- 2025-01-21 09:31:20裂隙發(fā)育巖體
- 裂隙發(fā)育巖體指巖石中存在大量裂隙的地質(zhì)體,這些裂隙影響巖體的力學(xué)性質(zhì)、滲透性和穩(wěn)定性。裂隙發(fā)育巖體的特點(diǎn)包括裂隙分布復(fù)雜、形態(tài)多樣,對(duì)巖體強(qiáng)度有顯著影響。在工程領(lǐng)域,裂隙發(fā)育巖體涉及地質(zhì)工程、巖土工程、水利工程等,對(duì)工程設(shè)計(jì)、施工和安全具有重要影響,需采取相應(yīng)措施進(jìn)行穩(wěn)定性分析和處理。
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裂隙發(fā)育巖體問(wèn)答
- 2022-07-15 07:56:54mcu自動(dòng)化測(cè)量單元之巖體與混凝土交接面埋設(shè)
- 這一期,重點(diǎn)所講內(nèi)容主題是mcu自動(dòng)化測(cè)量單元之巖體與混凝土交接面埋設(shè),以下是相關(guān)內(nèi)容: 在巖體與混凝土交界面安裝測(cè)縫計(jì),先在安裝位置鉆孔,孔徑應(yīng)≥9cm,深度≥40cm。 在鉆孔內(nèi)填入大半孔的膨脹水泥砂漿,將測(cè)縫計(jì)護(hù)管裝有護(hù)管座的一頭擠入孔中,使護(hù)管口與鉆孔口平齊,旋上護(hù)管蓋。在鉆孔與護(hù)管之間空隙處填滿填充物,阻斷鉆孔內(nèi)的膨脹水泥砂漿與澆筑混凝土相連,待鉆孔內(nèi)膨脹水泥砂漿凝固后取下護(hù)管蓋安裝測(cè)縫計(jì),方法同上。
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- 2023-04-04 15:58:48【THUNDER小課堂】腦神經(jīng)發(fā)育
- 整個(gè)小鼠胚胎的圖像:(左)原始寬場(chǎng)成像結(jié)果和(右)應(yīng)用Large Volume Computational Clearing(LVCC)后的成像結(jié)果。圖片來(lái)源:A. Popratiloff和Z. Motahari,美國(guó)喬治·華盛頓大學(xué)。本文介紹了如何使用THUNDER Imager 3D Cell Culture和Large Volume Computational Clearing(LVCC)對(duì)小鼠胚胎快速、高對(duì)比度成像,實(shí)現(xiàn)了對(duì)軸突生長(zhǎng)和腦神經(jīng)發(fā)育的研究。許多在發(fā)育早期階段損害神經(jīng)回路發(fā)育的遺傳性疾病被認(rèn)為會(huì)對(duì)行為造成干擾。用小鼠模型研究早期神經(jīng)發(fā)育的細(xì)胞變化、定義與人類(lèi)疾病相似的行為及潛在發(fā)育機(jī)制,是非常困難的。而鑒別發(fā)育的神經(jīng)元回路中三叉神經(jīng)(其參與面部感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)機(jī)能)軸突生長(zhǎng)的早期分化,使得這些困難迎刃而解。簡(jiǎn)介人們普遍認(rèn)為,很多遺傳性疾病都通過(guò)損害神經(jīng)回路發(fā)育的早期階段來(lái)對(duì)行為產(chǎn)生干擾[1]。事實(shí)證明,在模型動(dòng)物中分辨早期神經(jīng)發(fā)育中細(xì)胞的此類(lèi)變化具有一定的難度。用與人類(lèi)遺傳性疾病中臨床顯著缺陷相似的基因突變小鼠模型來(lái)定義行為、神經(jīng)回路和潛在發(fā)育機(jī)制,是非常困難的[1]。檢測(cè)單個(gè)神經(jīng)元初始分化中的變化難以實(shí)現(xiàn)。這些挑戰(zhàn)可通過(guò)確定發(fā)育的神經(jīng)回路中三叉神經(jīng)這一關(guān)鍵組分的軸突生長(zhǎng)的早期分化來(lái)解決[1]。通過(guò)著眼于參與面部感覺(jué)及運(yùn)動(dòng)機(jī)能如哺乳、進(jìn)食、咬、咀嚼和吞咽等的三叉神經(jīng)(腦神經(jīng)V),以及軸突生長(zhǎng)和原生傳導(dǎo)通路,可以對(duì)使用組織學(xué)處理可能會(huì)缺失的三維環(huán)境進(jìn)行研究[1]。本文介紹如何使用THUNDER Imager 3D Cell Culture和Large Volume Computational Clearing(LVCC)[2,3]對(duì)小鼠胚胎快速、高對(duì)比度成像,以幫助進(jìn)行腦神經(jīng)發(fā)育研究。