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用 cAMP-Gs HiRange HTRF 法檢測(cè) GPCR 活性

本文由 美谷分子儀器(上海)有限公司 整理匯編

2021-07-08 15:56 792閱讀次數(shù)

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HTRF? 是由 Cisbio 開發(fā)的用于檢測(cè)生物分子相互作用的通用技術(shù)。它將熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET) 技術(shù)與熒光的時(shí)間分辨(TR) 測(cè)量相結(jié)合,可以消除短壽命的背景熒光。該測(cè)定使用供體和受體熒光團(tuán),它們用于標(biāo)記要研究其結(jié)合的蛋白質(zhì)或其他生物分子。 當(dāng)兩個(gè)生物分子相互結(jié)合時(shí),供體和受體就靠
在一起了。能量源 ( 例如閃光燈 ) 對(duì)供體的激發(fā)觸發(fā)能量轉(zhuǎn)移到受體,受體繼而在給定波長(zhǎng)發(fā)射特定熒光。
HTRF 使 用四種特定的熒光團(tuán),它們可以組合形成相容的供體 - 受體 TR-FRET 對(duì)。 供體是穴狀銪 (Eu3+) 和鋱穴狀化合物(Lumi4 ? -Tb),它們的長(zhǎng)壽命熒光使其可用于時(shí)間分辨熒光分析。已經(jīng)開發(fā)了兩種受體用于 HTRF 分析,XL665 和 d2。兩者的激發(fā)光譜都與 HTRF 供體的發(fā)射光譜重疊,在 665 nm處的發(fā)射峰落在供體不顯著發(fā)射的區(qū)域內(nèi)。Z初的 HTRF 受體 XL665 是一種從紅藻中純化的藻膽蛋白色素。 第二代受體d2 是改良的別藻藍(lán)蛋白,比 XL665 小 100 倍,旨在緩解基于XL665 的檢測(cè)可能出現(xiàn)的空間位阻問題。

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