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用 cAMP-Gs HiRange HTRF 法檢測(cè) GPCR 活性
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2021-07-08 15:56 792閱讀次數(shù)
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HTRF? 是由 Cisbio 開發(fā)的用于檢測(cè)生物分子相互作用的通用技術(shù)。它將熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET) 技術(shù)與熒光的時(shí)間分辨(TR) 測(cè)量相結(jié)合,可以消除短壽命的背景熒光。該測(cè)定使用供體和受體熒光團(tuán),它們用于標(biāo)記要研究其結(jié)合的蛋白質(zhì)或其他生物分子。 當(dāng)兩個(gè)生物分子相互結(jié)合時(shí),供體和受體就靠
在一起了。能量源 ( 例如閃光燈 ) 對(duì)供體的激發(fā)觸發(fā)能量轉(zhuǎn)移到受體,受體繼而在給定波長(zhǎng)發(fā)射特定熒光。
HTRF 使 用四種特定的熒光團(tuán),它們可以組合形成相容的供體 - 受體 TR-FRET 對(duì)。 供體是穴狀銪 (Eu3+) 和鋱穴狀化合物(Lumi4 ? -Tb),它們的長(zhǎng)壽命熒光使其可用于時(shí)間分辨熒光分析。已經(jīng)開發(fā)了兩種受體用于 HTRF 分析,XL665 和 d2。兩者的激發(fā)光譜都與 HTRF 供體的發(fā)射光譜重疊,在 665 nm處的發(fā)射峰落在供體不顯著發(fā)射的區(qū)域內(nèi)。Z初的 HTRF 受體 XL665 是一種從紅藻中純化的藻膽蛋白色素。 第二代受體d2 是改良的別藻藍(lán)蛋白,比 XL665 小 100 倍,旨在緩解基于XL665 的檢測(cè)可能出現(xiàn)的空間位阻問題。
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用 cAMP-Gs HiRange HTRF 法檢測(cè) GPCR 活性
- HTRF? 是由 Cisbio 開發(fā)的用于檢測(cè)生物分子相互作用的通用技術(shù)。它將熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET) 技術(shù)與熒光的時(shí)間分辨(TR) 測(cè)量相結(jié)合,可以消除短壽命的背景熒光。該測(cè)定使用供體和受體熒光團(tuán),它們用于標(biāo)記要研究其結(jié)合的蛋白質(zhì)或其他生物分子。 當(dāng)兩個(gè)生物分子相互結(jié)合時(shí),供體和受體就靠
在一起了。能量源 ( 例如閃光燈 ) 對(duì)供體的激發(fā)觸發(fā)能量轉(zhuǎn)移到受體,受體繼而在給定波長(zhǎng)發(fā)射特定熒光。
HTRF 使 用四種特定的熒光團(tuán),它們可以組合形成相容的供體 - 受體 TR-FRET 對(duì)。 供體是穴狀銪 (Eu3+) 和鋱穴狀化合物(Lumi4 ? -Tb),它們的長(zhǎng)壽命熒光使其可用于時(shí)間分辨熒光分析。已經(jīng)開發(fā)了兩種受體用于 HTRF 分析,XL665 和 d2。兩者的激發(fā)光譜都與 HTRF 供體的發(fā)射光譜重疊,在 665 nm處的發(fā)射峰落在供體不顯著發(fā)射的區(qū)域內(nèi)。Z初的 HTRF 受體 XL665 是一種從紅藻中純化的藻膽蛋白色素。 第二代受體d2 是改良的別藻藍(lán)蛋白,比 XL665 小 100 倍,旨在緩解基于XL665 的檢測(cè)可能出現(xiàn)的空間位阻問題。[詳細(xì)]
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2021-07-08 15:56
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用 cAMP-Gs HiRange HTRF 法檢測(cè) GPCR 活性
- 用 cAMP-Gs HiRange HTRF 法檢測(cè) GPCR 活性[詳細(xì)]
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2024-09-14 02:57
應(yīng)用文章
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用折光率快速檢測(cè)藥物的活性
- 用折光率快速檢測(cè)藥物的活性[詳細(xì)]
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2005-08-31 00:00
應(yīng)用文章
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細(xì)胞NADPH氧化酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途細(xì)胞NADPH氧化酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用化學(xué)發(fā)光分子光澤精受到NADPH氧化酶催化產(chǎn)生的超氧陰離子O2-的還原,然后在其還原過程中釋放能量,由此測(cè)定樣品中特異性氧化還原酶(oxidoreductase)的活性,即采用發(fā)光探測(cè)儀(Luminometer)測(cè)定其相對(duì)冷光單位(RLU)的變化,以此進(jìn)行測(cè)算酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)胞樣品(動(dòng)物或人體)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH氧化酶)的特異活性檢測(cè)。用于免疫、血液研究、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景NADPH氧化酶,通常稱為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(reducednicotinamideadeninedinucleotidephosphateoxidase;NADPHoxidase;EC1.6.3.1)或還原型輔酶II氧化酶,是機(jī)體防御機(jī)制中的重要元素。NADPH氧化酶由6個(gè)亞體構(gòu)成:RhoGTP酶(Rhoguanosinetriphosphatase)和5個(gè)phox(吞噬細(xì)胞氧化酶;phagocyticoxidase)。其中主要包含細(xì)胞膜嵌合蛋白質(zhì)分子(gp91phox、p22phox、flavocytochromeb558等),以及位在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的蛋白質(zhì)分子(p47phox、p67phox、p40phox、Rac1、Rac2等)。