挑戰(zhàn)如要以實(shí)用高效的方式對(duì)整個(gè)小鼠胚胎成像,快速、清晰的高對(duì)比度3D成像解決方案,對(duì)于重要細(xì)節(jié)展示和解析大有益處。相較于激光共聚焦成像,可在很短的時(shí)間內(nèi)一次性采集到完整胚胎的成像結(jié)果。傳統(tǒng)寬場(chǎng)顯微成像速度快,檢測(cè)靈敏度高,但是對(duì)厚標(biāo)本的成像,如小鼠胚胎,通常會(huì)由于非焦平面信號(hào)的影響,呈現(xiàn)模糊的成像結(jié)果,降低圖像對(duì)比度[2,3]。方法使用THUNDER Imager 3D Cell Culture對(duì)小鼠胚胎成像。使用抗βIII微管蛋白(Tuj1)抗體對(duì)胚胎的神經(jīng)系統(tǒng)和腦神經(jīng)進(jìn)行染色。結(jié)合BABB透明化處理,即可對(duì)整個(gè)胚胎中的神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行三維結(jié)構(gòu)成像。圖1中的圖像使用數(shù)值孔徑(NA)0.75、工作距離700μm的20x多浸液物鏡采集。該圖像由32個(gè)視野拼接組成,成像深度為672 μm(337層切),采集了完整的胚胎結(jié)構(gòu)。數(shù)據(jù)采集總時(shí)長(zhǎng)為18分鐘。結(jié)果通過(guò)LVCC和Instant Computational Clearing(ICC)將寬場(chǎng)成像固有的非焦面模糊信號(hào)清除[2,3]。之后,再使用徠卡自適應(yīng)式反卷積技術(shù)來(lái)增強(qiáng)三維特征結(jié)構(gòu)的分辨率[4]。這種成像模式便于觀察胚胎的神經(jīng)結(jié)構(gòu)以及胚胎的整體布局中更有價(jià)值的神經(jīng)元定位。圖1:展示整個(gè)小鼠胚胎的俯視圖,顯示原始數(shù)據(jù)(A)與應(yīng)用LVCC后(B)的差異。根據(jù)相對(duì)物鏡深度進(jìn)行顏色標(biāo)識(shí)的胚胎的角度視圖,其中zui大深度為672 μm。C)應(yīng)用LVCC后的腦部側(cè)視圖,顯示了沿Z軸方向的精密細(xì)節(jié)。圖片來(lái)源:Anastas Popratiloff博士和Zahra Motahari博士,喬治·華盛頓大學(xué)納米制造與成像中心(GWNIC),美國(guó)華盛頓特區(qū)。結(jié)論與傳統(tǒng)的寬場(chǎng)成像不同,THUNDER技術(shù)Large Volume Computational Clearing(LVCC)[2,3]在對(duì)小鼠胚胎中的腦神經(jīng)發(fā)育成像時(shí),顯著增強(qiáng)了圖像對(duì)比度,對(duì)精密細(xì)節(jié)有更好的解析。References:1.Z. Motahari, T.M. Maynard, A. Popratiloff, S.A. Moody, A.-S. LaMantia, Aberrant early growth of individual trigeminal sensory and motor axons in a series of mouse genetic models of 22q11.2 deletion syndrome, Human Molecular Genetics (2020) vol. 29, iss. 18, pp. 3081-3093, DOI: 10.1093/hmg/ddaa199.2.J. Schumacher, L. Bertrand, THUNDER Technology Note: THUNDER Imagers: How Do They Really Work? Science Lab (2019) Leica Microsystems.3.L. Felts, V. Kohli, J.M. Marr, J. Schumacher, O. Schlicker, An Introduction to Computational Clearing: A New Method to Remove Out-of-Focus Blur, Science Lab (2020) Leica Microsystems.4.V. Kohli, J.M. Marr, O. Schlicker, L. Felts, The Power of Pairing Adaptive Deconvolution with Computational Clearing: Technical Brief, Science Lab (2021) Leica Microsystems. 相關(guān)產(chǎn)品THUNDER Imager 3D Live Cell 和 3D Cell Culture
