以瓊脂或瓊脂糖作為支持介質(zhì)的一種電泳方法,稱為瓊脂糖凝膠電泳。通常采用較大孔徑的瓊脂糖凝膠電泳分離如大分子核酸、病毒等分子量較大的樣品。
原理
使用瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法,叫做瓊脂糖凝膠電泳。瓊脂糖凝膠電泳既有“分子篩”的作用,又有“電泳”的作用,是其分析原理與其他支持物電泳Z主要的分別。
瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),當(dāng)物質(zhì)分子通過時會受到阻力,大分子物質(zhì)在涌動時受到的阻力大,所以在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不但由凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量決定,而且還受到分子大小的影響,這使得分辨的能夠大大的提高了。然而因為和蛋白質(zhì)相比,其孔徑要大太多,所以其分子篩作用對于大多數(shù)蛋白質(zhì)的效果微乎其微。目前,其在核酸的研究中得到了廣泛的應(yīng)用。

DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。在高于等電點的pH溶液中,DNA分子帶負(fù)電荷,在電場中向正極移動。因為糖-磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì),數(shù)量相同的雙鏈DNA具有的靜電荷幾乎是等量的。所以它們向正極方向移動的速率是相同的。
應(yīng)用
凝膠電泳在分子生物學(xué)、遺傳學(xué)和生物化學(xué)得到廣泛的應(yīng)用。
1.一般使用瓊脂糖凝膠電泳來分離大的DNA或者RNA分子,聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)也可以被使用。
2.一般在加入十二烷基硫酸鈉的聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行蛋白質(zhì)的凝膠電泳,或二維電泳,或非變性凝膠電泳。
3、酶譜法
4、毛細(xì)管電泳
5、變性梯度膠凝電泳
各種形狀、大小和孔隙度能夠由瓊脂糖和聚丙烯酰胺制成。瓊脂糖凝膠能夠分離范圍比較廣的DNA片斷。長度從200bp至近50kb的DNA片段可以由不同濃度瓊脂糖凝膠分離出來。瓊脂糖一般用水平裝置在強(qiáng)度和方向恒定的電場下電泳。對于小片段DNA(5-500bp)的分離,聚丙烯酰胺具有比較好的效果,其具有極高的分辯力,甚至能夠分開相差1bp的DNA片段。聚丙烯酰胺凝膠電泳速度很快,能夠?qū)ο鄬Υ罅康腄NA進(jìn)行容納,然而和瓊脂糖凝膠相比,它的制備和操作更加的困難。聚丙烯酰胺凝膠采用垂直裝置進(jìn)行電泳。通常實驗室進(jìn)行DNA電泳大多數(shù)使用瓊脂糖水平平板凝膠電泳裝置。
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