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培養(yǎng)細胞染色體顯示法
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本文由 湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司 整理匯編
2024-09-14 01:07 1114閱讀次數(shù)
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培養(yǎng)細胞染色體顯示法
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培養(yǎng)細胞染色體顯示法
- 培養(yǎng)細胞染色體顯示法[詳細]
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2024-09-14 01:07
期刊論文
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小鼠的染色體制備
- 實驗原理小鼠細胞有高度的分裂活性,并且數(shù)量非常多,因此不必進行體外培養(yǎng),可直接觀察到分裂期細胞。處于分裂期的細胞經(jīng)秋水仙素處理,阻斷紡錘絲的形成,使細胞分裂停止于中期,此時染色體達到Zda收縮,具有典型的形態(tài)。低滲處理使細胞破裂,便于染色體分散。該方法在臨床上多用于白血病的研究,也可用于觀察毒性物質(zhì)對機體遺傳物質(zhì)染色體損傷的狀況。小鼠染色體2n=40,均為端著絲粒染色體,雄性為40,XY,雌性為40,XX。實驗試劑1.0.85%生理鹽水2.固定液(甲醇∶冰醋酸為3∶1)3.PBS(pH6.8)4.Giemsa染液5.秋水仙素(以100μg/ml的濃度溶于0.85%生理鹽水中)6.0.075mol/LKCl實驗設備1.顯微鏡2.恒溫水浴鍋3.低速離心機4.電子天平5.解剖器械(搪瓷解剖盤、剪刀、鑷子)6.注射器7.針頭8.試管及試管架9.滴管及載玻片實驗材料小鼠實驗步驟1.秋水仙素處理:取前3h先給小鼠腹腔注入秋水仙素,注射劑量為100μg/kg動物體重。2.?。河脫p傷脊髓法處死小鼠,然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉,取出大腿骨,用一小塊紗布搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關節(jié)頭,然后用注射器吸取5ml0.85%生理鹽水,插入股骨一端,將細胞沖洗至10ml的離心管中??芍貜蜎_洗多次,直至腔呈白色為止。3.低滲處理:將所獲得的細胞懸浮液以1000rpm離心10min,吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加0.075mol/LKCL溶液(37℃)至8ml刻度,將細胞沉淀物吹散打勻,在37℃水浴低滲25min。4.固定:低滲處理后,立即加入1ml新配制且預冷的固定液,抽打均勻,然后1000rpm離心10min,棄上清。沿管壁加固定液至6ml,吹散細胞后靜止固定10min,即**次固定。按上述條件離心,去上清液,再次加入固定液至6ml,進行第二次固定。10min后離心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液,沖勻制成細胞懸液。5.滴片:取事先在冰箱中預冷的載玻片,從約15cm高處向每個載玻片上滴1~2滴細胞懸液于粘有冰水的載玻片上,晾干。6.染色:取制片平放在玻璃板上,用1∶9Giemsa染液染色20min,流水沖洗后晾干。7.觀察:小白鼠染色體的形態(tài)特征,并計算2n的染色體數(shù)目。[詳細]
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2018-10-08 10:01
產(chǎn)品樣冊
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染色體研究獲諾貝爾醫(yī)學獎
- 染色體研究獲諾貝爾醫(yī)學獎[詳細]
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2024-09-28 23:21
安裝說明
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22號染色體開放閱讀框28抗體
- 22號染色體開放閱讀框28抗體[詳細]
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2024-09-14 19:10
課件
