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2025-05-10 23:36:57單細(xì)胞分離
單細(xì)胞分離是指從組織或細(xì)胞群中分離出單個(gè)細(xì)胞的過程。這種技術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究中非常重要，可以用于研究細(xì)胞功能、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞分化。單細(xì)胞分離技術(shù)包括機(jī)械分離、流式細(xì)胞排序和磁珠分離等方法。

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2020-12-01 15:57:40講座通知|單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)FluidFM BOT在單細(xì)胞分離中的應(yīng)用
報(bào)告日程報(bào)告時(shí)間應(yīng)用講座：2020年12月2日，上午09:30—10:30上機(jī)培訓(xùn)：2020年12月2日，上午10:40—11:40 ；下午13:30 開始報(bào)告地點(diǎn)應(yīng)用講座：北京大學(xué)金光樓311上機(jī)培訓(xùn)：北京大學(xué)金光樓126報(bào)告人&培訓(xùn)人胡西 博士多功能單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)FluidFM BOT簡(jiǎn)介       北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院公共儀器ZX引進(jìn)的多功能單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)FluidFM BOT，是國(guó)內(nèi)首套系統(tǒng)。于2020年9月順利安裝于金光樓126室并開始運(yùn)行，生科院公共儀器ZX覃思穎老師直接負(fù)責(zé)儀器的管理維護(hù)和樣本測(cè)試工作。       FluidFM BOT是一種將微量注射與原子力顯微鏡技術(shù)相結(jié)合的新一代單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)。它所整合的納米級(jí)位移臺(tái)能夠?qū)崿F(xiàn)在細(xì)胞表面進(jìn)行JZ的操作和fL級(jí)的流體控制。因此FluidFM BOT在技術(shù)層面上具有非常ZY的單細(xì)胞操縱能力。多功能單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)FluidFM BOT獨(dú)特秘籍        在當(dāng)代生物學(xué)與醫(yī)學(xué)的研究中，對(duì)單個(gè)細(xì)胞的分離一直有著很高的需求。然而傳統(tǒng)手段中卻鮮有能夠在原位無損的細(xì)胞分離的操作設(shè)備和技術(shù)。而FluidFM在這一方有著獨(dú)特的秘籍，它能夠在原位僅消化單個(gè)細(xì)胞并將其轉(zhuǎn)移到指定位置。使用FluidFM BOT進(jìn)行單細(xì)胞分離：通過fL壓力泵實(shí)現(xiàn)單個(gè)細(xì)胞的胰酶消化將單個(gè)細(xì)胞通過強(qiáng)大的微管探針直接抓取并放置在指定部位GX而簡(jiǎn)便化自動(dòng)操作多功能單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)FluidFM BOT應(yīng)用實(shí)例 1. 注射多種gRNAs和Cas9使用FluidFM BOT將熒光標(biāo)記物共注入CHO細(xì)胞，等待細(xì)胞表達(dá)。2. 候選克隆的單細(xì)胞分離將目標(biāo)細(xì)胞直接原位分離到新的培養(yǎng)板的指定位置。3.單克隆的擴(kuò)增與分析等待單克隆細(xì)胞系的增殖，在達(dá)到數(shù)量后進(jìn)行測(cè)序分析? 多個(gè)gRNAs同時(shí)注入? 活率:> 95%? 實(shí)時(shí)成像證明單克隆性? 活率:> 95%? 確保細(xì)胞系為單細(xì)胞克隆 ? ZJ生長(zhǎng)位置，避免邊緣效應(yīng)4. 植物原生質(zhì)體的單細(xì)胞分離——數(shù)據(jù)圖片來自北大生科院即使是脆弱而沉重的植物原生質(zhì)體，F(xiàn)luidFM BOT 也能夠“溫柔”地將其搬運(yùn)到指定位置，實(shí)現(xiàn)無損分離。5. 對(duì)菌群進(jìn)行單個(gè)細(xì)菌的分離即使是幾個(gè)微米的細(xì)菌，F(xiàn)luidFM BOT 也能夠?qū)⑺诺街付ú糠?，?shí)現(xiàn)單個(gè)細(xì)菌的定位操作。
