透射電鏡是一種綜合性大型分析儀器，在現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的研究開發(fā)工作中被廣泛地使用。由于透射電鏡能觀察的樣品必須很薄(60～70nm)，所以透射電鏡的樣品準(zhǔn)備要求很嚴(yán)格，方法也很單一。一般有以下兩種方法：

負(fù)染色技術(shù)

　　負(fù)染色技術(shù)簡(jiǎn)單快速，可以顯示生物大分子、細(xì)菌、分離的細(xì)胞器以及蛋白晶體等樣品的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、大小以及表面結(jié)構(gòu)的特征。尤其在病毒學(xué)中，負(fù)染色技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用。

　　樣品要求：①透射電鏡樣品懸液的純度不要求很純，但是如果雜質(zhì)太多，如大量的細(xì)胞碎片，培養(yǎng)基殘?jiān)?，糖類以及各種鹽類結(jié)晶的存在都會(huì)干擾染色反應(yīng)和透射電鏡的觀察。尤其是不能有過多的糖類，因?yàn)樵陔娮邮霓Z擊下，糖類容易碳化而有礙觀察，因此樣品要適當(dāng)提純。②樣品懸液的濃度要適中，太稀在透射電鏡下很難找到樣品，太濃樣品堆積影響觀察。

　　操作流程：吸取樣品懸液滴到有膜的銅網(wǎng)上，靜置數(shù)分鐘，然后用濾紙吸去多余的液體，滴上負(fù)染色液，染色1～2min后濾紙吸去負(fù)染色液，待干后用于透射電鏡觀察。

超薄切片技術(shù)

　　超薄切片技術(shù)是為透射電鏡觀察提供薄樣品的專門技術(shù)，是生物學(xué)中研究細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)Z常用的技術(shù)。廣泛應(yīng)用于生物體的各種細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)觀察。一般厚度在10～100nm的切片稱為超薄切片，制作這種切片的技術(shù)叫做超薄切片技術(shù)。超薄切片制作的過程包括取材、固定、脫水、滲透、包埋、聚合、切片和染色等幾個(gè)環(huán)節(jié)，和一般光學(xué)顯微鏡的石蠟切片過程相似。但是，超薄切片切片過程更為細(xì)致與復(fù)雜，要求更嚴(yán)格，而且所用的試劑比較昂貴、配制復(fù)雜、強(qiáng)致癌。

　　具體操作步驟、注意事項(xiàng)如下：

　　1、取材和前固定：

　　快速的切取大小為0.5~1.0mm3的樣品塊，一分鐘內(nèi)把組織(樣品)塊浸入2.5%戊二醛溶液，每個(gè)離心管內(nèi)裝20以上的樣品塊，作為一個(gè)樣送到平臺(tái)。要求：①取材選擇部位要準(zhǔn)確可靠，確保每塊材料都是要觀察的部位。②所有植物樣品一定要抽真空，能夠沉底的樣品也抽真空15min，不能沉底的樣品一定要抽真空致沉底。③細(xì)菌、散在細(xì)胞等不能成塊的樣品，加戊二醛固定液，離心沉淀后送到平臺(tái)，由平臺(tái)工作人員處理。④泡在前固定液的材料Z多可以放2周。

　　2、漂洗：沖洗3次，每次15min。

　　3、后固定：加入1%鋨酸處理到樣品變黑。植物樣品一般處理2.5h，真菌、細(xì)菌一般處理2h，動(dòng)物樣品處理1h。注意事項(xiàng)：①鋨酸劇毒物質(zhì)，易揮發(fā)，操作時(shí)要在毒品柜中謹(jǐn)慎使用。②鋨酸比較昂貴，需特別節(jié)約使用。

　　4、漂洗：沖洗3次，每次15min。

　　5、脫水：室溫下，丙酮30%-50%-70%-80%-90%每級(jí)作用30min，純丙酮在作用3次，每次作用30min。

　　6、滲透：其目的是使包埋劑逐步滲入組織細(xì)胞內(nèi)。植物樣品需要的滲透梯度多、滲透時(shí)間長(zhǎng)。其他透射電鏡樣品可以適當(dāng)減少或縮短滲透梯度和時(shí)間。

　　7、包埋：用牙簽將滲透好的樣品挑到包埋板中，45℃聚合12h，60℃聚合36～48h。

　　8、超薄切片：超薄切片的切片面積Zda不能超過0.5mm×0.3mm，比較難切的植物樣品要求切片面積更小。超薄切片是在超薄切片機(jī)上進(jìn)行，但是切出比較理想的超薄切片，卻是一件不容易的工作。做好需要有滲透、包埋好的包埋塊，還要有好的切刀以及操作者的熟練技術(shù)等。超薄切片前期需要準(zhǔn)備載網(wǎng)和支持膜、修塊、制刀等，前期準(zhǔn)備工作至少需要半天時(shí)間。超薄切片是極其精細(xì)、耗費(fèi)眼力的工作，需要靜下心來慢慢操作，切好一個(gè)透射電鏡樣品至少需要1小時(shí)。

　　9、正染色：由于生物樣品主要由碳、氫、氧、氮等輕元素組成。這些元素原子對(duì)電子的散射能力很弱，相互之間的差別也很小。尤其生物超薄切片被樹脂所包埋，這些包埋樹脂對(duì)電子的散射能力與樣品本身差別很小。因此透射電鏡生物樣品超薄切片觀察時(shí)像的反差極弱。為了提高圖像的反差，要對(duì)超薄切片進(jìn)行電子染色。這里所謂電子染色是根本不同于光學(xué)顯微鏡的染色，它是利用重金屬鹽(如鉛鹽、鈾鹽等)與細(xì)胞的某些成分或結(jié)構(gòu)結(jié)合，由于重金屬對(duì)電子散射能力很強(qiáng)，使那些與其結(jié)合的結(jié)構(gòu)或成份對(duì)電子散射能力增強(qiáng)，從而達(dá)到提高樣品本身反差的。目前Z常用的染色劑是醋酸鈾和檸檬酸鉛染色液。操作流程是：超薄切片先檸檬酸鉛染色10分鐘，去二氧化碳的雙蒸水清洗3次，再用醋酸鈾染色30分鐘，雙蒸水清洗3次，等超薄切片干燥后，即可上透射電鏡觀察。