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  人一氧化氮（NO）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒僅供研究使用，用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中一氧化氮（NO）的含量。實驗原理：應用雙抗體夾心法測定標本中人一氧化氮（NO）水平。用純化的一氧化氮（NO）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入一氧化氮（NO），再與HRP標記的羊抗人抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的一氧化氮（NO）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人一氧化氮（NO）濃度。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品：225μmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存操作步驟：1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在**、第二孔中分別加標準品100μl，然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為150μmol/L，100μmol/L，50μmol/L，25μmol/L，12.5μmol/L）。2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項：1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標準曲線，**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。DrugNamesGenericName：Humannitricoxide（NO）ELISAKit.PurposeThiskitallowsforthedeterminationofNOconcentrationsinHumanserum,bloodplasma,andotherbiologicalfluids.PrincipleoftheassayThekitassayHumanNOlevelinthesample，usePurifiedHumanNOantibodytocoatmicrotiterplatewells,makesolid-phaseantibody,thenaddNOtowells,CombinedNOantibodywhichWithHRPlabeled,becomeantibody-antigen-enzyme-antibodycomplex,afterwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,TMBsubstratebecomesbluecolorAtHRPenzyme-catalyzed,reactionisterminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolorchangeismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450nm.TheconcentrationofNOinthesamplesisthendeterminedbycomparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.Assayprocedure1.DiluteandaddsampletoStandard:set10StandardwellsontheELISAplatescoated,addStandard100μltothefirstandthesecondwell,thenaddStandarddilution50μltothefirstandthesecondwell,mix;takeout100μlformthefirstandthesecondwellthenaddittothethirdandtheforthwellseparately.thenaddStandarddilution50μltothethirdandtheforthwell,mix;thentakeout50μlfromthethirdandtheforthwelldiscard,add50μltothefifthandthesixthwell,thenaddStandarddilution50μltothefifthandthesixthwell,mix;takeout50μlfromthefifthandthesixthwellandaddtotheseventhandtheeighthwell,thenaddStandarddilution50μltotheseventhandtheeighthwell,mix;takeout50μlfromtheseventhandtheeighthwellandaddtotheninthandthetenthwell,addStandarddilution50μltotheninthandthetenthwell,mix,takeout50μlfromtheninthandthetenthwelldiscard（addSample50μltoeachwellafterDiluting,（density:150μmol/L，100μmol/L，50μmol/L，25μmol/L，12.5μmol/L）2.addsample：Setblankwellsseparately（blankcomparisonwellsdon’taddsampleandHRP-Conjugatereagent,othereachstepoperationissame）.testingsamplewell.addSampledilution40μltotestingsamplewell,thenaddtestingsample10μl（samplefinaldilutionis5-fold）,addsampletowells,don’ttouchthewellwallasfaraspossible,andGentlymix.3.Incubate:AfterclosingplatewithClosureplatemembrane,incubatefor30minat37℃.4.Configurateliquid:30-fold（or20-fold）washsolutiondiluted30-fold（or20-fold）withdistilledwaterandreserve.5.washing：UncoverClosureplatemembrane,discardLiquid,drybyswing,addwashingbuffertoeverywell,stillfor30sthendrain,repeat5times,drybypat.6.addenzyme：AddHRP-Conjugatereagent50μltoeachwell,exceptblankwell.7.incubate：Operationwith3.8.washing：Operationwith5.9.color：AddChromogenSolutionA50ulandChromogenSolutionBtoeachwell,evadethelightpreservationfor15minat37℃10.Stopthereaction：AddStopSolution50μltoeachwell,Stopthereaction（thebluecolorchangetoyellowcolor）.11.assay：takeblankwellaszero,Readabsorbanceat450nmafterAddingStopSolutionandwithin15min.Storage：2-8℃.validity：sixmonths備注：僅供科學研究實驗使用，以上信息僅供參考，具體產(chǎn)品信息以隨貨說明書為準。上海華壹生物科技有限公司訪問網(wǎng)址：http://www.huayi-bio.com咨詢電話：021-24209192，021-24209195，13661674336[詳細]