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淋巴組織細胞或培養(yǎng)細胞表面抗原流式檢測步驟
- 淋巴組織細胞或培養(yǎng)細胞表面抗原流式檢測步驟(一)細胞樣品準備收集組織或細胞1.取出目的組織(如:、淋巴結、胸腺、等),迅速浸泡在CellStainingBuffer(BioLegendCat.#420201)中,并應用研磨及過濾等方法制備成單細胞懸液;如果為體外培養(yǎng)細胞,直接用CellStainingBuffer重懸細胞后進行下一步操作。2.添加CellStainingBuffer至約15mL,離心(350xg)5分鐘后棄去上清液。裂解紅細胞(組織等)3.如樣品為組織細胞,需要裂解紅細胞。把10X紅細胞裂解液(RBCLysisBuffer)(BioLegendCat.#420301)用去離子水稀釋成1X工作液。然后用3ml紅細胞裂解工作液重懸細胞后,在冰上孵育5分鐘。4.加入10mlCellStainingBuffer到管中;離心(350xg)5分鐘后棄去上清液。5.重復洗滌細胞一次(步驟2)。6.用CellStainingBuffer重懸細胞后計數(shù),稀釋細胞為5-10x106細胞/ml,然后每支流式檢測管中加入100uL細胞懸液(5-10x105細胞/管)。Fc受體封閉(可選)7.Fc受體的封閉過程是為了減少抗體的非特異性結合造成的影響;對于小鼠細胞的檢測,BioLegend公司的純化抗小鼠CD16/CD32抗體特異識別并結合FcγRIII/II(Cat.#101302,clone93),適用于封閉抗體非特異染色;實驗操作為用5-10μg/ml純化CD16/32抗體與細胞冰上孵育10分鐘。而對于市面上沒有可用的人或大鼠封閉抗體,可以采用加入無關純化免疫球蛋白(如與所用熒光標記抗體相同種屬和抗體亞型)到細胞樣品中進行封閉。(二)細胞表面熒光染色步驟8.在每個流式檢測管中加入適量的預稀釋好的一抗(熒光標記抗體、生物標記抗體或純化抗體);在空白管/孔或同型對照管/孔中加入與抗體相同量的對照試劑。然后各管避光冰浴或在4℃冰箱中孵育15-20分鐘。(注:有些抗體可能需要更長的孵育時間,建議實驗者進行預試驗摸索)9.加入至少2mLCellStainingBuffer,然后350g離心5分鐘后棄去上清液;重復洗滌過程兩次。10.(間接標記)若使用的一抗是純化或生物素標記抗體,則每管/孔加入適量稀釋好的熒光標記二抗或熒光標記親和素(SAv-PE,BioLegendCat.#405204)后于冰浴或在4℃冰箱中避光孵育15-20分鐘。11.重復洗滌細胞一次(按步驟9)。12.用0.5mlCellStainingBuffer重懸細胞;如有必要,加入10uL(0.25μg)/million細胞的核染料7-AAD(BioLegendCat.#420401)以區(qū)分活、死細胞,冰上孵育3-5分鐘。(注:我們不建議7-AAD與PE-Cy5或PE-Cy7等熒光標記抗體聯(lián)用)13.上機檢測并分析結果。B.全血細胞表面抗原的流式檢測步驟1.往含有100uL抗凝全血的流式檢測管中加入適量的預稀釋好的一抗(熒光標記抗體、生物標記抗體或純化抗體)。2.室溫避光孵育15-20分鐘。(注:有些結合能力較低的抗體可能需要更長的孵育時間,建議實驗者進行預試驗摸索)3.把10X紅細胞裂解液(RBCLysisBuffer)(BioLegendCat.#420301)用去離子水稀釋成1X工作液,用之前恢復至室溫。加入2ml紅細胞裂解工作液到含全血/一抗的檢測管中,室溫孵育10分鐘。4.350g離心5分鐘后棄去上清液。5.加入至少2mLCellStainingBuffer,然后350g離心5分鐘后棄去上清液。6.(間接標記)若使用的一抗是純化或生物素標記抗體,則每管/孔加入適量稀釋好的熒光標記二抗或熒光標記親和素(SAv-PE,BioLegendCat.#405204)后室溫避光孵育15-20分鐘。7.重復洗滌細胞一次(按步驟5)。8.用500ulStainingBuffer或500ul2%的多聚甲醛固定液重懸細胞。9.上機檢測并分析結果。[詳細]
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2018-10-20 10:00
產(chǎn)品樣冊
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【震驚】癌基因竟然不存在于染色體上?
- 昨日,Paul S.Mischel教授團隊在Nature雜志上發(fā)表了名為Circular ecDNA promotes accessible chromatin and high oncogene expression的文章,該文章S次解析了ecDNA的結構與功能。
那么什么是ecDNA呢?