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- 2025-02-01 09:10:16金相顯微鏡能不能測(cè)粉體
- 金相顯微鏡能不能測(cè)粉體? 金相顯微鏡作為一種用于觀察金屬樣品的顯微分析工具,廣泛應(yīng)用于材料科學(xué)和金屬研究中。它能夠通過(guò)對(duì)金屬表面的觀察,幫助研究人員了解金屬的組織結(jié)構(gòu)、相組成及晶粒大小等重要信息。當(dāng)我們將其應(yīng)用到粉體測(cè)量上時(shí),是否能獲得理想的效果?本文將深入探討金相顯微鏡能否有效測(cè)量粉體,并分析其中的技術(shù)挑戰(zhàn)與局限性。 金相顯微鏡的基本原理與應(yīng)用 金相顯微鏡通過(guò)將樣品制備成適合觀察的薄片,借助不同的顯微鏡鏡頭和光源進(jìn)行觀察,從而獲取材料的微觀結(jié)構(gòu)信息。通常,這類(lèi)顯微鏡配備了高分辨率的光學(xué)系統(tǒng),能夠清晰呈現(xiàn)金屬材料表面不同相區(qū)的結(jié)構(gòu)特征,廣泛應(yīng)用于金屬鑄造、焊接、熱處理等領(lǐng)域,幫助研究者了解材料的性能變化。 粉體的特殊性與金相顯微鏡的適應(yīng)性 粉體由于其顆粒形態(tài)的特殊性,相較于常規(guī)的金屬樣品,更難通過(guò)傳統(tǒng)金相顯微鏡進(jìn)行觀察。粉體材料的顆粒大小、形狀、分布等特征對(duì)于顯微鏡的觀察提出了更高的要求。金相顯微鏡主要適用于平整、穩(wěn)定的固體表面觀察,而粉體由于其顆粒形態(tài)和尺寸的不規(guī)則性,難以獲得清晰的觀察結(jié)果。粉體樣品的制備過(guò)程通常需要將其制成薄片或者通過(guò)特殊處理固定,才能進(jìn)行顯微鏡分析。 金相顯微鏡在粉體分析中的局限性 粉體的顆粒尺寸通常較小,且形狀不規(guī)則,傳統(tǒng)金相顯微鏡的分辨率和觀察角度可能無(wú)法完全呈現(xiàn)顆粒的全貌。金相顯微鏡在觀察粉體時(shí)需要樣品表面平整,如果沒(méi)有經(jīng)過(guò)特殊的樣品制備,觀察效果可能會(huì)受到影響。再者,由于金相顯微鏡主要側(cè)重于觀察金屬的微觀結(jié)構(gòu),而粉體的形態(tài)和表面特性常常需要借助其他顯微技術(shù)(如掃描電子顯微鏡 SEM)來(lái)獲得更為的分析結(jié)果。 結(jié)論 金相顯微鏡雖然可以對(duì)粉體進(jìn)行一定程度的觀察,但由于粉體的顆粒特性、樣品制備難度及金相顯微鏡的局限性,它并非粉體分析的佳選擇。若要獲得更高精度的粉體表征,推薦使用掃描電子顯微鏡(SEM)等其他更為適合粉體分析的儀器。
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- 2022-06-30 16:38:23如何有效緩解冷凍切片裂隙問(wèn)題?
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- 2024-01-15 17:30:19包涵體蛋白復(fù)體常見(jiàn)十大問(wèn)題解析
- 在生命科學(xué)領(lǐng)域中,包涵體復(fù)體的研究占據(jù)了重要的地位。但隨著研究的深入,一些問(wèn)題逐漸浮現(xiàn)。本文將對(duì)包涵體復(fù)體研究中常見(jiàn)的挑戰(zhàn)進(jìn)行解析,以及為研究者提供一些解決思路。 ①包涵體復(fù)性原則:低濃度,平緩梯度,低溫。 ②怎樣洗滌包涵體?通常的洗滌方法一般是洗不干凈的,可以先把包涵體用6M鹽酸胍溶解充分,過(guò)濾除去未溶解的物質(zhì),注意留樣跑電泳,然后用水稀釋到4M,離心把沉淀和上清分別跑電泳,如此類(lèi)推可以一直稀釋到合適的濃度,可以找到一個(gè)合適去除雜質(zhì)的辦法,其實(shí)這就是梯度沉淀的方法,比通常的直接洗脫效果好。 ③對(duì)于尿素和鹽酸胍該怎么選擇尿素和鹽酸胍屬中強(qiáng)度變性劑,易經(jīng)透析和超濾除去。它們對(duì)包涵體氫鍵有較強(qiáng)的可逆性變性作用,所需濃度尿素8-10M,鹽酸胍6-8M。