  2018-11-15 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 酵母雙雜交的實驗步驟和技巧分析

  LexA酵母雙雜交系統(tǒng)簡介一、LexA酵母雙雜交系統(tǒng)的設計原理報告質(zhì)粒p8op-LacZ的GAL4UAS編碼序列被完全去除，因此在缺乏LexA融合激活劑的情況下，報告基因LacZ的轉(zhuǎn)錄活性為零，該基因的篩選標志為URA3，可以作為有自主復制能力的質(zhì)粒存在于酵母EGY48菌株中，也可以被整合到EGY48基因組DNA上。質(zhì)粒pLexA的篩選標志為HIS3，在雙雜交系統(tǒng)中用于表達DNA-BD（202個氨基酸殘基組成的LexA蛋白）與目標蛋白（釣餌，Bait）的融合蛋白，該融合體的表達受酵母強啟動子ADH1的調(diào)控，選擇與報告基因的操縱子LexA×8結合。質(zhì)粒pB42AD的篩選標志為TRP1，在其供外源基因插入的多克隆位點（EcoRI與XhoI）上游，含有SV40核定位（SV40nuclearlocalization）、HA（血凝素）及AD（來自于E.coli的88個氨基酸殘基組成的B42蛋白）等幾種編碼序列，共同組成可以啟動報告基因轉(zhuǎn)錄表達的激活成份。在酵母EGY48的基因組中還整合有另一個報告基因Leu，它與LacZ報告基因具有相同的操縱子-LexA，但兩者啟動子不同。根據(jù)雙雜交系統(tǒng)的原理，如果某一復合物同時具有DNA-BD和AD的活性，即可激活報告基因的轉(zhuǎn)錄和表達。分別將待測蛋白X、Y的編碼序列插入pLexA質(zhì)粒載體和pB42AD質(zhì)粒載體的多克隆位點中，然后共同轉(zhuǎn)入含有報告基因的酵母菌株，如果蛋白X與Y能相互作用，則啟動報告基因的轉(zhuǎn)錄和表達，通過檢測報告基因的表達情況，就可以間接反映蛋白X、Y是否具有相互作用以及作用的強弱。如果將蛋白Y換為取自組織或血液的cDNA文庫，則可用X從該文庫中篩選出能與其相互作用的蛋白，并且可以獲得編碼這些蛋白的cDNA。二、商品化酵母雙雜交系統(tǒng)的組成1.載體質(zhì)粒：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ、pB42AD-DNA文庫2.酵母菌株：EGY48、EGY48（p8op-LacZ）、YM4271（EGY48的伴侶菌株）3.大腸桿菌菌株：E.coliKC8株4.對照質(zhì)粒：質(zhì)粒用途pLexA-53，pB42AD-T陽性對照pLexA-Pos（LexA/GAL4AD融合蛋白〕陽性對照pLexA-Lam（LaminC蛋白少與其它蛋白相互作用）假陽性檢測質(zhì)粒5.引物：pLexA測序引物及pB42AD測序引物。三、酵母雙雜交實驗的基本流程1.將報告基因p8op-LacZ轉(zhuǎn)化酵母EGY48菌株，用培養(yǎng)基SD/-Ura篩選。2.同時構建或擴增DNA文庫，并純化足夠的質(zhì)粒以轉(zhuǎn)化酵母細胞。3.構建DNA-BD/靶蛋白質(zhì)粒pLexA-X，作為釣餌（bait）。4.將上述釣餌質(zhì)粒pLexA-X轉(zhuǎn)化EGY48（p8op-LacZ）細胞株，用SD/-His/-Ura篩選;并用固體誘導培養(yǎng)基SD/Gal/Raf/-His/-Ura檢測此DNA-BD/靶蛋白是否具有直接激活報告基因的活性，以及對酵母細胞是否具有殺傷毒性。轉(zhuǎn)化質(zhì)粒選擇培養(yǎng)基克隆生長情況說明（含有Gal/Raf）pLexA-PosSD/-His，-Ura藍陽性對照pLexASD/-His，-Ura白陰性對照PlexA-XSD/-His，-Ura白沒有直接激活活性PlexA-XSD/-His，-Ura藍具有直接激活活性PlexA-XSD/-His，-Ura菌落不能生長酵母細胞毒性4-1.如果pLexA-X-半乳糖苷酶的信號作用。b能夠自動激活報告基因，則設法去除其激活活性部位、或者將LacZ報告基因整合入基因組，減少4-2.如果pLexA-X雖然不會自動激活報告基因，但對酵母宿主細胞有毒性，則需要與純化的文庫DNA同時轉(zhuǎn)化酵母。5.如果pLexA-X既不會自動激活報告基因，也不具有毒性，則可以與純化的文庫DNA同時、或順序轉(zhuǎn)化酵母細胞，并檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化質(zhì)粒SD固體培養(yǎng)基LacZ表型對照1pLexA-PosGal/Raf/-His/-Ura藍對照2pLexA-53Gal/Raf/-His/-Trp/-Ura/-Leu藍+pB42AD-T實驗pLexA-XGal/Raf/-His/-Trp/-Ura/-Leu待測+pB42AD-文庫5-1.用SD/-His/-Trp/-Ura培養(yǎng)基選擇陽性共轉(zhuǎn)化子，并擴增，使宿主細胞中的質(zhì)粒在誘導前達到Zda拷貝數(shù)。-半乳糖苷酶無表達。b5-2.上述重組子轉(zhuǎn)至含X-gal的固體誘導培養(yǎng)基SD/Gal/Raf/-His/-Trp/-Ura/-Leu，觀察LacZ及Leu報告基因的表達情形，藍色克隆即為陽性。白色克隆為假陽性，說明Leu雖有表達，但5-3.同時用LacZ、Leu兩個報告基因的目的，是為了盡可能消除實驗的假陽性誤差，譬如：AD融合蛋白不與目標蛋白結合，而直接與啟動子序列結合域結合等情況。由于2個報告基因的啟動子不同，出現(xiàn)上述假陽性的幾率就大大減少了。5-4.將藍色陽性克隆進行1次以上的劃種，盡可能分離克隆中的多種文庫質(zhì)粒。6.陽性克隆的篩選6-1.隨機選取50個陽性克隆，擴增、抽提酵母質(zhì)粒，電轉(zhuǎn)化E.coliKC8宿主菌，抽提大腸桿菌中的質(zhì)粒，酶切鑒定是否具有插入片段及排除相同的文庫質(zhì)粒。6-2.如果重復的插入序列較多，可另取50個陽性克隆來分析。Z后得到數(shù)種片段大小不同的插入序列，再轉(zhuǎn)化新的宿主細胞，檢測是否仍為陽性克隆。7.用質(zhì)粒自然分選法（NaturalSegregation）篩除只含有AD-文庫雜合子的克隆7-1.將初步得到的陽性克隆接種SD/-Trp/-Ura液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)1-2天，含有HIS3編碼序列的BD-靶質(zhì)粒在含有外源His培養(yǎng)基中，將以10%-20%左右的頻率隨機丟失。C孵育2-3天?！?-2.將上述克隆，轉(zhuǎn)鋪固體培養(yǎng)基SD/-Trp/-Ura，307-3.再挑取生長的單克隆，轉(zhuǎn)入SD/-Trp/-Ura和SD/-His/-Trp/-Ura培養(yǎng)基中，篩選His表型缺陷的克隆，即得到只含有AD-文庫雜合子的重組子。7-4.將His表型缺陷的克隆轉(zhuǎn)化固體誘導培養(yǎng)基SD/Gal/Raf/-Trp/-Ura，以驗證AD-文庫能否直接激活報告基因的表達，棄去陽性克隆，保留陰性克隆。8.酵母雜合試驗（YeastMating）確定真陽性克隆如下表所示，在酵母EGY48及其對應的YM4271宿主細胞中分別轉(zhuǎn)入相應的質(zhì)粒或文庫DNA，通過雜合實驗確篩選pLexA-靶DNA與pB42AD-文庫確實具有相互作用的真陽性克隆。