ELISA實(shí)驗(yàn)原理：ELISA的原理、類型及操作步驟

　　ELISA的原理

　　ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

　　ELISA方法類型和操作步驟

　　elisa可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標(biāo)記的抗原或抗體，③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。

　　(一)雙抗體夾心法

　　雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原最常用的方法，操作步驟如下：

　　(1)將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。

　　(2)加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。

　　(3)加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。

　　(4)加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。

　　根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物，即可用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。

　　(二)雙位點(diǎn)一步法

　　在雙抗體夾心法測(cè)定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步不但簡(jiǎn)化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的ELISA提高到新水平。

　　在一步法測(cè)定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)(hookeffect)，類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

　　(三)間接法測(cè)抗體

　　間接法是檢測(cè)抗體最常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：

　　(1)將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。

　　(2)加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過程中被洗去。

　　(3)加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接dibiao記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測(cè)人對(duì)某種疾病的抗體，可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。

　　(4)加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。

　　本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。

　　(四)競(jìng)爭(zhēng)法

　　競(jìng)爭(zhēng)法可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：

　　(1)將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。

　　(2)待測(cè)管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無抗原，則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原，則與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會(huì)與固相抗體結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會(huì)，使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原，保溫后，酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)最充分的量。洗滌。

　　(3)加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測(cè)管顏色深度之差，代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測(cè)管顏色越淡，表示標(biāo)本中抗原含量越多。

　　(五)捕獲法測(cè)IgM抗體

　　血清中針對(duì)某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時(shí)存在，后者會(huì)干擾IgM抗體的測(cè)定。因此測(cè)定IgM抗本多用捕獲法，先將所有血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再測(cè)定特異性IgM。操作步驟如下：

　　(1)將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。

　　(2)加入稀釋的血清標(biāo)本：保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分。

　　(3)加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。洗滌。

　　(4)加入針對(duì)特異性的酶標(biāo)抗體：使之與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)結(jié)合。洗滌。

　　(5)加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標(biāo)本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應(yīng)。

　　(六)應(yīng)用親和素和生物素的ELISA

　　ELISA實(shí)驗(yàn)原理：ELISA的原理、類型及操作步驟!本生(天津)健康科技有限公司由具有行業(yè)背景和豐富市場(chǎng)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人士組成，于為生命科學(xué)研究領(lǐng)域提供產(chǎn)品，為廣大科研工作者提供服務(wù)。 既能滿足研發(fā)類客戶對(duì)產(chǎn)品種類、包裝的特殊要求，也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試、中試到規(guī)?；a(chǎn)各個(gè)階段的綜合需求。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來。

TG-801灼熱絲試驗(yàn)儀的操作方法及步驟概述：

1：制作樣品。:

2：將所需樣品固定于試驗(yàn)架上調(diào)整夾具。

3：插上機(jī)箱側(cè)面電源線，確認(rèn)進(jìn)線電源是否有良好接地，電源電壓為AC220V。

4：調(diào)整計(jì)時(shí)表：ta.ti.te試驗(yàn)所需時(shí)間范圍。（計(jì)時(shí)表ta 為試驗(yàn)時(shí)間。計(jì)時(shí)表ti 為試驗(yàn)到試驗(yàn)品起燃時(shí)間。計(jì)時(shí)表te 為試驗(yàn)到試驗(yàn)品熄滅時(shí)間。）

5：將灼熱絲試驗(yàn)儀開啟電源開關(guān)，檢查儀表是否正常。

6：調(diào)整試驗(yàn)所需溫度、待溫度表顯示值到試驗(yàn)所需溫度，按啟動(dòng)鍵，即進(jìn)入試驗(yàn)，注ti.te兩個(gè)鍵均為自鎖鍵，如果ti.te鍵彈出，按啟動(dòng)鍵后，則進(jìn)入全部計(jì)時(shí)狀態(tài)。