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2020-11-12 15:26:35CloneSelect單細(xì)胞分離系統(tǒng)用于分選基因編輯的間充質(zhì)干細(xì)胞
基因工程細(xì)胞的同質(zhì)性對(duì)于很多應(yīng)用都是必要條件，例如細(xì)胞株開發(fā)、基因ZL、組織工程以及細(xì)胞ZL與再生醫(yī)學(xué)。CRISPR/Cas9基因編輯存在脫靶等情況，無法直接得到均質(zhì)的細(xì)胞，因此需要開展單細(xì)胞克隆，之后才能用于臨床。CloneSelect單細(xì)胞分離系統(tǒng)（CloneSelect Single Cell Printer）采用類似噴墨打印的技術(shù)，柔和地產(chǎn)生包裹細(xì)胞的液滴無接觸地直接分配到微孔板中（圖1）。同時(shí)，該系統(tǒng)借助智能圖像分析，確認(rèn)細(xì)胞數(shù)目，分析細(xì)胞的形態(tài)（大小和圓度）及熒光強(qiáng)度，聯(lián)動(dòng)的真空裝置將不符合要求的液滴（如空液滴或者含多個(gè)細(xì)胞的液滴）直接吸走，而符合要求的細(xì)胞液滴則分配至微孔板，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)單個(gè)細(xì)胞的分選和接種。單細(xì)胞分離系統(tǒng)是一種可比移液器操作的柔和的單細(xì)胞分離技術(shù)，而流式分選由于高的液體剪切力和電壓的影響，會(huì)降低敏感細(xì)胞和部分受損細(xì)胞（如電轉(zhuǎn)后的細(xì)胞）的成克隆率，因此單細(xì)胞分離系統(tǒng)更適用于基因工程細(xì)胞的克隆，維持細(xì)胞活力，并提供直接的單克隆性圖像證據(jù)。圖1：CloneSelect f.sight單細(xì)胞分離系統(tǒng)最近發(fā)表的一篇文章（Characterization of CRISPR/Cas9 RANKL knockout mesenchymal stem cell clones based on single-cell printing technology and emulsion coupling assay as a low-cellularity workflow for single-cell cloning），作者用CRISPR/Cas9對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）開展RANKL基因敲除以提高其骨骼形成能力。整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程起始于轉(zhuǎn)染，接著用CloneSelect f.sight單細(xì)胞分離系統(tǒng)開展單細(xì)胞克隆，隨后在DNA、RNA以及蛋白質(zhì)水平開展分析，ZH開展細(xì)胞功能分析（圖2）。圖2：基因編輯間充質(zhì)干細(xì)胞的單細(xì)胞克隆及分析流程。（圖片來源：文獻(xiàn)1）。作者在CRISPR/Cas9基因敲除質(zhì)粒中加入了GFP基因，轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞后，用具備熒光分選功能的CloneSelect f.sight系統(tǒng)分選出轉(zhuǎn)染成功的單細(xì)胞。系統(tǒng)可設(shè)定細(xì)胞直徑、圓度和熒光強(qiáng)度等指標(biāo)，分選出單個(gè)活細(xì)胞并接種至微孔板。圖3為系統(tǒng)分選基因編輯的間充質(zhì)干細(xì)胞的5張連續(xù)的圖像。通過瀏覽單細(xì)胞分離過程中記錄的5張連續(xù)的圖像，作者統(tǒng)計(jì)單細(xì)胞接種的成功率為93.9±2.7%（n=451），即僅有~6%的孔為多細(xì)胞孔，或空孔或無法確認(rèn)（圖4）。這一結(jié)果表明f.sight單細(xì)胞分離系統(tǒng)可以準(zhǔn)確地識(shí)別細(xì)胞并成功將其接種至微孔內(nèi)。圖3：CloneSelect f.sight系統(tǒng)分選間充質(zhì)干細(xì)胞時(shí)采集的5張連續(xù)圖像，可用于證明單克隆性。（圖片來源：文獻(xiàn)1）。除了帶GFP的基因敲除質(zhì)粒外，作者還將pmaxGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至間充質(zhì)干細(xì)胞作為對(duì)照用于評(píng)估單細(xì)胞分離效率和克隆率。