質(zhì)粒1（inYM4271）質(zhì)粒2（inEGY48）LacZ表型Leu表型pLexApB42AD白不能生長pLexA-靶DNApB42AD白不能生長pLexApB42AD-文庫白不能生長pLexA-靶DNApB42AD-文庫藍真陽性pLexA-LampB42AD-文庫白不能生長9.陽性克隆的進一步篩選和確證9-1.擴增初步確定的陽性克隆，抽提酵母DNA。該DNA為混合成份，既含有酵母基因組DNA，也含有3種轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA。9-2.將上述DNA電轉(zhuǎn)化E.coliKC8宿主菌。由于在大腸桿菌中，具有不同復制起始調(diào)控序列的質(zhì)粒不相容;同時利用營養(yǎng)缺陷型篩選。因此，在M9/SD/-Trp培養(yǎng)基上，只有含有AD-文庫質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化菌才能生長，將其擴增、并抽提質(zhì)粒DNA，酶切鑒定。9-3.用pLexA-靶DNA與pB42AD-庫DNA一一對應、共轉(zhuǎn)化只含有報告基因的酵母菌EGY48中，先到SD/-His/-Trp/-Ura板擴增，并與后面的誘導板形成對照，說明報告基因的表達與誘導AD融合蛋白的表達有關，再確證LacZ、Leu報告基因的表達。9-4.擴增與靶DNA相互作用的文庫DNA，進行序列分析及進一步的結構、功能研究。10.對雙雜交系統(tǒng)陽性結果的進一步研究10-1.用不同的雙雜交系統(tǒng)驗證10-1-1.將載體pLexA與pB42AD互換后進行雙雜交實驗。10-1-2.選擇不同的雙雜交系統(tǒng)，如：以GAL4轉(zhuǎn)錄激活子為基礎的雙雜交系統(tǒng)。10-1-3.將文庫質(zhì)粒移碼突變后，再與靶質(zhì)粒作用，報告基因是否仍能被激活。-半乳糖苷酶水平，比較作用強度變化。b10-1-4.去除或突變特定結合位點，定量檢測10-2.用試劑盒提供的引物測定插入片段的DNA序列，證明其編碼區(qū)域。10-3.用其它的檢測方法，如：親和色譜法或免疫共沉淀法來證明雙雜交系統(tǒng)篩選的蛋白之間的具有相互作用。10-4.進一步研究靶蛋白與篩選蛋白之間的功能關系構建于AD載體的cDNA文庫的擴增1.自-80℃冰箱取出含有cDNA文庫的甘油菌，置于冰浴中緩慢化凍。2.用新鮮的LB培養(yǎng)液在1.5ml離心管中將上述甘油菌1:106和1:108稀釋。lml加入90m3.取稀釋菌液各1090mm）;37℃倒置培養(yǎng)過夜或30℃培養(yǎng)24-36hr，計數(shù)平板上單克隆菌落數(shù)。fLB培養(yǎng)液在1.5ml離心管中振蕩混勻，涂布LB/Amp平板（4.確定待擴增的cDNA文庫滴度（cfu/ml）=克隆數(shù)×108（1:106稀釋）或克隆數(shù)×1010（1:108稀釋）。5.按照>150mm），共100塊;37℃倒置培養(yǎng)過夜。f2-4×104cfu/平板的濃度，涂布LB/Amp平板（6.在超凈工作臺上，在所有生長菌落的平板上加適量LB培養(yǎng)液，將菌落刮下，轉(zhuǎn)入2000mlLB/Amp培養(yǎng)液中，37℃振蕩培養(yǎng)2-4hr。7.留取適量培養(yǎng)菌液以50%無菌甘油稀釋至25%終濃度，分裝，保存于-80℃。8.其余培養(yǎng)菌液離心8000xg×10min，4℃收集細菌;用質(zhì)粒DNA純化試劑盒大量抽提質(zhì)粒DNA。LB液體培養(yǎng)基，121℃，15lb/in2滅菌15minA.bacto-Tryptone10.0gB.bacto-YeastExtract5.0gC.NaCl10.0gD.ddH2O→1000ml*LB固體培養(yǎng)平板為含有1.5%瓊脂（Agar）LB培養(yǎng)基。**LB/Amp培養(yǎng)基為含有Ampg/ml的LB培養(yǎng)基。m50-100構建于AD載體的cDNA文庫的純化1.質(zhì)粒DNA提取緩沖液名稱緩沖液配方g/mlRNasemP1懸浮緩沖液50mMTris-HCl（pH8.0）;10mMEDTA;100AP2裂解緩沖液200mMNaOH;1%SDSP3中和緩沖液3.0MKac（pH5.5）QBT平衡緩沖液750mMNaCl;50mMMOPS（pH7.0）;15%異丙醇;0.15%TritonX-100QC洗滌緩沖液1.0MNaCl;50mMMOPS（pH7.0）;15%異丙醇QF洗脫緩沖液1.25MNaCl;50mMTris-HCl（pH8.5）;15%異丙醇2.培養(yǎng)菌液離心6000xg×10min，4℃，每500ml培養(yǎng)物（下同）的沉淀重懸于50mlP1緩沖液。3.加入50mlP2緩沖液，倒置4-6次混勻，室溫孵育5min。4.加入4℃預冷的50mlP3緩沖液，快速倒置4-6次混勻，冰浴30min（其間再倒置混勻4-6次）。5.將上述混合液再倒置混勻，離心12000xg×30min，4℃，保留上清。6.上清再離心12000xg×15min，4℃，留上清。7.將上清液上樣于經(jīng)35mlQBT緩沖液平衡的QIAGEN-tip層析柱。8.以100mlQC緩沖液洗滌層析柱2次。9.以35mlQF緩沖液洗脫吸附于層析柱上的DNA。10.以0.7倍體積異丙醇沉淀DNA，離心12500xg×30min，4℃，小心去除上清。11.以7ml70%乙醇洗滌沉淀DNA，離心12500xg×10min，4℃，小心去除上清。12.將沉淀的質(zhì)粒DNA溶于5mlTE（pH8.0）緩沖液，轉(zhuǎn)移至新的無菌離心管中，用2.5倍體積無水乙醇;1/10體積3.0MNaAc（pH5.2），于-20℃靜置過夜。13.離心12500xg×20min，4℃，去除上清，沉淀用70%乙醇洗滌，超凈臺風干。l），保存于-20℃。mg/管（用于1次轉(zhuǎn)化反應，約40m14.干燥的DNA溶于適量體積TE，定量，分裝100-200構建于DNA-BD載體的目的DNA轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細胞1.將酵母菌EGY48（p8op-lacZ）接種于5.0mlSD/-Ura液體培養(yǎng)基中，緩振打散菌落，然后轉(zhuǎn)入95.0mlSD/-Ura液體培養(yǎng)基中，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)16-18hr，至OD600>1.0。SD/-Ura液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×His5.0mlE.20×Leu5.0mlF.20×Trp5.0mlG.ddH2O→100.0ml2.將上述新鮮培養(yǎng)菌液接種于300mlYPD，至OD600=0.2-0.3（約50ml），30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.4-0.5（約3hr）。YPD液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.Polypepton6.0gB.bacto-YeastExtract3.0gC.