研究團隊發(fā)現(xiàn),其實大量的癌基因并不在染色體上,而是會從染色體上脫落下來,變成一種小型的DNA,稱為染色體外DNA(extrachromosomal DNA,簡稱ecDNA)
[詳細]
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2024-09-18 18:07
應用文章
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轉速顯示儀
- 上海自動化儀表股份有限公司銷售電話:021-51871155-807021-51871177-807QQ:2355608634手機:18221951425聯(lián)系人:葉經(jīng)理地址:上海市徐匯區(qū)中山西路2281號15樓網(wǎng)址:http://www.mc-saic.com/[詳細]
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2018-09-24 10:02
產(chǎn)品樣冊
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速度顯示儀
- 上海自動化儀表股份有限公司銷售電話:021-51871155-807021-51871177-807QQ:2355608634手機:18221951425地址:上海市徐匯區(qū)中山西路2281號15樓[詳細]
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2018-09-24 10:02
產(chǎn)品樣冊
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XSW-AHT2A1B1V0顯示控制器
- XSW-AHT2A1B1V0顯示控制器單通道熱工表W系列規(guī)格描述160×80×125mm橫式開孔尺寸:152×7680×160×125mm豎式開孔尺寸:152×7696×96×76mm開孔尺寸:92×9296×48×82mm橫式開孔尺寸:92×4548×96×82mm豎式開孔尺寸:92×4572×72×75mm開孔尺寸:68×6848×48×110mm開孔尺寸:45.5×45.50.2級精度,測控速度每秒10次,顯示范圍-1999~9999。雙四位數(shù)碼管顯示(主顯示+第二顯示),其中第二顯示可供顯示工程量單位等信息。wan能輸入,通過設置選擇??蛇x配1~4點報警輸出。包括測量值上限、測量值下限、偏差上限、偏差下限、偏差值五種基本報警方式和與五種基本報警方式對應的五種待機報警方式。(待機報警方式:指儀表通電時即使處于報警區(qū)域也不報警,當測量值進入不報警區(qū)域后建立待機條件,此后正常報警)。10段折線修正功能。峰值、谷值獲取功能??蛇x配通訊、變送。XSW-AHT2A1B1V0顯示控制器XSW-AHA1T2B1V0顯示控制器XSW-BT4B1V0顯示控制器詳細介紹XSW-AHT2A1B1V0顯示控制器XSW-AHA1T2B1V0顯示控制器XSW-BT1B1V0XSW-BT2B1V0XSW-BT3B1V0XSW-BT4B1V0XSW-BT1B1V1XSW-BT2B1V1XSW-BT3B1V1XSW-BT4B1V1XSW-DT1B1V1XSW-DT2B1V1XSW-DT3B1V1XSW-AHT2B1V1XSW-CHT2B1V0XSW-SHAT2B1V0XSW-AHA1T2B1V0XSW-AHBT2B1V0[詳細]
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2018-10-27 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)檢測試劑盒
- 人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)檢測試劑盒[詳細]
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2015-03-11 00:00
期刊論文
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藍色熒光染色體核型分析試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途藍色熒光(DAPI)染色體核型分析試劑是一種旨在通過使用熒光染料DAPI與染色體DNA的結合并發(fā)出熒光檢測信號來顯示染色體帶型特征而構成細胞染色體核型的權威而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。該熒光分析是細胞遺傳學中的Zxin研究技術。適用于各種生長中的動物或人體細胞。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,熒光清晰。技術背景作為細胞DNA染色劑之一的4,6-二咪基-4-聯(lián)苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole;DAPI)特異性地與DNA雙螺旋的凹槽部分發(fā)生相互作用,從而與DNA的雙鏈緊密結合。結合后產(chǎn)生的熒光基團的吸收峰是358nm而散射峰是461nm,正好是UV(紫外光)的激發(fā)波長356nm,使得DAPI成為了一種常用的熒光檢測信號。通過DAPI的染色顯示其帶型特征,然后根據(jù)體細胞中全套染色體形態(tài)特征和大小順序排列,并依次配對、分組,構成該個體的核型或染色體組型,從而可以識別和分析染色體結構和數(shù)量的異常,成為產(chǎn)前診斷或腫瘤細胞遺傳學的工具。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升滯態(tài)液(ReagentB)毫升低滲液(ReagentC)毫升固定液A(ReagentD)毫升固定液B(ReagentE)毫升預備液(ReagentF)毫升染色液(ReagentG)毫升抗淬滅劑(ReagentH)毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存滯態(tài)液(ReagentB)和染色液(ReagentG)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;滯態(tài)液(ReagentB)、染色液(ReagentG)和抗淬滅劑(ReagentH),避免光照,有效保證6月用戶自備胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液:用于細胞脫離完全細胞培養(yǎng)液:用于細胞培養(yǎng)無離子水:用于清洗染色的載玻片50毫升錐形離心管:用于細胞處理的容器37℃恒溫水槽:用于預熱試劑溶液臺式離心機:用于沉淀細胞小型染色缸:用于載玻片染色的容器載玻片:用于細胞涂片和染色顯微鏡:用于觀察細胞分裂和染色體組型實驗步驟實驗開始前,將試劑盒里的固定液A(ReagentD)和B(ReagentE)從4℃的冰箱里取出,移取A液xx毫升和B液xx毫升加入到50毫升錐形離心管,混勻后標記成為固定工作液,置入冰槽里。