7：當(dāng)加溫時(shí)間計(jì)時(shí)完畢時(shí)，載樣小車將自動(dòng)脫離。停止加溫。

8：觀察試驗(yàn)品，起燃時(shí)按下ti鍵，計(jì)時(shí)表ti開始計(jì)時(shí)。

9：觀察試驗(yàn)品在燃燒過程中所掉下的殘?jiān)紵驮囼?yàn)品到熄滅時(shí)立即按te鍵，計(jì)時(shí)表te開始計(jì)時(shí)。燃燒時(shí)記錄火焰高度。

10：灼熱絲試驗(yàn)儀試驗(yàn)結(jié)束，按下“排風(fēng)按鈕”，排出煙霧。

11：關(guān)閉電源開關(guān)，按下ti、te鍵。

12：取下試驗(yàn)品，記錄試驗(yàn)結(jié)果，清潔箱內(nèi)污垢，關(guān)閉排風(fēng)口，關(guān)閉總電源開關(guān)。

垂直軸偏差是玻璃瓶的一項(xiàng)重要理化性能指標(biāo)。垂直軸偏差不合格不僅影響制藥廠對(duì)藥品的罐裝，還會(huì)造成藥水或其他盛裝物的損失。在YBB00192003中規(guī)定的垂直軸偏差是指玻璃瓶繞瓶底中心軸旋轉(zhuǎn)一周時(shí)，瓶口的中心繞瓶底中心軸所作圓的直徑的二分之一。

隨著藥包材管理規(guī)范中對(duì)藥用玻璃瓶的軸偏差有著嚴(yán)格的規(guī)定，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)明確出臺(tái)了關(guān)于垂直軸偏差測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)，從而促使藥用包裝玻璃瓶企業(yè)的生產(chǎn)規(guī)范化，進(jìn)而較大程度保證藥品包裝材料的質(zhì)量。GB/T 8452-2008標(biāo)準(zhǔn)明確制定了玻璃瓶罐垂直軸偏差試驗(yàn)方法；《QB/T1868-2004聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯(PET)碳酸飲料瓶》也出臺(tái)了相關(guān)的飲料瓶的軸偏差數(shù)值；國(guó)家藥品包裝容器YBB00192003《垂直軸偏差測(cè)定法》對(duì)西林瓶、安瓿瓶、輸液瓶等垂直軸偏差的測(cè)量與規(guī)定定期進(jìn)行更新矯正。

濟(jì)南賽成儀器研發(fā)的ZPY-G 電子軸偏差測(cè)試儀專業(yè)用于輸液瓶、西林瓶、口服液瓶、藥用塑料瓶各種瓶容器的垂直度偏差檢測(cè)。

玻璃瓶軸偏差測(cè)試方法操作步驟

1.玻璃瓶罐夾持在水平旋轉(zhuǎn)底盤上，使瓶口與百分表接觸，旋轉(zhuǎn)360°讀取較大值和較小值，較大值和較小值之差的1/2即為垂直軸偏差數(shù)值。如用附有V形塊的底板時(shí)，則將樣品緊靠在V形塊上，測(cè)量時(shí)在與水平面成45°的方向上對(duì)樣品施加一個(gè)向下的壓力，并旋轉(zhuǎn)玻璃瓶罐360°。

2.記下瓶口邊緣外側(cè)與固定點(diǎn)之間的較大和較下距離，垂直軸偏差是測(cè)得的較大值和較小值之差的一半。

3.測(cè)量數(shù)值的精度應(yīng)不小于0.1mm。。

4.按精度修正由實(shí)測(cè)得到的垂直軸偏差。

賽成儀器生產(chǎn)的ZPY-G 電子軸偏差測(cè)試儀嚴(yán)格按照YBB00192003-2015《垂直軸偏差測(cè)定法》中規(guī)定設(shè)計(jì)，PVC面板設(shè)計(jì)，簡(jiǎn)單直觀，操作方便，測(cè)量頭自動(dòng)升降，調(diào)節(jié)測(cè)點(diǎn)位置，方便實(shí)用，配有微型打印機(jī)，快速打印測(cè)試結(jié)果，自動(dòng)統(tǒng)計(jì)較大值、較小值、偏差值，方便用戶分析結(jié)果，是玻璃瓶垂直軸偏差檢測(cè)的理想選擇。