葡萄糖6.0gD.ddH2O→300ml3.室溫離心5000xg×5min，棄上清;加入15-25mlddH2O重懸洗滌沉淀酵母細胞，離心棄上清，沉淀用1×TE/LiAc重懸后，即為酵母感受態(tài)細胞。4.準備下列試劑2×轉(zhuǎn)化反應10×TE10×LiAc50%PEGddH2Olml/120ml15mA.1×TE/LiAc0.15ml15l/ml960ml120mB.PEG/LiAc1.20ml120lml//900mC.1×TE1.00ml1005.分裝待轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA，振蕩混勻。lmg）3-5mA.pLexA-X（0.1B.10mg/mllmSpermDNA*（0.1mg）10*新配制時水浴煮沸20min后，插入冰浴，保存于-20℃。l用1×TE/LiAc重懸的酵母感受態(tài)細胞，振蕩混勻。m6.每管加入100lm7.各加入600PEG/LiAc，振蕩混勻，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)30min。lm8.各加入70DMSO緩和倒置混勻。42℃熱休克15min，迅速插入冰浴。9.室溫離心13000xg×10sec，盡量棄上清;以0.3ml1×TE重懸沉淀細胞，涂布SD/-Ura，-His固體培養(yǎng)板，30℃倒置培養(yǎng)3-5天。SD/-Ura，-His固體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15min稍冷卻后鋪板A.DifcoNitrogen1.34gB.葡萄糖4.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）20.0mlD.20×Leu10.0mlE.20×Trp10.0mlF.Agar4.00gG.ddH2O90-100mm）f→200.0ml鋪8-10塊平板（附表1.不同規(guī)模轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細胞SmallScale*LargeScaleLibraryScale轉(zhuǎn)化反應2011（1）SD液體培養(yǎng)基擴增酵母菌100ml100ml300ml（2）YPD液體培養(yǎng)基擴增酵母菌300mla300mla1000mla（3）TE或ddH2O洗滌酵母細胞15mlc25-50mlb500mla（4）準備A.1×TE/LiAc緩沖液1.5mld1.0mld8.0mlcB.PEG/LiAc緩沖液12.0mlc6.0mlc100.0mlbC.1×TE緩沖液6.0mlc10.0mlc10.0mlc（5）分裝A.DNA-BDvectorgd×20/0.2-1.0mgcm0.1gd0.1-0.5mgmg×2010-50mB.ADvector0.1C.l2.0mlml×20200mSpermDNA（10mg/ml）101×TE/LiAc重懸感受態(tài)細胞1.5mlc1.0mlc8.0mlbl×201.0ml8.0mlm酵母感受態(tài)細胞100（7）PEG/LiAc緩沖液0.6ml×206.0ml60.0mll7.0mlml×20700mDMSO70（9）室溫離心后棄上清13000xg×10sec2000xg×5min2000xg×5min（10）1×TE重懸感受態(tài)細胞0.3ml×206.0ml10.0ml150mm×50f150mm×30f90mm×20f鋪固體選擇培養(yǎng)基平板注:*即為“構建于DNA-BD載體的目的DNA轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細胞”**在不同容積的無菌離心管中進行，a:300或500ml;b:50ml;c:15ml;d:1.5ml文庫cDNA轉(zhuǎn)化含有DNA-BD載體的酵母感受態(tài)細胞1.以生長于SD/-Ura，-His固體培養(yǎng)板上的含有構建于DNA-BD載體的目的DNA及報告基因（p8op-lacZ）的酵母菌EGY48作為宿主菌，制備酵母感受態(tài)細胞。2.將酵母宿主菌接種于5.0mlSD/-Ura，-His液體培養(yǎng)基中，緩振打散菌落，然后轉(zhuǎn)入95.0mlSD/-Ura，-His液體培養(yǎng)基中，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)16-18hr，至OD600>1.0。SD/-Ura，-His液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×Leu5.0mlE.20×Trp5.0mlF.ddH2O→100.0ml3.將上述新鮮培養(yǎng)菌液接種于300mlYPD，至OD600=0.2-0.3（約50ml），30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.4-0.5（約3hr）。YPD液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.Polypepton6.0gB.bacto-YeastExtract3.0gC.葡萄糖6.0gD.ddH2O→300ml4.室溫離心5000xg×5min，棄上清;加入15-25mlddH2O重懸洗滌沉淀酵母細胞，離心棄上清，沉淀用1×TE/LiAc重懸后，即為酵母感受態(tài)細胞。5.準備下列試劑1×轉(zhuǎn)化反應10×TE10×LiAc50%PEGddH2Olml/800ml100mA.1×TE/LiAc1.0ml100l4.8ml/ml600mB.PEG/LiAc6.0ml600C.1×TE10.0ml1.0ml//9.0ml6.取1.0ml用1×TE/LiAc重懸的酵母感受態(tài)細胞，加入下列成份，振蕩混勻。lmg）40mA.pB42AD-Library（50-100B.10mg/mllmHerringDNA*（2.0mg）200*新配制時水浴煮沸20min后，插入冰浴，保存于-20℃。7.加入6.0mlPEG/LiAc，振蕩混勻，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)30min。lm8.加入700DMSO緩和倒置混勻。42℃熱休克15min，迅速插入冰浴。9.室溫離心2000xg×5min，盡量棄上清。10.以6.0ml100mm，每稀釋度各×2），30℃倒置培養(yǎng)3-5天，確定轉(zhuǎn)化效率在2×106cfu以上有效。fl稀釋不同倍數(shù)，涂布SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)板（m1×TE重懸沉淀細胞，取10150mm×30），30℃倒置培養(yǎng)3-5天。fl涂布SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)板（m11.按每板200SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15min稍冷卻后鋪板A.DifcoNitrogen13.40gB.葡萄糖40.