此外，作者轉(zhuǎn)染了多個(gè)不同的基因敲除質(zhì)粒。雖然不同的質(zhì)粒因?yàn)榇笮〔煌尸F(xiàn)各異的轉(zhuǎn)染效率，但是成克隆率都達(dá)到了30%。此外，作者還發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的間充質(zhì)干細(xì)胞（31.3±8%）和未轉(zhuǎn)染的間充質(zhì)干細(xì)胞（39.6±15.6%）在成克隆率上差異較小，這也表明f.sight的單細(xì)胞分選過程柔和，因此產(chǎn)生的系統(tǒng)偏差較?。▓D4）。圖4：CloneSelect f.sight單細(xì)胞分離系統(tǒng)的高接種效率（左）和高成克隆率（右）。（圖片來源：文獻(xiàn)1）。接著作者采用surveyor assay、RT-PCR和emulsion coupling分別從DNA、RNA和蛋白質(zhì)水平對(duì)基因編輯后的間充質(zhì)單細(xì)胞開展分析。ZH作者選出一株雙等位基因敲除的間充質(zhì)干細(xì)胞（g23d）檢測(cè)其成骨分化的能力，并以未編輯的MSC為對(duì)照開展平行實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞轉(zhuǎn)移到成骨分化培養(yǎng)基后，分別在第7天、14天和21天用茜素紅染色。在第14天，細(xì)胞失去細(xì)長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，開始呈現(xiàn)出成骨細(xì)胞樣的形態(tài)，然后在第21天開始出現(xiàn)鈣沉積，發(fā)展過程與親本的MSC對(duì)照類似（圖5）。這表明基因編輯后的MSC其成骨分化能力并沒有因?yàn)榛蚓庉嫼秃Y選過程而受到影響。圖5：RANKL基因敲除的間充質(zhì)干細(xì)胞（g23d）和親本間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)和成骨分化。（圖片來源：文獻(xiàn)1）。在這個(gè)研究中，作者搭建了一整套實(shí)驗(yàn)流程，起始于CRISPR/Cas9基因編輯，單細(xì)胞克隆以及DNA、RNA和蛋白質(zhì)各個(gè)水平的分析和細(xì)胞功能測(cè)試。實(shí)驗(yàn)流程中采用CloneSelect f.sight單細(xì)胞分離系統(tǒng)成功GX地分選出基因編輯后帶GFP的間充質(zhì)干細(xì)胞。單細(xì)胞接種效率高達(dá)93.9% (± 2.7%)，且成克隆率高達(dá)31.3% (±8%)。相比傳統(tǒng)的有限稀釋法和流式分選，CloneSelect單細(xì)胞分離系統(tǒng)具有GX率，高活率，操作簡(jiǎn)單，單克隆性證據(jù)充分等優(yōu)勢(shì)，是基因工程細(xì)胞克隆的理想工具。
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2023-03-07 22:09:15高通量單細(xì)胞力譜測(cè)定！多功能單細(xì)胞顯微操作技術(shù)助力單細(xì)胞力學(xué)研究
單程細(xì)胞具有復(fù)雜生物學(xué)性質(zhì)，它們通過細(xì)胞外基質(zhì)ECM形成緊密的細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞與細(xì)胞連接，諸如上皮細(xì)胞通過這種特殊的鏈接方式構(gòu)成了屏障層保護(hù)人體免受外界損傷。因此細(xì)胞之間以及細(xì)胞基底的粘附力測(cè)定對(duì)于研究細(xì)胞粘附蛋白的機(jī)制有著重要意義。使用力學(xué)工具測(cè)量細(xì)胞間以及細(xì)胞與基質(zhì)之間的粘附力始終不是一件容易的事情。首先，由于細(xì)胞與基質(zhì)的作用力僅為nN級(jí)別，因此需要力學(xué)精度較高的設(shè)備才能夠測(cè)量，而且在這其中較為適合的工具為原子力顯微鏡（AFM）。原子力顯微鏡能夠提供納米級(jí)別的操作精度并可測(cè)量從pN~nN范圍的力譜。但是受制于AFM探針本身的限制，需要借助修飾手段才能夠讓細(xì)胞與探針固定到一起，這個(gè)過程十分繁瑣，并且由于需要大量手工操作很難實(shí)現(xiàn)高通量的測(cè)量。而不同的細(xì)胞由于細(xì)胞異質(zhì)性使得要想確定粘附力需要較多樣本才能獲得相對(duì)準(zhǔn)確的值，無法實(shí)現(xiàn)高通量測(cè)量直接限制了原子力探針在細(xì)胞粘附力上的應(yīng)用。