本文由 上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司 整理匯編

2016-06-03 00:00 1497閱讀次數(shù)

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• 環(huán)形細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)--使細(xì)胞侵襲的過程可視化

  環(huán)形細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)--使細(xì)胞侵襲的過程可視化[詳細(xì)]

  2016-06-03 00:00

  課件

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• 腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)原理 材料 步驟

  一原理Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結(jié)構(gòu)，這種膜結(jié)構(gòu)與天然基質(zhì)膜結(jié)構(gòu)極為相似。濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細(xì)胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運(yùn)動(dòng)才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜，這與體內(nèi)情況較為相似。鋪有Martrigel的濾膜放在以BDFalcon細(xì)胞小室上下室之間，鋪有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趨化劑，如一定濃度的LN、FN或小鼠3T3條件培養(yǎng)液或人睪丸上皮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液，上室加入重懸的瘤細(xì)胞，具有侵襲能力的細(xì)胞在趨化劑誘導(dǎo)下開始穿膜運(yùn)動(dòng)。細(xì)胞穿膜所用的時(shí)間與Martrigel的用量有關(guān)，選擇25ugMartrigell鋪膜，16小時(shí)后觀察結(jié)果較為合適。穿過濾膜的細(xì)胞多數(shù)粘附在濾膜下表面，可用棉簽將上表面的細(xì)胞拭去，然后用乙醇固定濾膜，PE染色，在光鏡下觀察統(tǒng)計(jì)穿過Martrigel的細(xì)胞數(shù)。另外用BDFalcon細(xì)胞小室也可進(jìn)行重建基質(zhì)膜侵襲分析，這一方法是在BDFalcon細(xì)胞小室吊籃式上腔的濾膜上鋪上30ugMartrigel，加入細(xì)胞72h后觀察結(jié)果。值得注意的是，細(xì)胞在BDFalcon細(xì)胞小室中培養(yǎng)72小時(shí)后，有相當(dāng)數(shù)量穿過濾膜的細(xì)胞不再粘附在濾膜下表面，而是脫落進(jìn)人下腔溶液中．因此統(tǒng)計(jì)穿過基質(zhì)膜的細(xì)胞數(shù)目時(shí)應(yīng)把這部分細(xì)胞考慮在內(nèi)。腫瘤細(xì)胞穿過重建基質(zhì)膜的能力與它的體內(nèi)侵襲轉(zhuǎn)移能力表現(xiàn)出較好的相關(guān)性，可以用重建基質(zhì)膜模型初篩抗侵襲藥物。在上述分析中，如果不在膜上鋪Martrigel而直接將8um孔徑濾膜安放在侵襲腔室上下腔室之間，細(xì)胞通過變形運(yùn)動(dòng)穿過濾膜，用這種模型對分析細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力和藥物對細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的影響。另外，在下室中加有LN或FN或在濾膜下表面鋪上LN或FN，可分析藥物對腫瘤細(xì)胞的趨化性或趨固性的影響。二材料1.Matrigel基質(zhì)膠（BDBIOCOAT#356234），5ml，分裝成0.5ml/只10個(gè)EP管中；用時(shí)加入0.5ml的DMEM；Matrivgel在冰上維持液態(tài)，室溫時(shí)可迅速凝結(jié)成膠。使用前應(yīng)從-20℃轉(zhuǎn)移至4℃待其自然溶化（如過夜放置），避免反復(fù)凍融。使用時(shí)需接觸Matrivgel的試管、移液吸頭等均應(yīng)預(yù)冷于4℃；注意無菌操作；2.8ul，24孔配套細(xì)胞小室（BDFaclon#353097）；3.結(jié)晶紫染料溶液：結(jié)晶紫用甲醇配成0.5%的母液，使用濃度為0.1％，用PBS按1：4稀釋后即為染色液；4.33%醋酸；1.溶液配制：（1）.溶DMEM500ml；NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）母液0.1ml（5mg）+ddH2Oupto5ml；過濾消毒，-20℃保存。NE-DMEM（-6M）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlDMEMUPTO100ml過濾消毒，4℃保存（2）.NE+CGRP-DMEM（-6M，100ng）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlCGRP-儲(chǔ)存液50μlDMEMUPTO100ml過濾消毒，4℃保存（3）.NE+IFN-DMEM（-6M，50ng）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlIFN-γ（25ng/μl）25μlDMEMUPTO100ml過濾消毒，4℃保存（4）.低血清DMEM培養(yǎng)基（上室）（5）.20%FBS-DMEM培養(yǎng)基（下室）2.準(zhǔn)備（1）.溶膠，4℃過夜（ThawMatrigelat4℃overnight.）（2）.室溫下基質(zhì)膠易成凝膠，所以，步驟2和3種使用試管和槍頭要在試驗(yàn)前-20C預(yù)冷。（Matrigeltendstoformgelveryquicklyatroomtemerature,therefore,pipetsandtipsusinginsteps2and3havetobechilledatpriortoexperiements.）3.包被基底膜（冰上操作）（1）.用無血清的冷細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM稀釋Matrigel膠（10mg/mlto5mg/ml））（DiluteMatrigel（10mg/mlto5mg/ml）inserumfree-coldcellculturemedia（RPMI1640,EMEM,DMEM,etc）.）（2）.取100ul稀釋膠加到24-well細(xì)胞小室的上室中（Put100ulofthedilutedmatrigelintoupperchamberof24-welltranswell）（3）.37℃孵育transwell至少4-5h（Incubatethetranswellat37Catleast4to5hforgel領(lǐng).）4.水化基底膜用無血清培養(yǎng)基輕洗凝膠（Gentlywashgelledmatrigelwithwarmedserumfree-culturemedia.）5.準(zhǔn)備細(xì)胞懸液和小室（1）.消化法從細(xì)胞培養(yǎng)瓶中獲取細(xì)胞；（HarvestcellsfromtissuecultureflasksbyTrypsin/EDTA；）（2）.用培養(yǎng)基洗3遍（Washthecells3timeswithculturemedia（RPMI1640,EMEM,DMEMetc）containing1%FBS.）（3）.重選細(xì)胞，5×105cells/ml，1%FBS（Resuspendthecellsinmediacontaining1%FBSatadensityof5×105cells/ml.）（4）.上室加200ul細(xì)胞懸液（Put200ulofthecellsuspensionontothematrigel.）（5）.下室中加入600ul細(xì)胞培養(yǎng)基，含有5ug/mlfibronectin作為黏連亞族（lowerchamberofthetranswellisfilledwith600ulofculturemediacontaining,asanadhesivesubtrate.）6.孵育，37℃，20to24h（Incubateat37Cfor20to24h.7.染色和計(jì)數(shù)（1）.棉簽擦去上室上面的非侵襲細(xì)胞（Scrapeoffnoninvadedcellsonthetopofthetranswellwithacottonswab）（2）.移去transwells，倒置，風(fēng)干（Removetranswellsfrom24-wellplatesandstainedwithDiff-Quicksolution.）（3）.24孔板中加入500l含0.1%結(jié)晶紫，將小室置于其中，使膜浸沒在培養(yǎng)基中，37℃30min后取出，PBS清洗。（4）.直徑上取4個(gè)視野，照相，計(jì)數(shù)。（5）.24孔板中加入500l33%醋酸，將小室置于其中，浸膜，振蕩10min，充分溶解。取出小室，24孔板于酶標(biāo)儀上570nm測OD值，間接反應(yīng)細(xì)胞數(shù)。小技巧：照相前一定要晾干，照相時(shí)將小室正置于載玻片上，在倒置顯微鏡下觀察、照相。經(jīng)濟(jì)、實(shí)用、方便。[詳細(xì)]

