流式細(xì)胞儀是一種在功能水平上對(duì)單侖細(xì)施或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測(cè)儀器。流式細(xì)胞儀被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、生物學(xué)、微生物學(xué)、制藥學(xué)、生殖學(xué)等領(lǐng)域。

流式細(xì)胞儀的功能

　　流式細(xì)胞儀是對(duì)高速直線(xiàn)流動(dòng)的細(xì)胞或生物微粒進(jìn)行快速定量測(cè)定和分析的儀器，主要包括樣品的液流技術(shù)、細(xì)胞的計(jì)數(shù)和分選技術(shù)，計(jì)算機(jī)對(duì)數(shù)據(jù)的采集和分析技術(shù)等。

　　流式細(xì)胞儀以流式細(xì)胞術(shù)為理論基礎(chǔ)，是流體力學(xué)、激光技術(shù)、電子工程學(xué)、分子免疫學(xué)、細(xì)胞熒光化學(xué)和計(jì)算機(jī)等學(xué)科知識(shí)綜合運(yùn)用的結(jié)晶。流式細(xì)胞術(shù)是一種自動(dòng)分析和分選細(xì)胞或亞細(xì)胞的技術(shù)。

　　流式細(xì)胞儀的特點(diǎn)是：測(cè)量速度快、被測(cè)群體大、可進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量，即對(duì)同一個(gè)細(xì)胞做有關(guān)物理、生物化學(xué)特性的多參數(shù)測(cè)量，且在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有效。

流式細(xì)胞儀的校準(zhǔn)

　　流式細(xì)胞儀在使用前，甚至在使用過(guò)程中都要精心進(jìn)行調(diào)試，以保證工作的可靠性和Z佳性。調(diào)試的項(xiàng)目主要是激光強(qiáng)度、液流速度和測(cè)量區(qū)的光路等。

　　激光強(qiáng)度：除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長(zhǎng)的激光出光外，還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線(xiàn)使激光的強(qiáng)度輸出為Zda。

　　液流速度：可通過(guò)操作臺(tái)數(shù)字顯示監(jiān)督，調(diào)節(jié)氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。

　　測(cè)量區(qū)光路調(diào)節(jié)：這是調(diào)試工作的關(guān)鍵，需要保證在測(cè)量區(qū)的液流、激光束、90°散射測(cè)量光電系統(tǒng)垂直正交，而且交點(diǎn)較小。一般可在用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球等校準(zhǔn)中完成。

　　流式細(xì)胞儀中所測(cè)得的量是相對(duì)值，因此需要在使用前或使用中對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)或標(biāo)定，這樣才能通過(guò)相對(duì)測(cè)量獲得的意義。

　　流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)該穩(wěn)定，有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形，樣品分散性能良好，且經(jīng)濟(jì)、容易獲得。常用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球作為非生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品，雞血紅細(xì)胞做為生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品。微球用樹(shù)脂材料制作，或標(biāo)有熒光素，或不標(biāo)記熒光素。

　　雞血紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)樣品制作過(guò)程昭下：取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑：雞血=1：4)，經(jīng)PBS清洗3次，再用5～10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細(xì)胞混合，室溫下振蕩醛化24h，Z后經(jīng)PBS再清洗，貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因?yàn)槲唇?jīng)熒光染色，所測(cè)光信號(hào)為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。

流式細(xì)胞儀的使用方法

　　1、打開(kāi)流式細(xì)胞儀的電源，對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)熱;

　　2、打開(kāi)氣體閾，調(diào)節(jié)壓力，獲得適宜的液流速度;開(kāi)啟光源冷卻系統(tǒng);

　　3、在樣品管中加入去離子水，沖洗液流的噴嘴系統(tǒng);

　　4、利用校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣品，調(diào)整流式細(xì)胞儀，使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調(diào)定的基礎(chǔ)上，0°和90°散射的熒光強(qiáng)度強(qiáng)，并要求變異系數(shù)為小;

　　5、選定流速、測(cè)量細(xì)胞數(shù)、測(cè)量參數(shù)等，在同樣的工作條件下測(cè)量樣品和對(duì)照樣品;同時(shí)選擇計(jì)算機(jī)屏上數(shù)據(jù)的顯示方式，從而能直觀(guān)掌握測(cè)量進(jìn)程;

　　6、樣品測(cè)量完畢后，使用去離子水沖洗液流系統(tǒng);

　　7、因?yàn)閷?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)存入計(jì)算機(jī)硬盤(pán)(有的機(jī)器還備有光盤(pán)系統(tǒng)，存貯量更大)，可關(guān)閉氣體、測(cè)量裝置，而單獨(dú)使用計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理;

　　8、將所需結(jié)果打印出來(lái)。

流式細(xì)胞儀的維護(hù)保養(yǎng)

　　1、樣品要制成單細(xì)胞懸液，且對(duì)被檢測(cè)樣品的保存時(shí)間有要求。

　　2、選擇正確的熒光染料，一般原則是：低表達(dá)抗原標(biāo)記高S/N(信噪比)熒光素，高表達(dá)抗原標(biāo)記低S/N(信噪比)熒光素。當(dāng)樣品用2種以上熒光染料時(shí)，為消除干擾，需要做熒光補(bǔ)償。在應(yīng)用流式細(xì)胞儀軟件作熒光補(bǔ)償時(shí)，補(bǔ)償只應(yīng)用在同一個(gè)激光激發(fā)的不同熒光素之間，應(yīng)避免補(bǔ)償不足和過(guò)度補(bǔ)償。

　　3、溶液使用前，所用溶液都要進(jìn)行過(guò)濾處理，以免出現(xiàn)沉淀物而堵塞噴嘴。

　　4、流式細(xì)胞儀狀態(tài)穩(wěn)定后，要先排除進(jìn)樣針內(nèi)的氣泡以保證噴嘴暢通，之后再對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)。

　　5、上、下樣本管時(shí)，用力不要太大，防止用力過(guò)大造成流式細(xì)胞儀光路偏移，影響測(cè)試結(jié)果。

　　6、每天關(guān)機(jī)前，利用清洗程序?qū)α魇郊?xì)胞儀進(jìn)行清洗，以防噴嘴堵塞。

　　7、定期處理廢液，定期清洗鞘液管路、廢液管路和流動(dòng)池，以防細(xì)菌生長(zhǎng)。

　　8、做好流式細(xì)胞儀質(zhì)量控制與生物安全管理，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果安全可靠。

　　9、流式細(xì)胞儀應(yīng)放置于清潔、避光、干燥的室內(nèi)，并配上穩(wěn)壓電源。

　　流式細(xì)胞術(shù)作為細(xì)胞分析和分選的重要技術(shù)，在醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究、臨床診斷及科學(xué)研究中廣泛應(yīng)用，目前已成為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)和臨床檢驗(yàn)學(xué)Z強(qiáng)有力的手段之一。隨著人類(lèi)的發(fā)展和科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，流式細(xì)胞儀的技術(shù)會(huì)進(jìn)一步完善，其應(yīng)用領(lǐng)域也將會(huì)越來(lái)越寬廣。