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）200.0mlD.20×Leu100.0mlE.Agar40.00gF.ddH2O150mm）f→2000.0ml鋪30塊平板（12.在超凈工作臺上，在所有生長菌落的平板上各加5mlTE（pH7.0）緩沖液，將菌落刮下。13.離心棄上清，加入10-20mlTE緩沖液重懸沉淀菌，加入等體積的無菌65%甘油-MgSO4緩沖液，混勻，分裝1.0ml/管，保存于4℃1周或-80℃1年以上。65%甘油-MgSO4緩沖液:65%甘油;100mMMgSO4;25mMTris-HCl（pH8.0）A.甘油65.00mlB.MgSO47H2O2.465gC.2.0MTris-HCl（pH8.0）1.25mlD.ddH2O→100.00ml酵母雙雜合系統(tǒng)陽性克隆的篩選1.經(jīng)過選擇培養(yǎng)基篩選的含有DNA-BD載體、文庫DNA及報告基因的酵母感受態(tài)細胞，用無菌TE稀釋至1:104、1:106和1:108等不同濃度。90mm），30℃倒置培養(yǎng)3-5天，計數(shù)平板上單克隆菌落數(shù)。fl，涂布SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)板（m2.取上述稀釋菌液各1003.確定待進一步鑒定的酵母菌滴度（cfu/ml）=克隆數(shù)×105（1:104稀釋）、克隆數(shù)×107（1:106稀釋）或克隆數(shù)×109（1:108稀釋）。4.按照以前實驗確定的文庫轉(zhuǎn)化效率的5-10倍的總量、0.5-2×106cfu/平板的菌量，涂布SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固體誘導培養(yǎng)板，30℃倒置培養(yǎng)3-5天。5.挑取顯藍色的菌落，再接種于SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)基以及SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固體誘導培養(yǎng)基，以進一步確證。SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固體誘導培養(yǎng)基A.SD/Gal/Raf3.79gB.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlC.Agar2.00gD.ddH2O→85.0ml滅菌（115℃，10lb/in2）15min，冷卻至50℃，加入下列成份后鋪板E.10×BU10.0mlF.20mg/mlX-gal0.4ml90-100mm）f鋪5-6塊平板（10×BU緩沖液，121℃，15lb/in2滅菌15minA.Na2HPO412H2O9.30gB.NaH2PO42H2O3.90gC.ddH2O→100.0ml20mg/mlX-GalA.X-Gal40mgB.DMF2ml酵母雙雜合系統(tǒng)陽性克隆的鑒定-酵母質(zhì)粒DNA的提取1.挑取經(jīng)過酵母選擇/誘導培養(yǎng)基初步鑒定的酵母單菌落，接種于5.0-10.0mlSD/-Trp液體培養(yǎng)基，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)20hr。SD/-Trp液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×His5.0mlE.20×Leu5.0mlF.20×Ura5.0mlG.ddH2O→100.0ml2.室溫離心5000xg×1min，棄上清，收菌。l酵母裂解液，振蕩重懸沉淀酵母菌。m3.加入200酵母裂解液:2%TritonX-100;1%SDS;100mMNaCl;10mMTris-HCl（pH8.0）;1mMEDTAA.10%TritonX-10020.0mlB.10%SDS10.0mlC.NaCl0.58gD.Tris0.12gE.EDTANa22H2O0.04gF.1.0MHCl調(diào)pH8.0G.ddH2O→100.0ml4.加入下列試劑，充分振蕩5min;液氮凍存10min，室溫復融;再充分振蕩5min。A.經(jīng)酸處理的玻璃珠（Sigma）0.20gB.苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）0.2ml5.室溫離心12000xg×10min，將上清轉(zhuǎn)移至新的1.5ml離心管中，加入下列試劑，于-70℃凍存30-60min。A.3MNaAc（1/10lmV）20lmB.無水乙醇（2.5V）5006.離心12500xg×10min，4℃，棄上清;70%乙醇洗滌沉淀，于37℃烘箱或超凈臺干燥DNA;將干燥的沉淀DNA重溶于l無菌ddH2O中，保存于-20℃。m20-30酵母雙雜合系統(tǒng)陽性克隆的鑒定-酵母質(zhì)粒DNA電轉(zhuǎn)化大腸桿菌1.在冰浴條件下，取待轉(zhuǎn)化DNAl感受態(tài)細胞中，混勻。mg），加入100ml（5pg-0.5m1.0WF，200m2.將上述混合液加入間距0.1cm的樣品杯中，電轉(zhuǎn)化（1.8kV，25。3.迅速加入1ml新鮮的LB培養(yǎng)液，混勻，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管中，37℃恒溫，150rpm振蕩孵育30-60min。4.將上述轉(zhuǎn)化反應液涂布M9/DO（-Trp）固體培養(yǎng)板，37℃倒置培養(yǎng)至單菌落出現(xiàn)（16-22hr）。5.按常規(guī)方法擴增上述陽性轉(zhuǎn)化菌，堿裂解法少量抽提質(zhì)粒DNA，酶切篩選AD載體上含有插入片段的陽性克隆，保存其于25%甘油，待進一步驗證。M9/DO-Trp固體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.葡萄糖1.2gB.Agar6.0gC.5×M9緩沖液60mlD.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）30mlE.20×His15mlF.20×Leu15mlG.20×Ura15mlH.ddH2O165ml冷卻至50℃左右，加入下列成份，混勻鋪板I.1.0MThiamine-HCl（Vit.B1）0.3mlJ.100mg/mlAmp0.3ml90-100mm）f鋪10-15塊平板（大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備（電轉(zhuǎn)化）1.挑取LB固體培養(yǎng)基上生長的E.coliKC8單菌落，接種于5mlLB液體培養(yǎng)基中，37℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)過夜（約12-14hr）。2.將2.5ml新鮮菌液接種于500mlSOB培養(yǎng)液中，37℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.5-0.6（約2.5-3hr）。