其Z特征性的酶活性是超氧化物歧化酶敏感的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶。細(xì)胞膜上的NADPH氧化酶被激活,將還原型輔酶Ⅱ(NADPH)轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸洼o酶Ⅱ(NADP),氧分子則獲得電子形成超氧陰離子O2-,由O2-又可生成H2O2和OH-。其超氧陰離子產(chǎn)物具有殺死微生物的功能。NADPH氧化酶異常將導(dǎo)致慢性肉芽腫?。–hronicGranulomatousDisease;CGD)。基于底物NADPH,受到NADPH氧化酶的催化作用,產(chǎn)生超氧陰離子O2-,進(jìn)而超氧陰離子將化學(xué)發(fā)光分子光澤精(lucigenin)還原,并釋放能量,通過發(fā)光探測(cè)儀(Luminometer;470nm波長(zhǎng))檢測(cè),來測(cè)定NADPH氧化酶的活性。其反應(yīng)方式為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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植物堿性焦磷酸酶活性比色法法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途植物堿性焦磷酸酶(AlkalinePyrophosphatase)活性比色法法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用無機(jī)焦磷酸,在堿性焦磷酸酶去磷酸化后,釋放出游離磷酸根,由硫酸亞鐵氨還原產(chǎn)生鉬藍(lán)顯色反應(yīng)后峰值的變化,采用比色法測(cè)定其峰值的變化,以此進(jìn)行測(cè)算單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種植物組織,包括種子、球莖(bulb)、塊莖(tuber)、根(root)、種葉(coleoptile)和葉片裂解懸液樣品或純化以及粗提的酶蛋白的堿性焦磷酸酶活性及其YZ劑的檢測(cè)。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景焦磷酸酶(Pyrophosphatase;PPase;;EC3.6.1.1),又稱為無機(jī)焦磷酸酶(inorganicpyrophosphatase),屬于磷酸酶家族,包括磷酸單酯酶(phosphomonoesterase)、磷酸二酯酶(phosphodiesterase)等。通過釋放磷酸根,參與DNA合成、RNA合成、輔酶合成、鈣吸收、骨形成、氨基酸合成和脂肪酸代謝的激活等代謝活動(dòng)。焦磷酸酶分為堿性和酸性,前者作用于合成代謝,而后者作用于分解反應(yīng)。焦磷酸酶催化無機(jī)焦磷酸水解產(chǎn)生2個(gè)磷酸根離子的反應(yīng),為能量釋放反應(yīng)(exergonicreaction)。在植物中,尤其碳4或碳3植物的葉片中,活性Z高。在固碳還原和光合作用起著重要作用成為碳4植物通路的指標(biāo)?;诘孜餆o機(jī)焦磷酸,在堿性條件下,受到堿性焦磷酸酶的去磷酸化作用,釋放出游離磷酸根,由硫酸亞鐵氨還原產(chǎn)生鉬藍(lán)顯色反應(yīng)后,在分光光度儀下(660nm波長(zhǎng))產(chǎn)生峰值的變化,由此測(cè)定堿性焦磷酸酶的活性。[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
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用實(shí)時(shí)直接質(zhì)譜法檢測(cè)腺嘌呤釋放測(cè)定蓖麻毒素活性
- 用實(shí)時(shí)直接質(zhì)譜法檢測(cè)腺嘌呤釋放測(cè)定蓖麻毒素活性[詳細(xì)]
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2010-04-28 00:00
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2021-02-24 15:55
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使用 SpectraMax 微孔板讀板機(jī)進(jìn)行 HTRF IP-One Gq 檢測(cè)
- 使用 SpectraMax 微孔板讀板機(jī)進(jìn)行 HTRF IP-One Gq 檢測(cè)[詳細(xì)]
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2022-04-26 16:41
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使用 SpectraMax 微孔板讀板機(jī)進(jìn)行 HTRF IP-One Gq 檢測(cè)
- HTRF? 是 Cisbio 公司開發(fā) 的用于檢 測(cè) 生物 分子相互作用的實(shí)驗(yàn)技術(shù) 1。它將熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET) 技術(shù)與時(shí)間分辨(TR) 熒光技術(shù)相結(jié)合,可以消除熒光壽命較短的背景熒光。該 檢 測(cè)方法 使 用銪 (Eu3+) 或 鋱 (Lumi4 ? -Tb) 的穴狀 化合 物作為供體,熒光團(tuán) ( XL665 或小分子 d2 ) 作為受體。當(dāng)供體和受體距離足夠近時(shí),供體被一個(gè)能量源激發(fā),可以引發(fā)能量轉(zhuǎn)移到受體,使其在特定波長(zhǎng)發(fā)出熒光。
在 這 里, 我 們 展 示 了 如 何 使 用 SpectraMax?i3x 和SpectraMax?iD5 多功能微孔 板讀 板機(jī) 應(yīng) 用 HTRF 技術(shù)進(jìn) 行Gq- 偶聯(lián)受體的分析。G 蛋白偶聯(lián)受體的分析主要通過檢測(cè)cAMP 和 IP3 這兩條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平的升高。Cisbio 公司的 IP-One Gq 試劑盒通過檢測(cè) IP3 的穩(wěn)定下游代謝產(chǎn)物——磷酸肌醇 (IP1) 的積累,為鈣離子檢測(cè)提供了一種替代方法。[詳細(xì)]
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2024-09-10 22:51
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2015-01-07 00:00
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2018-09-02 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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