  2018-09-02 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• FH1158-人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞；MUM2B

  FH1158-人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞；MUM2B[詳細(xì)]

  2024-05-30 09:33

  應(yīng)用文章

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• 基質(zhì)金屬蛋白酶-2與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移

  基質(zhì)金屬蛋白酶-2與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移[詳細(xì)]

  2012-12-25 00:00

  安裝說明

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• 基質(zhì)金屬蛋白酶-2與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移

  基質(zhì)金屬蛋白酶-2與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移[詳細(xì)]

  2024-09-17 01:52

  產(chǎn)品樣冊

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• 細(xì)胞成團(tuán)和細(xì)胞出芽實(shí)驗(yàn)

  細(xì)胞成團(tuán)和細(xì)胞出芽實(shí)驗(yàn)[詳細(xì)]

  2016-05-12 00:00

  期刊論文

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• 豬侵襲性大腸桿菌（EIEC）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

  豬侵襲性大腸桿菌(EIEC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的：本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中侵襲性大腸桿菌(EIEC)表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬侵襲性大腸桿菌(EIEC)表達(dá)。用純化的豬侵襲性大腸桿菌(EIEC)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中侵襲性大腸桿菌(EIEC)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的侵襲性大腸桿菌(EIEC)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬侵襲性大腸桿菌(EIEC)的存在與否。豬侵襲性大腸桿菌(EIEC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。豬侵襲性大腸桿菌(EIEC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒計(jì)算和結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10臨界值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為侵襲性大腸桿菌(EIEC)陰性陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為侵襲性大腸桿菌(EIEC)陽性。注意事項(xiàng)1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物請避光保存。6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時(shí)，參考波長為630nm7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。豬侵襲性大腸桿菌(EIEC)酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月[詳細(xì)]