SOB液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.bacto-Tryptone10.00gB.bacto-YeastExtract2.50gC.NaCl0.25gD.KCl0.09gE.MgCl26H2O1.02gF.ddH2O→500.0ml3.將培養(yǎng)菌液收集于離心管中，冰水浴15-20min。4.離心6000xg×10min，4℃，棄盡上清;以5ml預冷的無菌ddH2O重懸沉淀菌;再加入500ml預冷的無菌ddH2O洗滌細菌。5.重復上述步驟1次，以充分去除培養(yǎng)基中殘余的鹽離子成份。6.用40-50ml預冷的無菌10%甘油重懸沉淀細菌，轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中;離心6000xg×10min，4℃，棄盡上清;重復此步驟1次。7.以等體積（約1.5-2.0ml）預冷的無菌10%甘油重懸上述沉淀的感受態(tài)細胞，分裝0.5ml/管（5-6次轉(zhuǎn)化反應），保存于-80℃?zhèn)溆谩＝湍鸽p雜合系統(tǒng)陽性克隆的確證1.以含有報告基因（p8op-lacZ）的酵母菌EGY48作為轉(zhuǎn)化宿主菌。2.將酵母宿主菌接種于5.0mlSD/-Ura液體培養(yǎng)基中，緩振打散菌落，然后轉(zhuǎn)入95.0mlSD/-Ura液體培養(yǎng)基中，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)16-18hr，至OD600>1.0。SD/-Ura液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×His5.0mlE.20×Leu5.0mlF.20×Trp5.0mlG.ddH2O→100.0ml3.將上述新鮮培養(yǎng)菌液接種于300mlYPD，至OD600=0.2-0.3（約50ml），30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.4-0.5（約3hr）。YPD液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.Polypepton6.0gB.bacto-YeastExtract3.0gC.葡萄糖6.0gD.ddH2O→300ml4.室溫離心5000xg×5min，棄上清;加入15-25mlddH2O重懸洗滌沉淀酵母細胞，離心棄上清，沉淀用1×TE/LiAc重懸后，即為酵母感受態(tài)細胞。5.準備下列試劑20×轉(zhuǎn)化反應10×TE10×LiAc50%PEGddH2Ol/1.2mlml150mA.1×TE/LiAc1.5ml150B.PEG/LiAc12.0ml1.2ml1.2ml9.6ml/C.1×TE10.0ml1.0ml//9.0ml6.分裝待轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA。A.pLexAlmg）3-5morpLexA-X（0.1lmg）3-5mB.pB42AD-Y（0.1C.10mg/mlSpermlmDNA*（0.1mg）10*新配制時水浴煮沸20min后，插入冰浴，保存于-20℃。l用1×TE/LiAc重懸的酵母感受態(tài)細胞，振蕩混勻。m7.每管加入100lm8.各加入600PEG/LiAc，振蕩混勻，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)30min。lm9.各加入70DMSO緩和倒置混勻。42℃熱休克15min，迅速插入冰浴。10.室溫離心13000xg×10sec，盡量棄上清;以0.3ml1×TE重懸沉淀細胞，涂布SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)板，30℃倒置培養(yǎng)3-5天。SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15min稍冷卻后鋪板A.DifcoNitrogen3.35gB.葡萄糖10.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）50.0mlD.20×Leu25.0mlE.Agar10.00gF.ddH2O→500.0ml90-100mm）f鋪20-25塊平板（11.挑取上述固體培養(yǎng)基上生長的含有目的DNA（X）的pLexA-X（+）或空載pLexA（-）單菌落，分別接種SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固體誘導培養(yǎng)板，30℃倒置培養(yǎng)3-5天。SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固體誘導培養(yǎng)基A.SD/Gal/Raf3.79gB.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlC.Agar2.00gD.ddH2O→85.0ml滅菌（115℃，10lb/in2）15min，冷卻至50℃，加入下列成份后鋪板E.10×BU10.0mlF.20mg/mlX-gal0.4ml90-100mm）f鋪5-6塊平板（12.選擇含有pLexA-X顯藍色，而相應的不含有插入DNA的空載pLexA顯白色的克隆，擴增其在E.coliKC8中的甘油菌，按常規(guī)抽提質(zhì)粒DNA，進行序列分析。10×DO（-His，-Trp，-Leu，-Ura）為不含His，Trp，Leu，Ura等成份的10×Dropout溶液。每1000ml溶液中含有下列成份，用ddH2O配制后保存于4℃。（1）L-IsoleucineL-異亮氨酸300mg（2）L-ValineL-纈氨酸1500mg（3）Adenine腺嘌呤200mg（4）L-ArginineHClL-精氨酸200mg（5）L-LysineHClL-賴氨酸鹽酸鹽300mgL-MethionineL-甲硫氨酸200mg（7）L-PhenylalanineL-苯丙氨酸500mgL-ThreonineL-蘇氨酸2000mg（9）L-TyrosineL-酪氨酸300mg20×氨基酸儲存液每100ml溶液中分別含有下列成份，配制后保存于4℃。20×HisL-HistidineL-組氨酸40mg20×TrpL-TryptophanL-色氨酸40mg20×LeuL-LeucineL-白氨酸200mg20×UraUracil尿嘧啶40mg酵母轉(zhuǎn)化緩沖液:緩沖液體積緩沖液配制10×TE100mlTris1.21g;EDTANa22H2O0.37g;ddH2O80ml;鹽酸調(diào)pH7.5;ddH2O定容10×LiAc100mlLiAc2H2O10.20g;ddH2O50ml，冰醋酸調(diào)pH7.5;ddH2O定容50%PEG100mlPEG335050.0g;ddH2O定容其它緩沖液:緩沖液體積緩沖液配制TE1000mlTris1.21g;EDTANa22H2O0.37g;ddH2O800ml;鹽酸調(diào)pH;ddH2O定容STE1000mlNaCl5.84g;Tris1.21g;EDTANa22H2O0.37g;ddH2O800ml;鹽酸調(diào)pH8.0;ddH2O定容[詳細]