而多功能單細(xì)胞顯微操作FluidFM技術(shù)的出現(xiàn)改變了這一現(xiàn)狀，它使用特殊的中空探針能夠輕松地通過負(fù)壓抓取細(xì)胞，取得和AFM近似精度的數(shù)據(jù)，無需在探針上進(jìn)行任何修飾，不會(huì)改變細(xì)胞表面的任何通路，從而能夠得到接近細(xì)胞原生的數(shù)據(jù)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后能夠通過正壓快速丟棄用過的細(xì)胞，具備很高的自動(dòng)化，能夠快速測(cè)量細(xì)胞粘附力。使用FluidFM對(duì)細(xì)胞操作的基本流程 FluidFM在粘附力測(cè)量上具備顯著優(yōu)勢(shì)。如圖所示，F(xiàn)luidFM能夠通過負(fù)壓將細(xì)胞吸附到原子力探針的末端，通過高精度位移臺(tái)的控制將細(xì)胞從基底上分離，并且同時(shí)記錄FD曲線。通過FD曲線能夠獲得最大粘附力Fmax和粘附能量Emax。通過高度自動(dòng)化的控制系統(tǒng)能夠在短時(shí)間內(nèi)測(cè)量大量細(xì)胞粘附力，評(píng)估細(xì)胞群體分布以及細(xì)胞間差異，并且可有效避免傳統(tǒng)粘附力測(cè)量因準(zhǔn)備時(shí)間過長(zhǎng)而錯(cuò)過最佳測(cè)量時(shí)間導(dǎo)致的細(xì)胞粘附力改變，得到更為精準(zhǔn)的結(jié)果。近期，Agoston等人使用多功能單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)FluidFM實(shí)現(xiàn)了高通量細(xì)胞粘附力測(cè)量，對(duì)同種細(xì)胞不同區(qū)以及不同細(xì)胞之間的粘附力進(jìn)行測(cè)量和比較。作者首先對(duì)Vero和Hela細(xì)胞在不同狀態(tài)下的粘附力進(jìn)行了測(cè)量和比較，總共測(cè)量了214個(gè)細(xì)胞。通過比較明膠涂層上處于單個(gè)細(xì)胞、孤島狀細(xì)胞、致密連接細(xì)胞以及單層細(xì)胞上游離細(xì)胞之間的粘附力，能夠明顯觀測(cè)到Vero細(xì)胞處于致密連接的細(xì)胞粘附力最大，大概在750 nN左右，隨著細(xì)胞單細(xì)胞層的稀疏，細(xì)胞粘附力有所下降，而處于細(xì)胞層頂部的細(xì)胞粘附力最低僅為50 nN左右。這一點(diǎn)充分說明上皮細(xì)胞能夠在細(xì)胞之間形成緊密的連接，而處于細(xì)胞層外的細(xì)胞則幾乎沒有粘附力。而對(duì)于HeLa這樣的腫瘤細(xì)胞測(cè)量的結(jié)果卻顯示出了截然不同的結(jié)果，處于不同狀態(tài)的細(xì)胞有著近似的粘附力，基本都在200 nN左右，這與處于單個(gè)游離上皮細(xì)胞的粘附力十分接近，表明HeLa細(xì)胞在不同環(huán)境下仍然具有較高遷徙能力。使用FluidFM對(duì)不同區(qū)域細(xì)胞的FD曲線測(cè)定結(jié)果和對(duì)比        通過對(duì)這兩種細(xì)胞的最大粘附力、最大粘附能量、最大拉伸距離和細(xì)胞接觸面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析可以發(fā)現(xiàn)，HeLa腫瘤細(xì)胞在粘附力和粘附能量上均有所降低，但是當(dāng)HeLa細(xì)胞形成了單層后，兩者區(qū)別不大。對(duì)比Hela和Vero在不同生長(zhǎng)狀態(tài)下的最大粘附力、最大粘附能量、粘附拉伸距離和粘附面積。再進(jìn)一步對(duì)Vero與HeLa細(xì)胞最大粘附力與距離和接觸面積進(jìn)行對(duì)比，依然可以得到與單獨(dú)比較粘附力相同的結(jié)果，并且最大能量與細(xì)胞接觸面積的比值中也存在著類似的結(jié)果。由此可見腫瘤細(xì)胞通過降低自身粘附力從而獲得了更好的遷移能力。對(duì)不同狀態(tài)Vero和A549之間的粘附力/粘附距離、粘附力/粘附面積、粘附能量/粘附面積 總結(jié)       細(xì)胞粘附力測(cè)定在細(xì)胞生命科學(xué)研究中起著至關(guān)重要的作用，然而傳統(tǒng)手段中有著各種各樣的局限性，主要原因是缺乏一種有效抓取細(xì)胞并進(jìn)行力學(xué)測(cè)定的手段?，F(xiàn)如今FluidFM技術(shù)在細(xì)胞粘附力測(cè)定中的應(yīng)用，使得研究者們有了一種能夠有效、低損的方式抓取細(xì)胞，配合原子力顯微鏡精確測(cè)量的特性，真正意義上做到精準(zhǔn)、無損、快速的測(cè)量單細(xì)胞粘附力，幫助研究者尋找細(xì)胞粘附力與細(xì)胞生命發(fā)展、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。 