同時在37℃恒溫水槽里預熱清理液(ReagentA)、滯態(tài)液(ReagentB)、低滲液(ReagentC)。然后進行下列操作。限定細胞在有絲分裂中期(METAPHASE)1)貼壁細胞處理抽去鋪滿生長細胞的75cm2細胞培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液加入xx毫升清理液(ReagentA)到細胞培養(yǎng)瓶,覆蓋培養(yǎng)瓶表面,小心抽去清理液(ReagentA)加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿整個培養(yǎng)平面放進37℃培養(yǎng)箱孵育3分種手擊振動培養(yǎng)瓶,使細胞脫落加入15毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液,充分混勻移出10毫升混勻物到新的75cm2細胞培養(yǎng)瓶加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液到上述新的75cm2細胞培養(yǎng)瓶放進37℃細胞培養(yǎng)箱孵育16至20小時小心抽去鋪滿70%生長細胞的75cm2細胞培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液加入xx微升37℃預熱的滯態(tài)液(ReagentB),輕輕搖動細胞培養(yǎng)瓶,使其混勻放進37℃細胞培養(yǎng)箱,孵育2小時在顯微鏡觀察下,細胞開始收縮變圓,表明細胞處于有絲分裂手擊振動拍打培養(yǎng)瓶,使細胞脫落移出含有滯態(tài)液(ReagentB)的細胞培養(yǎng)液到50毫升錐形離心管加入xx毫升清理液(ReagentA)到培養(yǎng)瓶,清洗整個細胞表面移出清理液合并到50毫升錐形離心管加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿整個培養(yǎng)平面置入37℃培養(yǎng)箱3分種手擊振動培養(yǎng)瓶,使細胞脫落加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液,充分混勻移出混勻物合并到50毫升錐形離心管放進臺式離心機離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液(保留0.3毫升)手指輕彈混勻細胞2)懸浮細胞處理準備好108懸浮細胞(淋巴細胞、白細胞、細胞等)移入到50毫升錐形離心管放進臺式離心機離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液(選擇步驟)加入xx毫升清理液(ReagentA),混勻顆粒群(選擇步驟)放進臺式離心機離心5分鐘,速度為300g(選擇步驟)小心抽去清理液(ReagentA)加入15毫升用戶自備的RPMI1640完全細胞培養(yǎng)液,充分混勻細胞顆粒群轉移到到新的75cm2細胞培養(yǎng)瓶放進37℃細胞培養(yǎng)箱孵育16至20小時移入到50毫升錐形離心管放進臺式離心機離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液加入10毫升用戶自備的RPMI1640完全細胞培養(yǎng)液,混勻細胞顆粒群加入xx微升37℃預熱的滯態(tài)液(ReagentB),混勻放進37℃細胞培養(yǎng)箱,孵育2小時在顯微鏡觀察下,細胞開始收縮,表明細胞處于有絲分裂放進臺式離心機離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液加入10毫升用戶自備的RPMI1640完全細胞培養(yǎng)液,充分混勻放進臺式離心機離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液(保留0.3毫升)手指輕彈混勻細胞二.低滲處理有絲分裂細胞用滴管一滴一滴加入xx毫升37℃預熱的低滲液(ReagentC)到50毫升錐形離心管,輕輕搖動放進37℃細胞培養(yǎng)箱孵育15分鐘放進臺式離心機離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液(保留0.3毫升)手指輕彈混勻細胞三.固定細胞1.用滴管一滴一滴加入xx毫升預冷的固定工作液到50毫升錐形離心管,輕輕搖動2.放進冰槽里孵育至少5分鐘3.放進臺式離心機離心5分鐘,速度為300g4.小心抽去上清液(保留0.3毫升)5.手指輕彈混勻細胞6.重復上述步驟1至5,直到沉淀細胞顆粒群為白色(越白越好)7.加入5毫升固定工作液到50毫升錐形離心管,充分混勻四.染色體載片制作1.先將載玻片置于冰箱里冷卻,然后放在實驗臺上,并排放上5至10張2.從高達30至60厘米處向下滴上3滴細胞混勻液在載玻片上,立即吹散開,使其散開或然后拿起載玻片,輕輕拍擊手掌(注意:參見注意事項8)3.在顯微鏡下觀察有絲分裂中期的細胞4.空氣中晾干載玻片(注意:參見注意事項8)5.可以保存在70%酒精里,放進4℃冰箱長達一年。剩下的在固定液里的細胞可以長期保存在-20℃冰箱里五.染色加入xx毫升預備液(ReagentF)到小型染色缸(Coplinjar)放進晾干的載玻片孵育30秒取出載玻片,加上xx微升染色液(ReagentG),鋪滿整個細胞表面置入暗室3分鐘放進含有預備液(ReagentF)的小型染色缸孵育30秒取出載玻片,用用戶自備的無離子水輕輕沖洗3次在暗室里晾干加上xx微升抗淬滅劑(ReagentH)封片在熒光顯微鏡紫外波長下,觀察呈現(xiàn)藍色的細胞染色體將熒光圖像轉換為黑白圖像,顯示G帶條帶進行分析[詳細]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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藍色熒光染色體核型分析試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 藍色熒光染色體核型分析試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細]