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  2008-08-06 00:00

  應用文章

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• 核糖核酸鈉鹽（酵母）

  核糖核酸鈉鹽（酵母）[詳細]

  2014-09-30 00:00

  應用文章

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• 轉(zhuǎn)移核糖核酸（酵母）

  轉(zhuǎn)移核糖核酸（酵母）[詳細]

  2024-09-27 23:47

  期刊論文

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• 馬丁代爾耐磨試驗機的實驗操作方法和結果評測

  馬丁代爾耐磨試驗機的實驗操作方法和結果評測[詳細]

  2024-09-16 12:34

  課件

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• 人肝脂酶（HL）酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒實驗操作方法

  人肝脂酶（HL）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒僅供研究使用，用于測定人血清，組織及相關液體樣本中肝脂酶（HL）的含量。實驗原理：應用雙抗體夾心法測定標本中人肝脂酶（HL）水平。用純化的人肝脂酶（HL）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入肝脂酶（HL），再與HRP標記的肝脂酶（HL）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肝脂酶（HL）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人肝脂酶（HL）的濃度。保存條件及有效期：1.試劑盒保存：2-8℃2.有效期：6個月DrugNamesGenericName：Humanhepaticlipase（HL）ELISAKit.PurposeThiskitallowsforthedeterminationofHLconcentrationsinHumanserum,tissueandotherbiologicalfluids.PrincipleoftheassayThekitassayHumanHLlevelinthesample，usePurifiedHumanHLantibodytocoatmicrotiterplatewells,makesolid-phaseantibody,thenaddHLtowells,CombinedHLantibodywhichWithHRPlabeled,becomeantibody-antigen-enzyme-antibodycomplex,afterwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,TMBsubstratebecomesbluecolorAtHRPenzyme-catalyzed,reactionisterminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolorchangeismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450nm.TheconcentrationofHLinthesamplesisthendeterminedbycomparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.Storageandvalidity1．Storage：2-8℃.2．validity：sixmonths.備注：僅供科學研究實驗使用。上海華壹生物科技有限公司ShanghaiHuaYiBioTechnologyCo.,Ltd網(wǎng)址：http://www.huayi-bio.com電話：021-24209195，021-24209192，13661674336[詳細]

  2024-09-28 12:04

  產(chǎn)品樣冊

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• 甲胎蛋白（AFP）酶免（ELISA）試劑盒實驗操作方法