【參考文獻(xiàn)】[1] A. Sancho, M. B. Taskin, L. Wistlich, P. Stahlhut, K. Wittmann, A. Rossi & J. Groll. Cell Adhesion Assessment Reveals a Higher Force per Contact Area on Fibrous Structures Compared to Flat Surfaces. ACS Biomater. Sci. Eng. 2022, 8, 2, 649–658.[2] P.W. Doll, K. Doll, A. Winkel, R. Thelen, R. Ahrens, M. Stiesch & A.E. Guber. Influence of the Available Surface Area and Cell Elasticity on Bacterial Adhesion Forces on Highly Ordered Silicon Nanopillars. ACS Omega. 2022, 7, 21, 17620–17631.[3] Sankaran, S. Jaatinen, L. Brinkmann, J. Zambelli, T. V?r?s, J. Jonkheijm, P. Cell adhesion on dynamic supramolecular surfaces probed by fluid force microscopy-based single-cell force spectroscopy. ACS Nano 2017, 11, 3867–3874.[4] Sancho, A. Vandersmissen, I. Craps, S. Luttun, A. Groll, J. A new strategy to measure intercellular adhesion forces in mature cell-cell contacts. Sci. Rep. 2017, 7, 46152.[5] Ines, Lüchtefeld. Alice, Bartolozzi. Julián M. M. Oana, Dobre. Michele, Basso. Tomaso, Zambelli. Massimo, Vassalli. Elasticity spectra as a tool to investigate actin cortex mechanics. J Nanobiotechnol. 2020, 18, 147.[6] Dehullu, J. Valotteau, C. Herman-Bausier, P. Garcia-Sherman, M. Mittelviefhaus, M. Vorholt, J. A. Lipke, P. N. Dufrene, Y. F. Fluidic force microscopy demonstrates that homophilic adhesion by Candida albicans Als proteins is mediated by amyloid bonds between cells. Nano Lett. 2019, 19, 3846–3853.[7] Mittelviefhaus, M. Müller, D. B. Zambelli, T. Vorholt, J. A. A modular atomic force microscopy approach reveals a large range of hydrophobic adhesion forces among bacterial members of the leaf microbiota. ISME J. 2019, 13, 1878–1882.[8] F. Weigl, C. Blum, A. Sancho & J. Groll. Correlative Analysis of Intra- versus Extracellular Cell Detachment Events vis the Alignment of Optical Imaging and Detachment Force Quantification. Adv. Mater. Technol. 2022, 2200195.【相關(guān)產(chǎn)品】　　多功能單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)- FluidFM OMNIUM:http://www.sdczts.cn/zt2203/product_386418.html
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2023-02-24 11:28:18高通量、自動(dòng)化單細(xì)胞力譜測(cè)定！多功能單細(xì)胞顯微操作全新技術(shù)助力單細(xì)胞力學(xué)研究