  2018-09-14 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)新方法（二）--實(shí)時(shí)觀察細(xì)胞動(dòng)態(tài)

  細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)新方法（二）--實(shí)時(shí)觀察細(xì)胞動(dòng)態(tài)[詳細(xì)]

  2016-04-26 00:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)新方法：可實(shí)時(shí)觀察細(xì)胞動(dòng)態(tài)

  細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)新方法：可實(shí)時(shí)觀察細(xì)胞動(dòng)態(tài)[詳細(xì)]

  2016-04-26 00:00

  報(bào)價(jià)單

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• 免疫沉淀的實(shí)驗(yàn)過程

  上海金穗生物公司是一家專業(yè)經(jīng)營生物試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、試劑耗材的公司，生物引擎在廣大用戶的幫助和支持下，經(jīng)過不懈的努力，已成為國內(nèi)生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的主要供應(yīng)商之一，主要經(jīng)營ELISA試劑盒、細(xì)胞、血清、抗體、金標(biāo)試劑盒、生物試劑、耗材、培養(yǎng)基、一抗、二抗等產(chǎn)品，產(chǎn)品暢銷國內(nèi)大部分地區(qū)，銷售額逐年穩(wěn)步提高。上海金穗生物公司擁有雄厚的實(shí)力、合理的價(jià)格和優(yōu)良的服務(wù)，能夠及時(shí)解決和滿足客戶的各方面的需求，公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)網(wǎng)絡(luò)遍及全國，在同行獲得一致好評。www.shjsbio.com[詳細(xì)]

  2018-10-08 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 細(xì)胞如何做好轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)及提高實(shí)驗(yàn)效率

  細(xì)胞如何做好轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)及提高實(shí)驗(yàn)效率①從健康細(xì)胞開始Ⅰ轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前，細(xì)胞解凍后傳代34次。這使得細(xì)胞從解凍過程中恢復(fù)過來，并恢復(fù)正常的生長速度。Ⅱ僅使用活性>90%的細(xì)胞使用臺(tái)盼藍(lán)染色可輕松測定細(xì)胞活性。Ⅲ定期傳代細(xì)胞，切勿讓細(xì)胞長到匯合狀態(tài)或過度生長。如果讓細(xì)胞長到匯合狀態(tài)，可能會(huì)改變細(xì)胞的生長速度以及形態(tài)。a.請?jiān)趨R合率達(dá)到90%之前對細(xì)胞進(jìn)行傳代。我們建議您使用胰酶替代物Cellstripper試劑(Corning25-056-CI)使細(xì)胞脫壁。Cellstripper試劑可于室溫下存儲(chǔ)在通風(fēng)櫥中?？赏ㄟ^添加過量的Cellstripper來跳過PBS洗滌的步驟，然后吸棄全部液體，僅留可覆蓋瓶子表面的液體。b.傳代條件取決于所用的細(xì)胞系。部分經(jīng)驗(yàn)法則：對于快速生長的細(xì)胞，倍增時(shí)間為16小時(shí)(如HEK-293)，按1：10的比例分瓶。對于生長緩慢的細(xì)胞，倍增時(shí)間為36小時(shí)(如原代細(xì)胞)，按1：5的比例分瓶。Ⅳ保留凍存的細(xì)胞系，并定期解凍新細(xì)胞。傳代次數(shù)高(>3040)時(shí)，細(xì)胞的生長速度和形態(tài)會(huì)改變。②進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，請先規(guī)劃您的實(shí)驗(yàn)。務(wù)必要熟悉實(shí)驗(yàn)方案、確定所需的材料量，并在開始實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)所需的一切物品條件均已齊備。Ⅰ開始前，設(shè)計(jì)好鋪板路線圖，標(biāo)注好每次處理或?qū)嶒?yàn)條件。Ⅱ計(jì)算所需脂質(zhì)體和DNA的儲(chǔ)備量，并確認(rèn)有足夠的下列材料：TransfectGRO減血清培養(yǎng)基(Corning40-300-CVR)，Lipofectamine2000或LipofectamineLTX試劑，以及DNA(0.51g/L)。③轉(zhuǎn)染時(shí)，請使用優(yōu)質(zhì)DNA。Ⅰ使用無內(nèi)毒素的試劑盒和實(shí)驗(yàn)方案制備DNA。Ⅱ通過測量OD260/280值來確定DNA純度，測得的OD值應(yīng)介于1.71.9]之間。數(shù)值過高或過低均說明有雜質(zhì)，不宜用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。Ⅲ在無DNA/RNA酶的水或TE中稀釋DNA。Ⅳ制備的工作濃度為0.51g/L。可用SpeedVac濃縮儀或透析過濾裝置(例如，MilliporeAmicon超濾管)來濃縮DNA。④轉(zhuǎn)染當(dāng)天，將細(xì)胞鋪板。Ⅰ如果在轉(zhuǎn)染前一天或更早時(shí)間鋪板，轉(zhuǎn)染效率可能下降。Ⅱ轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞密度保持在匯合率為7090%。Ⅲ轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞密度影響轉(zhuǎn)染效率。為了簡化轉(zhuǎn)染優(yōu)化過程或節(jié)省時(shí)間，我們建議細(xì)胞鋪成2種不同的密度，以確保較高的轉(zhuǎn)染效率。Ⅳ細(xì)胞的鋪板和轉(zhuǎn)染可同時(shí)進(jìn)行，或者通過反向轉(zhuǎn)染操作進(jìn)行。反向轉(zhuǎn)染操作中，使用的細(xì)胞是正常/正向轉(zhuǎn)染的2.5倍以上。Ⅴ轉(zhuǎn)染復(fù)合物可以加到含抗生素和血清的培養(yǎng)基中，且不會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。[詳細(xì)]

