié)會(huì)(A2LA)的ISO/IEC 17025:2017 & ISO17034:2016認(rèn)證，以及DQ的ISO9001:2015認(rèn)證。   SPEX CertiPrep 為 AA、ICP、ICP/MS 和 LC-ICP/MS 提供獨(dú)yi無二的無機(jī)標(biāo)準(zhǔn)品選擇，以及GC、GC/MS、LC和LC/MS的有機(jī)標(biāo)準(zhǔn)品。我們還提供定制服務(wù)，以滿足客戶的特定要求?！?Spex Certiprep推薦產(chǎn)品Antylia集團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)品業(yè)務(wù)關(guān)于NSINSI成立于1982年，是一家針對(duì)生命科學(xué)、食品、農(nóng)業(yè)、環(huán)境和藥物測試等領(lǐng)域的認(rèn)證能力測試供應(yīng)商，也是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制造商。NSI主要產(chǎn)品包括CRM標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、質(zhì)控品、能力驗(yàn)證。是一家ISO認(rèn)證的質(zhì)控品和認(rèn)證參考物質(zhì)的制造商，同時(shí)為食品和農(nóng)業(yè)、制藥、環(huán)境在全qiu范圍內(nèi)提供能力測試項(xiàng)目。其中USP能力驗(yàn)證，是美國藥典委員會(huì)(USP)和NSILabSolutions之間的戰(zhàn)略聯(lián)盟項(xiàng)目，旨在開發(fā)和推廣能力驗(yàn)證。USP的能力驗(yàn)證可以幫助世界各地的實(shí)驗(yàn)室通過基于可信賴的USP方法的外部公正質(zhì)量評(píng)估，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室水平和整體能力，建立實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的質(zhì)量和信心。▲ NSI推薦產(chǎn)品
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2022-10-27 10:36:44真菌毒素檢測方法及標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用研討會(huì)
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2023-02-17 13:16:01核酸脂質(zhì)納米?？破铡猂NA-LNP包封率測定
自新冠mRNA疫苗成功上市以來，脂質(zhì)納米粒（Lipid nanoparticle，LNP）已成為mRNA、siRNA、pDNA等核酸的優(yōu)先遞送載體，廣泛用于mRNA疫苗及治愈。微流控技術(shù)是目前制備核酸脂質(zhì)納米粒常用的技術(shù)，包封率則是評(píng)價(jià)其制備效果的重要指標(biāo)之一，下面就為大家介紹使用RiboGreen測定RNA-LNP包封率的方法。1 RiboGreen檢測RNA-LNP包封率的原理1.1RNA-LNP包封率（Encapsulationefficiency，EE）：包裹在脂質(zhì)納米粒內(nèi)部的RNA占RNA-LNP溶液中全部RNA的比例。1.2 RiboGreen檢測RNA原理：RiboGreen是一種用于定量檢測溶液中RNA含量的超敏感熒光核酸染料，當(dāng)RiboGreen熒光染料處于溶液狀態(tài)時(shí)，幾乎沒有熒光活性，與RNA結(jié)合時(shí)，其熒光活性將增加1000倍。RiboGreen-RNA復(fù)合物的熒光激發(fā)波長約500nm，發(fā)射波長約525nm，通過酶標(biāo)儀，建立已知濃度RNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得到樣品RNA濃度。1.3 RiboGreen檢測包封率原理：分別測定LNP-RNA溶液中游離RNA濃度，以及用Triton-100破壞LNP結(jié)構(gòu)后，溶液中全部的RNA濃度，兩者的差值就是包封在LNP內(nèi)部的RNA濃度。通過以下公式即可計(jì)算得到包封率結(jié)果。圖1核酸脂質(zhì)納米顆粒的示意圖2操作要點(diǎn)2.1制備Buffer1X TE Buffer：使用試劑盒中20X TE Buffer稀釋。2% Triton-TE buffer：使用Triton-100與1X TE buffer以體積比1：50配制。2.2添加RNA-LNP樣品至全黑96孔板根據(jù)制備時(shí)RNA的量，可以大致計(jì)算需要稀釋的倍數(shù)。例如，已知 mRNA的原始質(zhì)量或濃度，使用銘汰MicroFlow S進(jìn)行RNA-LNP合成，根據(jù)稀釋、超濾等處理后的最終體積，即可估算大致總RNA濃度。同時(shí)，假設(shè)90%的包封率，即可估算游離RNA濃度。然后根據(jù)標(biāo)曲的濃度計(jì)算需要稀釋的大致倍數(shù)。這樣我們就可以使用1X TE buffer將RNA-LNP稀釋適合倍數(shù)以檢測LNP外游離RNA濃度，使用2% Triton-TE buffer將RNA-LNP稀釋適合倍數(shù)以檢測總RNA濃度，建議每項(xiàng)檢測至少兩個(gè)不同稀釋倍數(shù)。然后，分別移取100 μL稀釋后的樣本，添加到全黑96孔板。2.3標(biāo)樣添加一般直接使用試劑盒中100 μg/mL的RNA標(biāo)樣，也可以使用與待測樣本類似的RNA標(biāo)樣來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線?？梢韵扔?X TE buffer將原始標(biāo)樣稀釋到工作濃度4 μg/mL，然后參考表1的體積比，配制為一定濃度梯度的標(biāo)樣。分別移取各濃度的標(biāo)樣100 μL，添加到全黑96孔板中。注：*最終RNA濃度考慮了步驟2.4添加RiboGreen染料后的濃度當(dāng)RNA-LNP樣品及特定濃度的標(biāo)樣添加到96孔板后，需要在37℃下避光孵育10 min，以使RNA-LNP在Triton buffer中充分裂解。2.4 RiboGreen染料添加把試劑盒中RiboGreen試劑，使用1X TE Buffer按照1：100的比例稀釋，例如需要2000 μL RiboGreen染料，可將20 μL的RiboGreen試劑添加到1980 μL的1X TE Buffer中。然后各取100 μL加入到已經(jīng)加有樣品的96孔板中，37℃下避光孵育5min。圖2 樣品添加2.5酶標(biāo)儀檢測打開酶標(biāo)儀，選擇熒光模式，激發(fā)光485nm，發(fā)射光528nm，讀數(shù)，記錄數(shù)據(jù)。 2.6數(shù)據(jù)處理及分析    將每個(gè)樣本測得的熒光值減去空白熒光值，即可得到實(shí)際熒光值。根據(jù)標(biāo)樣的熒光值和濃度梯度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。把樣品熒光值代入回歸方程，乘以稀釋倍數(shù)，即可得到樣本的RNA濃度。根據(jù)1.3中包封率公式計(jì)算得到包封率結(jié)果。圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線3 小結(jié)準(zhǔn)確的包封率測定對(duì)于評(píng)價(jià)RNA-LNP的包封效果至關(guān)重要，影響著后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的開展。RNA-LNP包封率測定一般使用商業(yè)化的試劑盒，雖然操作環(huán)節(jié)較多，但只要細(xì)心規(guī)范，操作起來也并不難，相信大家可以得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。納米藥物制備系統(tǒng)應(yīng)用范圍：
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