研究現(xiàn)狀單程細(xì)胞具有復(fù)雜生物學(xué)性質(zhì)，它們通過細(xì)胞外基質(zhì)ECM形成緊密的細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞與細(xì)胞連接，諸如上皮細(xì)胞通過這種特殊的鏈接方式構(gòu)成了屏障層保護(hù)人體免受外界損傷。因此細(xì)胞之間以及細(xì)胞基底的粘附力測(cè)定對(duì)于研究細(xì)胞粘附蛋白的機(jī)制有著重要意義。使用力學(xué)工具測(cè)量細(xì)胞間以及細(xì)胞與基質(zhì)之間的粘附力始終不是一件容易的事情。首先，由于細(xì)胞與基質(zhì)的作用力僅為nN級(jí)別，因此需要力學(xué)精度較高的設(shè)備才能夠測(cè)量，而且在這其中較為適合的工具為原子力顯微鏡（AFM）。原子力顯微鏡能夠提供納米級(jí)別的操作精度并可測(cè)量從pN~nN范圍的力譜。但是受制于AFM探針本身的限制，需要借助修飾手段才能夠讓細(xì)胞與探針固定到一起，這個(gè)過程十分繁瑣，并且由于需要大量手工操作很難實(shí)現(xiàn)高通量的測(cè)量。而不同的細(xì)胞由于細(xì)胞異質(zhì)性使得要想確定粘附力需要較多樣本才能獲得相對(duì)準(zhǔn)確的值，無法實(shí)現(xiàn)高通量測(cè)量直接限制了原子力探針在細(xì)胞粘附力上的應(yīng)用。多功能單細(xì)胞顯微操作FluidFM技術(shù)多功能單細(xì)胞顯微操作FluidFM技術(shù)的出現(xiàn)改變了這一現(xiàn)狀，它使用特殊的中空探針能夠輕松地通過負(fù)壓抓取細(xì)胞，取得和AFM近似精度的數(shù)據(jù)，無需在探針上進(jìn)行任何修飾，不會(huì)改變細(xì)胞表面的任何通路，從而能夠得到接近細(xì)胞原生的數(shù)據(jù)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后能夠通過正壓快速丟棄用過的細(xì)胞，具備很高的自動(dòng)化，能夠快速測(cè)量細(xì)胞粘附力。使用FluidFM對(duì)細(xì)胞操作的基本流程FluidFM在粘附力測(cè)量上具備顯著優(yōu)勢(shì)。如圖所示，F(xiàn)luidFM能夠通過負(fù)壓將細(xì)胞吸附到原子力探針的末端，通過高精度位移臺(tái)的控制將細(xì)胞從基底上分離，并且同時(shí)記錄FD曲線。通過FD曲線能夠獲得最 大粘附力Fmax和粘附能量Emax。通過高度自動(dòng)化的控制系統(tǒng)能夠在短時(shí)間內(nèi)測(cè)量大量細(xì)胞粘附力，評(píng)估細(xì)胞群體分布以及細(xì)胞間差異，并且可有效避免傳統(tǒng)粘附力測(cè)量因準(zhǔn)備時(shí)間過長(zhǎng)而錯(cuò)過最 佳測(cè)量時(shí)間導(dǎo)致的細(xì)胞粘附力改變，得到更為精 準(zhǔn)的結(jié)果。
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2023-05-20 12:59:12測(cè)定單克隆細(xì)菌群體中單細(xì)胞對(duì)抗生素的敏感性
鑒于抗菌素耐藥性的出現(xiàn)，了解細(xì)胞群體對(duì)抗生素反應(yīng)的異質(zhì)性至關(guān)重要。因?yàn)樗幬锟梢允┘舆x擇壓力，導(dǎo)致抗性表型的出現(xiàn)。迄今為止，無論是整體方法還是單細(xì)胞方法都無法將單細(xì)胞易感性的異質(zhì)性與人群對(duì)抗生素的反應(yīng)聯(lián)系起來。在這里，我們提出了一個(gè)平臺(tái)，通過使用錨定微流體滴和圖像和數(shù)據(jù)分析管道，測(cè)量單個(gè)大腸桿菌細(xì)胞在不同環(huán)丙沙星濃度下形成小菌落的能力。微流控結(jié)果與抗生素敏感性的經(jīng)典微生物學(xué)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行了基準(zhǔn)測(cè)試，顯示池微流控芯片與重復(fù)的批量測(cè)量結(jié)果之間的一致性。此外，單細(xì)胞形成菌落的實(shí)驗(yàn)可能性用于提供概率抗生素敏感性曲線。除了概率觀點(diǎn)外，微流控格式還可以隨著時(shí)間的推移對(duì)大量單個(gè)細(xì)胞的形態(tài)特征進(jìn)行表征。該管道可用于比較不同菌株對(duì)具有不同作用機(jī)制的抗生素的反應(yīng)。
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