  大鼠（RAT）甲胎蛋白（AFP）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒僅供研究使用，用于測定大鼠血清，組織及相關液體樣本中甲胎蛋白（AFP）的含量。實驗原理：應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠甲胎蛋白（AFP）水平。用純化的大鼠甲胎蛋白（AFP）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入甲胎蛋白（AFP），再與HRP標記的甲胎蛋白（AFP）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲胎蛋白（AFP）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠甲胎蛋白（AFP）濃度。DrugNamesGenericName：RatAlpha-fetoprotein（AFP）ELISAKit.PurposeThiskitallowsforthedeterminationofAFPconcentrationsinRatserum,tissueandotherbiologicalfluids.PrincipleoftheassayThekitassayRatAFPlevelinthesample，usePurifiedRatAFPtocoatmicrotiterplatewells,makesolid-phaseantibody,thenaddAFPtowells,CombinedAFPantibodywhichWithHRPlabeled,becomeantibody-antigen-enzyme-antibodycomplex,afterwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,TMBsubstratebecomesbluecolorAtHRPenzyme-catalyzed,reactionisterminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolorchangeismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450nm.TheconcentrationofAFPinthesamplesisthendeterminedbycomparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.試劑盒保存：2-8℃有效期：6個月上海華壹生物科技有限公司ShanghaiHuaYiBioTechnologyCo.,Ltd網(wǎng)址：http://www.huayi-bio.com電話：021-24209195，021-24209192，13661674336相關試劑產(chǎn)品介紹：HQ0042無水檸檬酸/枸櫞酸/2-羥基丙羧酸/CitricacidACS，99.5%77-92-9常溫保存HQ0043α-酮戊二酸/2-酮戊二酸/2-氧代戊二酸/α-酮基戊二酸/2-氧代-1，5戊二酸/α-羰基戊二酸/2-氧代-1,5戊二酸/α-膠酮酸/α-KetoglutaricacidBR，99%328-50-72～8℃，避光HQ0044α-酮戊二酸鈉/2-酮戊二酸鈉/2-氧代戊二酸鈉/α-氧代戊二酸二鈉/2-氧代-1,5-戊二酸二鈉鹽/α-酮基戊二酸二鈉鹽/α-KetoglutaricaciddisodiumsaltBR，97%305-72-62～8℃HQ00466-羥基多巴胺/6-羥基多巴胺氫溴酸鹽/2,4,5-三羥基苯乙胺氫溴酸鹽/2,5-二羥基酪胺氫溴酸鹽/氫溴酸-6-羥基多巴胺/6-羥基多巴胺合溴化氫/6-OHDABR，95%636-00-0保存：-20℃HQ0047鄰苯二胺/1,2-二氨基苯/1,2-苯二胺/鄰二氨基苯/1,2-亞苯基二胺/2-苯二氨/2-二氨基苯/OPDCP，98.5%95-54-5常溫保存，避光HQ0047-1鄰苯二胺鹽酸/鹽酸鄰苯二胺/1,2-苯二胺鹽酸/OPD-HC1試劑級，98%615-28-1常溫保存，避光HQ0048碘代乙酰胺/碘乙酰胺/2-碘乙酰胺/IAM試劑級，98%144-48-92～8℃HQ0049腐胺/1,4-丁二胺雙鹽酸鹽/1,4-二氨基丁烷雙鹽酸鹽/1,4-丁二胺/腐肉胺/1,4-丁二胺/四亞甲基二胺/腐肉堿/Putrescinedihydrochloride試劑級，98%333-93-7常溫保存HQ0050甲酰胺/氨基甲醛/FormamideAR，99.5%CAS：75-12-7常溫保存HQ0051去離子甲酰胺/FormamideDeionized超純，99.5%CAS：75-12-7常溫保存HQ0052二甲基甲酰胺/N,N-二甲基甲酰胺/甲酰二甲胺/N-甲酰二甲胺/二甲替甲酰胺/DMF/DMFAAR，99.5%CAS：68-12-2常溫保存HPLC，99.8%光學純，99.8%ACS，99.8%農(nóng)殘級，99.9%HQ0053精胺/O,O'-二甲基硫代磷酰胺/精堿/精素/N,N′-雙（3-氨基丙基）-1,4-丁二胺/α,δ-雙（γ-氨丙氨基）丁烷/1,12-二氨基-4,9-二氮十二烷/Spermine生物技術級，97%71-44-32～8℃，避光HQ0055四鹽酸精胺/四氫氯精胺/N,N’-二（3-氨丙基）-1,4-丁二胺四鹽酸鹽/精胺四鹽酸鹽/二氨基丙基四亞甲基二胺/N,N'-二（3-胺丙基）-1,4-丁二胺四鹽酸鹽/Sperminetetrahydrochloride分子生物級，99%306-67-2常溫保存HQ0056亞精胺/精脒/N-（3-氨基丙基）-1,4-丁二胺/α-（γ-氨基丙氨）-δ-氨基丁烷/1,8-二氨基-4-氮辛烷/N-（3-氨基丙基）-1,4-丁二胺/精咪/精三胺/SpermidineBR，99%124-20-92～8℃HQ0056-1三鹽酸亞精胺/N-（3-氨丙基）-1,4-丁二胺三鹽酸鹽/亞精胺鹽酸鹽/Spermidinetrihydrochloride生物技術級，98%334-50-9保存：-20℃HQ0057碘化[1-環(huán)己基-3-（3-三甲氨丙基）碳二亞胺]/水溶性碳二亞胺/CDCBR，98%2～8℃，避光HQ0058N，N-二環(huán)己基碳二亞胺/N，N-二環(huán)己基碳酰亞胺/N,N’-甲基四基雙環(huán)己胺/雙環(huán)己基碳酰亞胺/DCC/DCCICP，95%538-75-0常溫保存HQ0060N-乙基順丁烯二酰亞胺/1-乙基-1H-吡咯-2,5-二酮/N-乙基失水蘋果酰亞胺/N-乙基馬來酰亞胺/NEMI/NEMBR，98%128-53-02～8℃，避光HQ0061N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亞胺/N-羥基-5-降冰片稀-2,3-二酰亞胺/N-羥基5-降冰片烯-2,3-二羥基亞胺/N-羥基-5-降冰片烯-2,3-酰亞胺/N-羥基-5-降冰片烯-2,3-二羧酸酰亞胺/HONBBR，98%21715-90-2常溫保存HQ0062N-溴代丁二酰亞胺/N-溴代琥珀酰亞胺/溴丁二酰亞胺/NBSAR，99%128-08-5常溫保存[詳細]

  2024-09-28 07:47

  產(chǎn)品樣冊

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