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產(chǎn)品應(yīng)用（27）核酸及蛋白質(zhì)檢測方法集錦（上）
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本文由 美谷分子儀器（上海）有限公司 整理匯編
2021-02-23 16:31 462閱讀次數(shù)
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如何能夠準(zhǔn)確和靈敏對核酸及蛋白質(zhì)進(jìn)行定量檢測是許多實(shí)驗(yàn)成敗與否的重要環(huán)節(jié)。Molecular Devices? 酶標(biāo)儀為核酸及蛋白質(zhì)檢測提供了多種可靠方案。
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產(chǎn)品應(yīng)用（27）核酸及蛋白質(zhì)檢測方法集錦（上）- 如何能夠準(zhǔn)確和靈敏對核酸及蛋白質(zhì)進(jìn)行定量檢測是許多實(shí)驗(yàn)成敗與否的重要環(huán)節(jié)。Molecular Devices?酶標(biāo)儀為核酸及蛋白質(zhì)檢測提供了多種可靠方案。結(jié)合SoftMax Pro? 軟件強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，可一鍵生成定量結(jié)果，并可根據(jù)用戶需求定制格式并導(dǎo)出數(shù)據(jù)。[詳細(xì)]
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- 蛋白質(zhì)溶液濃度測定方法蛋白質(zhì)溶液濃度測定方法有多種，下述幾種方法可供選用。蛋白質(zhì)濃度的測定，往往用于計(jì)算純化方法的回收率的重要方法。一、雙縮脲法雙縮脲法是**個用比色法測定蛋白質(zhì)濃度的方法，至令仍廣泛采用。在需要快速，但不很準(zhǔn)確的測定中，常用此法。硫銨不干擾顯色，這對蛋白質(zhì)提純的早期價段是非常有利的。雙縮脲法的原理是Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵，以及酪氨酸殘基絡(luò)合，形成紫藍(lán)色絡(luò)合物，此物在540nm波長處有Zda吸收。雙縮脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白質(zhì)溶液測定。干擾物有硫醇，以及具有肽性質(zhì)緩沖液，如Tris、Good緩沖液等。可用沉淀法除去干擾物，即用等體積10%冷的三氯醋酸沉淀蛋白質(zhì)，然后棄去上清液，再用已知體積的1mNaOH溶解沉淀的蛋白質(zhì)進(jìn)行定量測定。二、Lowry法此法是雙縮脲法的進(jìn)一步發(fā)展。他的**步就是雙縮脲反應(yīng)，即Cu++與蛋白質(zhì)在堿性溶液中形成絡(luò)合物，然后這個絡(luò)合物還原磷鉬磷-磷鎢酸試劑（福林-酚試劑），結(jié)果得到深藍(lán)色物。此法比雙縮脲法靈敏得多，適合于測定20mg/L～400mg/L含量的蛋白質(zhì)溶液。其干擾物質(zhì)與雙縮脲法相同，而且受他們的影響更大，硫醇和許多其他物質(zhì)的存在會使結(jié)果嚴(yán)重偏差。另外要注意的是，加入福林試劑時要特別小心，試劑只在酸性pH環(huán)境中才穩(wěn)定，上述提到的還原反應(yīng)只有在pH10時才發(fā)生，因此，福林試劑加入到堿性的Cu2+-蛋白質(zhì)溶液中時，必須立刻攪拌，以使磷鉬酸-磷鎢酸試劑在未被破壞之前能有效地被Cu2+-蛋白質(zhì)絡(luò)合物所還原。三、紫外吸收法大多數(shù)蛋白質(zhì)在280nm波長處有特征的Zda吸收，這是由于蛋白質(zhì)中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在的緣故，因此，利用這個特異性吸收，可以計(jì)算蛋白質(zhì)的含量。如果沒有干擾物質(zhì)的存在，在280nm處的吸收可用于測定0.1～0.5mg/ml含量的蛋白質(zhì)溶液。部分純化的蛋白質(zhì)常含有核酸，核酸在260nm波長處有Zda吸收。有核酸時，所測得的蛋白質(zhì)濃度必須作適當(dāng)校正，一般按下述公式粗略計(jì)算：是蛋白質(zhì)溶液在280nm波長處（光程1厘米）測得的光密度值。是蛋白質(zhì)溶液在260nm小波長處（光程1厘米）處所測得的光密度值。此方程是從烯醇酶（在酵母核酸存在時）得出來的。因此，對其他蛋白質(zhì)和其他核酸不一定適用。由于各種蛋白質(zhì)所含芳香族氨基酸的量不同，因此，濃度為0.1%的各種蛋白質(zhì)在280nm處的消光系數(shù)（）在0.5～2.5之間變化。所有的蛋白質(zhì)在230nm以下都有強(qiáng)吸收。例如，牛血清白蛋白的α0.1%在225nm和215nm處分別為5.0和11.7，而在280nm處測為0.58。在230nm以下的強(qiáng)吸收是由于肽鍵的存在，因此，此值對所有的蛋白質(zhì)都是一樣的。從215nm和225nm處的光密度之差可用于測定濃度為10μl/ml～100μl/ml的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)濃度可以近似地由下式得到：光密度之差求得，這一公式是減去溶液中非蛋白質(zhì)成分產(chǎn)生的誤差。但是，蛋白質(zhì)之間的分子量差異比較大，因此，在比較幾種蛋白質(zhì)含量時，必須作適當(dāng)?shù)男Ｕ?。由于蛋白質(zhì)的吸收峰常因pH改變而變化，所以在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時，必須與樣品條件一致。相關(guān)產(chǎn)品如下：聯(lián)系方式上海索萊寶生物科技有限公司電話：021-6485566518018609966傳真：021-54261506郵編：200233地址：上海市欽江路15號14層郵箱：solarbio@126.com網(wǎng)址：www.shsolarbio.com優(yōu)質(zhì)試劑質(zhì)量放心價格Zdi為ZG生物產(chǎn)業(yè)做貢獻(xiàn)蛋白濃度測定相關(guān)產(chǎn)品特價促銷索寶特價另有其他常用生化試劑歡迎詢問【021-54100800】[詳細(xì)]
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2018-09-02 10:00
產(chǎn)品樣冊
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- 提取蛋白質(zhì)的方法
- 植物組織蛋白質(zhì)提取方法：1、根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時）。3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，樣品制備完成。蛋白質(zhì)提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g這種方法針對SDS-PAGE，垂直板電泳！三氯醋酸丙酮沉淀法1、在液氮中研磨葉片2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下，然后離心（4℃8000rpm以上1小時）棄上清。3、加入等體積的冰浴丙酮（含0.07%的β-巰基乙醇），搖勻后離心（4℃8000rpm以上1小時），然后真空干燥沉淀，備用。4、上樣前加入裂解液，室溫放置30分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離心（15℃8000rpm以上1小時或更長時間以沒有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)），可臨時保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白，然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩?a href="/doc/detail_87a108bac081a029.html" target="_blank">[詳細(xì)]
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2018-09-27 10:00
產(chǎn)品樣冊
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