  2024-10-03 20:15

  產(chǎn)品樣冊

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• 細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)--EphA3+ MSCs細(xì)胞 對高濃度的IIIA4有負(fù)趨

  細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)--EphA3+ MSCs細(xì)胞 對高濃度的IIIA4有負(fù)趨[詳細(xì)]

  2016-05-24 00:00

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• 細(xì)胞瓊脂克隆斑形成實(shí)驗(yàn)方法

  細(xì)胞瓊脂克隆斑形成實(shí)驗(yàn)方法1.取MDA-435-OL-Sec23a-GFP和MDA-435-OLLV3NC-GFP對數(shù)生長期的細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液,使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后備用。2.使用梯度稀釋法適當(dāng)稀釋細(xì)胞懸液后,向6孔板的每個(gè)孔內(nèi)分別加入含50個(gè)細(xì)胞的2mL細(xì)胞懸液,細(xì)胞懸液使用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)液配制。每種細(xì)胞均設(shè)置3個(gè)6孔板復(fù)孔。3.12h后鏡下可觀察到6孔板內(nèi)細(xì)胞已經(jīng)全部貼壁,此時(shí)將皿中培養(yǎng)液換成瓊脂濃度為0.2%的含10%FBS的DMEM培養(yǎng)液,置于37°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。4.10d后鏡下可觀察到6孔板內(nèi)出現(xiàn)集落生長的細(xì)胞克隆斑。此時(shí)棄去含瓊脂的培養(yǎng)液,用PBS輕輕潤洗2次,然后6孔板內(nèi)每孔加入2mL冰甲醇固定30min,固定結(jié)束后使用PBS輕輕潤洗2次,然后使用結(jié)晶紫染色5min,再用PBS輕輕潤洗后室溫干燥。5.干燥完成后將6孔板移至顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)每個(gè)孔內(nèi)細(xì)胞克隆斑數(shù)量,超過50個(gè)細(xì)胞的克隆斑即可計(jì)數(shù)。根據(jù)細(xì)胞克隆斑形成率=(克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù))×1**%來計(jì)算細(xì)胞體外克隆率。[詳細(xì)]

  2024-10-03 20:15

  產(chǎn)品樣冊

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• 基因芯片實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞和組織制備規(guī)程

  基因芯片實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞和組織制備規(guī)程[詳細(xì)]

  2014-07-17 00:00

  期刊論文

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  2024-09-16 03:14

  其它

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  小鼠細(xì)胞間粘附分子1試劑盒實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）水平。用純化的小鼠細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1），再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）濃度。小鼠細(xì)胞間粘附分子1試劑盒組成120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液3ml×1瓶2酶標(biāo)試劑3ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（320ng/L）0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×4條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液3ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液3ml×1/瓶12密封袋1個(gè)小鼠細(xì)胞間粘附分子1試劑盒操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。160ng/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液80ng/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液40ng/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20ng/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10ng/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。[詳細(xì)]

  2018-10-03 10:00

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