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2016-03-10 00:00
標準
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上海銘博生物實驗室-染色體FISH試劑盒文獻
- 染色體FISH試劑盒文獻[詳細]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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光束寬度測量顯示
- 光束寬度測量顯示[詳細]
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2015-07-03 00:00
報價單
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DNA的原位顯示
- DNA的原位顯示[詳細]
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2015-12-14 00:00
其它
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電阻率顯示儀CM-306
- 電導率顯示儀,電阻率顯示儀,電阻率表,電導率表,CM-306[詳細]
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2018-09-20 10:00
產(chǎn)品樣冊
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電阻率顯示儀CM-306
- 電導率顯示儀,電阻率顯示儀,電阻率表,電導率表,CM-306[詳細]
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2018-09-20 10:00
產(chǎn)品樣冊
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現(xiàn)場顯示壓力傳感器HAD503S
- 現(xiàn)場顯示壓力傳感器、壓力變送器型號:HAD503S采用不銹鋼整體構件,進口彈性體原件,高精度應變計及先進的貼片工藝,具有靈敏度高、性能穩(wěn)定、良好的抗沖擊能力。316不銹鋼全封焊接,壓力傳感器自帶三位半LED顯示,同時輸出模擬信號,以便給后端控制機構采樣壓力信號,結構小巧、緊湊,有良好的防潮能力和優(yōu)異的介質(zhì)兼容性。測量介質(zhì):弱腐蝕性的液體;弱腐蝕性的氣體。廣泛用于工業(yè)設備、水利、化工、YL、電力、空調(diào)、金剛石壓機、冶金、車輛制動、樓宇供水等壓力測量與控制。此類傳感器通常也稱為:油壓傳感器,油壓變送器,液壓傳感器,液壓變送器,風壓傳感器,風壓變送器,氣壓傳感器,氣壓變送器,應變式壓力傳感器,應變式壓力變送器,壓阻式壓力傳感器,壓阻式壓力變送器,正負壓力傳感器,正負壓力變送器,管道壓力傳感器,管道壓力變送器等。主要技術參數(shù):量程:-0.1~0~1~150(MPa)綜合精度:0.1%FS、0.25%FS、0.5%FS、1.0%FS輸出信號:4~20mA(二線制現(xiàn)場顯示:LED三位半,0000-1999供電電壓:24DCV(9~36DCV)介質(zhì)溫度:-20~85~150℃環(huán)境溫度:常溫(-20~85℃)零點溫漂移:≤±0.05%FS℃量程溫度漂移:≤±0.05%FS℃補償溫度:0~70℃安全過載:150%FS極限過載:200%FS響應時間:5mS(上升到90%FS)負載電阻:電流輸出型:Zda800Ω;電壓輸出型:大于50KΩ絕緣電阻:大于2000MΩ(100VDC)密封等級:IP65長期穩(wěn)定性能:0.1%FS/年振動影響:在機械振動頻率20Hz~1000Hz內(nèi),輸出變化小于0.1%FS電氣接口(信號接口):緊線螺母+四芯屏蔽線機械連接(螺紋接口):1/2-20UNF、M14×1.5、M20×1.5、M22×1.5等,其它螺紋可依據(jù)客戶要求設計外形尺寸:M20×Φ26×178[詳細]
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2018-09-24 10:01
產(chǎn)品樣冊
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XVS-01D轉速顯示儀
- 上海自動化儀表股份有限公司銷售電話:021-51871155-807021-51871177-807QQ:2355608634手機:18221951425聯(lián)系人:葉經(jīng)理地址:上海市徐匯區(qū)中山西路2281號15樓[詳細]
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2018-09-24 10:02
產(chǎn)品樣冊
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轉速數(shù)字顯示儀
- 上海自動化儀表股份有限公司銷售電話:021-51871155-807021-51871177-807QQ:2355608634手機:18221951425銷售傳真:021-54250022聯(lián)系人:葉經(jīng)理地址:上海市徐匯區(qū)中山西路2281號郵編:200233http://www.mc-saic.com/default.asphttp://www.saic3.com/http://www.mc-saic.com/zyshichang/index.html[詳細]
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2018-09-24 10:02
產(chǎn)品樣冊
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