層析技術(shù)是生物藥物生產(chǎn)中最關(guān)鍵的純化步驟。生物藥物經(jīng)培養(yǎng)、收集后，通過層析介質(zhì)分離純化，最終獲得符合質(zhì)量要求的產(chǎn)品。在此過程中，物料中的雜質(zhì)也污染了層析介質(zhì)。這些污染物包括宿主蛋白、核酸、脂類、培養(yǎng)代謝產(chǎn)物、內(nèi)毒素、雜菌及試劑雜質(zhì)等，在下一次的分離純化中可能會(huì)污染目標(biāo)產(chǎn)品，因此必須通過層析介質(zhì)清洗（CIP）過程將其去除或降至安全水平。
層析介質(zhì)屬于消耗品，經(jīng)多次使用與清洗后，若污染物殘留量超出安全閾值，其使用壽命即告終止，只有更換新的層析介質(zhì)才能保證生物藥品的質(zhì)量。
- PART.01 -
在物料中含有大量的雜蛋白，這些雜蛋白根據(jù)性質(zhì)不同，可分為：可溶性雜蛋白、沉淀蛋白、疏水性蛋白、脂蛋白或脂類。
凝膠過濾介質(zhì)
一般使用0.1-0.5M的NaOH清洗0.5-1個(gè)(CV)柱床體積；然后超純水1-2個(gè)CV。
離子交換介質(zhì)
2M NaCl清洗0.5CV；或至少接觸10-15min。
疏水層析介質(zhì)
超純水(低離子強(qiáng)度的緩沖液)清洗2-3個(gè)CV，或使用30%異丙醇清洗2-3個(gè)CV。
親和層析介質(zhì)
根據(jù)層析介質(zhì)的性質(zhì)使用適當(dāng)?shù)木彌_液清洗可溶性雜蛋白。
GF/IEX/HIC層析介質(zhì)
0.5-1M NaOH清洗3-4個(gè)CV，然后使用超純水沖洗pH至中性。
親和層析介質(zhì)
一般使用尿素或鹽酸胍清洗1-2個(gè)CV。
GF/IEX/HIC層析介質(zhì)
0.5-1M NaOH清洗3-4個(gè)CV，然后使用超純水沖洗pH至中性。
親和層析介質(zhì)
一般使用尿素或鹽酸胍清洗1-2個(gè)CV。
對于吸附較強(qiáng)的脂類可以優(yōu)化70%的乙醇或30%的異丙醇清洗1-2個(gè)CV。
- PART.02 -
內(nèi)毒素是生物制藥工藝生產(chǎn)中必須去除的物質(zhì)，NaOH對內(nèi)毒素有較好的去除效果，在內(nèi)毒素的去除試驗(yàn)中0.5-1.0M NaOH的濃度作用4-6h會(huì)有較好的效果。但是在實(shí)際的生產(chǎn)中，如果是連續(xù)生產(chǎn)中的CIP時(shí)，一般使用0.1-0.5M NaOH接觸15-30min或清洗1個(gè)CV就可完成去除殘余內(nèi)毒素以及層析介質(zhì)的消毒工作。對于已經(jīng)保存了一段時(shí)間的層析介質(zhì)，一般需要較長的時(shí)間，做去除內(nèi)毒素與消毒工作。
- PART.03 -
核酸帶負(fù)電，與陰離子交換吸附較強(qiáng)，實(shí)踐證明1M NaOH+1M NaCl對核酸的去除效果較好。病毒的滅活在工業(yè)生產(chǎn)中是極為重要的。尤其是動(dòng)物細(xì)胞來源的表達(dá)產(chǎn)物，對病毒的要求較高。NaOH對病毒的滅活有較好的作用。
- PART.04 -
*每一步水洗都是為去除介質(zhì)溶液中的其它物質(zhì)。
*EDTA是螯合劑，脫過渡金屬離子。
*NaCl用于除去介質(zhì)中以離子作用結(jié)合或者非特異性結(jié)合的物質(zhì)。
*NaOH用于去除沉積在介質(zhì)上的蛋白和脂類物質(zhì)。
*NiSO4為介質(zhì)提供過渡金屬離子。
*EtOH用于介質(zhì)保存。
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