流式細胞儀是一類先進的檢測儀器，其運用計算機技術，可以呈現即時的數據。流式細胞儀廣泛應用于生物學、免疫學、遺傳學、藥理學、腫瘤學、血液學、病理學、臨床檢驗等領域。

流式細胞儀的發(fā)展歷史

　　流式細胞儀Z早的雛形誕生于1934年，Moldavan提出使懸浮的單個血紅細胞流過玻璃毛細管，在亮視野下用顯微鏡進行計數，并用光電記錄裝置測量的設想。

　　1953年Crosland-Taylor根據牛頓流體在圓形管中流動規(guī)律設計了流動室。其后又經過Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人的不斷改進，設計了光電檢測設備和細胞分選裝置、完成了計算機與流式細胞儀的物理連接及多參數數據的記錄和分析、開創(chuàng)了細胞的免疫熒光染色及檢測技術、推廣流式細胞儀在臨床上的應用。

　　近20年來，隨著流式細胞儀及其檢測技術的日臻完善，人們越來越致力于樣品制備、細胞標記、軟件開發(fā)等方面的工作，以擴大流式細胞儀的應用領域和使用效果。

流式細胞儀的分析原理

　　流式細胞儀可以分成三個基本的結構，這三個基本的結構已經形成了完善的系統(tǒng)，分別是光學檢測系統(tǒng)、液流系統(tǒng)和數據處理系統(tǒng)。流式細胞儀借助了激光的原理，通過單克隆抗體和熒光染料的結合使用，并且結合了計算機技術，從而可以對單個細胞進行數據處理，通過發(fā)送參數信號的方式，確保檢測效率的提升，而且激發(fā)效率和單色性可以得到保障，在統(tǒng)計分析的過程中，各類數據都非常的精確，在檢測的過程中靈敏度和特異性都能得到保障。

　　1、液流系統(tǒng)

　　將經特異性熒光染料染色的待測細胞制成單細胞懸液，加入流式細胞儀的樣品管中，在氣體壓力推動下進入流動室，不含細胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出。

　　鞘液管入口方向與待測樣品流呈一定角度，這樣鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區(qū)域。這種同軸流動的設計，使得樣品流和鞘液流形成的流束始終保持著一種分層銷流的狀態(tài)。

　　利用樣品流和鞘流的氣壓差的層流原理，使細胞依次排列成單行，每個細胞以均等的時間依次通過測量區(qū)，被熒光染料染色的細胞受到強烈的激光照射后發(fā)出熒光，同時產生散射光。細胞發(fā)出的熒光信號和散射光信號同時被光電倍增管接收。

　　2、光學檢測系統(tǒng)

　　流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經過聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染料染色的細胞在激光束的照射下產生散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號同時被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收。

　　光散射信號在前向小角度進行檢測，這種信號基本上反映了細胞體積的大小;熒光信號的接收方向與激光束垂直，經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不同波長的熒光信號。光電倍增管接收的信號被積分放大反轉換為電子信號輸入電子信息接收器，傳輸給與流式細胞儀相連的計算機。

　　3、信號處理系統(tǒng)

　　熒光信號的強度代表了所測細胞核內DNA的含量及倍體，經光電倍增管接收后可轉換為電信號，再通過模/數轉換器，將連續(xù)的電信號轉換為可被計算機識別的數字信號。

　　計算機把所測量到的各種信號進行處理，將分析結果顯示在計算機屏幕上，也可以打印出來，或者以數據文件的形式存儲在硬盤上，以備日后查詢或分析。

流式細胞儀的分選原理

　　流式細胞儀還可以根據所規(guī)定的參量把指定的細胞亞群從整個群體中分選出來，以便對它們進行進一步的研究分析。

　　流式細胞儀分選是把液滴形成的信號加在壓電晶體上使之產生機械振動，流動室即隨之振動，使液柱斷列成一連串均勻的液滴，一部分液滴中包有細胞，而細胞性質是在進入液滴以前已經被測定了的，如果其特征與被選定要進行分選的細胞特征相符。

　　流式細胞儀在這個被選定的細胞剛形成液滴時給整個液柱充以指定的電荷，使被選定的細胞形成液滴時就帶有特定的電荷，而未被選定細胞形成的細胞液滴和不包含細胞的空白液滴不被充電。帶有電荷的液滴向下落入偏轉板的高壓靜電場時，按照所帶電荷符號向左或向右偏轉，落入指定的收集器內，完成分類收集的目的。

　　流式細胞儀對分選出的細胞可以進行培養(yǎng)或其他處理，做更深的研究。