尿素溶解包涵體較鹽酸胍慢而弱,溶解度為70-90%,尿素在作用時(shí)間較長(zhǎng)或溫度較高時(shí)會(huì)裂解形成氰酸鹽,對(duì)重組蛋白質(zhì)的氨基進(jìn)行共價(jià)修飾,但用尿素溶解具有不電離,呈中性,成本低,蛋白質(zhì)復(fù)性后除去不會(huì)造成大量蛋白質(zhì)沉淀以及溶解的包涵體可選用多種色譜法純化等優(yōu)點(diǎn),故目前已被廣泛采用。 鹽酸胍溶解能力達(dá)95%以上,且溶解作用快而不造成重組蛋白質(zhì)的共價(jià)修飾。但它也有成本高、在酸性條件下易產(chǎn)生沉淀、復(fù)性后除去可能造成大量蛋白質(zhì)沉淀和對(duì)蛋白質(zhì)離子交換色譜有干擾等缺點(diǎn)。 ④8M尿素溶解的包涵體溶液應(yīng)如何保存?在4度放置半個(gè)月,都沒(méi)什么問(wèn)題 。在室溫放置超過(guò)48小時(shí),可能會(huì)對(duì)目的蛋白有影響,因?yàn)槟蛩卦趬A性條件下可使一些氨基酸?;栽缧┨幚鞡I溶液比較好。 ⑤復(fù)性時(shí)的蛋白濃度一般使用濃度為0.1-1.0mg/ml,太高的濃度容易形成聚體沉淀,太低的濃度不經(jīng)濟(jì),而且很多蛋白在低濃度時(shí)不穩(wěn)定,很容易變性。 ⑥蛋白復(fù)性后濃度低蛋白可能是在復(fù)性的過(guò)程中發(fā)生降解了。 可以將復(fù)性好的蛋白濃縮一下泡膠看看。復(fù)性過(guò)程一般都是低濃度蛋白,需要保證分子間有足夠的折疊空間。一些未正確折疊的蛋白就存在于沉淀中,可能沉淀看不出來(lái),復(fù)性后的蛋白高速離心看看。 ⑦復(fù)性中蛋白析出是怎么回事?該怎么處理?出現(xiàn)蛋白析出,肯定是條件變化太劇烈了。 復(fù)性應(yīng)該采取復(fù)性液濃度和PH值逐漸變化的方法,例如根據(jù)包涵體的溶液成分,每隔1個(gè)PH或濃度值配置一種溶液,逐步透析到正常。此外透析時(shí)必須濃度極低,條件溫和,使蛋白質(zhì)能夠正確折疊。但是復(fù)性的比率應(yīng)該很低。 若加變性劑尿素可加到2M,鹽酸胍可加到1-1.5M; 另外可將甘油濃度增加,范圍可在≤30%,且在復(fù)性樣品中也可加適量甘油。 ⑧復(fù)性效果的檢測(cè)根據(jù)具體的蛋白性質(zhì)和需要,可以從生化、免疫、物理性質(zhì)等方面對(duì)蛋白質(zhì)的復(fù)性效率進(jìn)行檢測(cè)。 凝膠電泳:一般可以用非變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳可以檢測(cè)變性和天然狀態(tài)的蛋白質(zhì),或用非還原的聚丙烯酰胺電泳檢測(cè)有二硫鍵的蛋白復(fù)性后二硫鍵的配對(duì)情況。光譜學(xué)方法:可以用紫外差光譜、熒光光譜、圓二色性光譜(CD)等,利用兩種狀態(tài)下的光譜學(xué)特征進(jìn)行復(fù)性情況的檢測(cè),但一般只用于復(fù)性研究中的過(guò)程檢測(cè)。色譜方法:如IEX、RP-HPLC、CE等,由于兩種狀態(tài)的蛋白色譜行為不同。生物學(xué)活性及比活測(cè)定:一般用細(xì)胞方法或生化方法進(jìn)行測(cè)定,較好的反映了復(fù)性蛋白的活性,值得注意的是,不同的測(cè)活方法測(cè)得的結(jié)果不同,而且常常不能完全反映體內(nèi)活性。黏度和濁度測(cè)定:復(fù)性后的蛋白溶解度增加,變性狀態(tài)時(shí)由于疏水殘基暴露,一般水溶性很差,大多形成可見(jiàn)的沉淀析出。免疫學(xué)方法:如ELISA、WESTERN等,特別是對(duì)結(jié)構(gòu)決定簇的抗體檢驗(yàn),比較真實(shí)的反映了蛋白質(zhì)的折疊狀態(tài)。 ⑨變性的融合蛋白可以制備多抗或者單抗嗎?變性蛋白只是天然蛋白伸直的產(chǎn)物,用來(lái)免疫動(dòng)物具有更強(qiáng)的抗原性。只是天然蛋白中被包在內(nèi)部的抗原決定簇也會(huì)暴露出來(lái),如果用該變性抗原制備的抗體來(lái)檢測(cè)變性抗原是可以的,如果用來(lái)檢測(cè)天然蛋白,可能會(huì)有假陽(yáng)性。做單抗也可以,同樣道理,篩選出的單抗可能對(duì)抗的抗原決定簇處于天然抗原的內(nèi)部,是否能用還要看將來(lái)該單抗用來(lái)干什么。 ⑩純化后的可溶性融合蛋白可以直接用于制備多抗嗎?免疫動(dòng)物要求抗原體種盡量小。在這種小體積的情況下,緩沖液里的小分子成分只要沒(méi)毒影響就不大,可以不用考慮。 更多蛋白復(fù)體詳情可以上義翹神州網(wǎng)咨詢!
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