為微生物、植物和動(dòng)物組織生長和維持提供的人工配制的養(yǎng)料，被稱為培養(yǎng)基（Medium）。培養(yǎng)基（Medium）通常包括生長因子（維生素、氨基酸、堿基、KJ素、色素、激素和血清等）、無機(jī)鹽（包括微量元素）、碳源、水、氮源。培養(yǎng)基不僅是細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境，而且還是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)。

一、制定本操作規(guī)程的目的

（1）使培養(yǎng)的質(zhì)量有所提高，避免導(dǎo)致差錯(cuò)。

（2）使工作效率得以提高，可以節(jié)約時(shí)間和能源，使配制過程井然有序。

二、配置固體培養(yǎng)基操作規(guī)程

1.對培養(yǎng)基成分單進(jìn)行填寫

根據(jù)所用培養(yǎng)基配方及其配制量，將各種成分母液及瓊脂、蔗糖的用量準(zhǔn)確計(jì)算出來，然后依照大、微、鐵、有、調(diào)、瓊、糖、pH的順序，在“配制培養(yǎng)基成分單”上填寫。

2.將水鍋加熱

將約為欲配培養(yǎng)基量的70-80%的蒸餾水或軟化水（澄清后的涼開水）加進(jìn)做培養(yǎng)基專用的不銹鋼鍋內(nèi)，然后將不銹鋼鍋放在電爐上加熱。

3.向高壓鍋加水

將高壓鍋排水閥關(guān)閉，向鍋內(nèi)加軟化水到安全水位線位置。

4.對瓊脂、蔗糖進(jìn)行稱取

在稱取之前，將干膠條狀瓊脂剪碎，破碎蔗糖結(jié)塊，稱量的精度必須高于1%。

5.擺放培養(yǎng)瓶

根據(jù)按預(yù)定分裝瓶數(shù)，在桌上擺放洗凈、晾（烘）干的培養(yǎng)瓶并保持其整齊。

6.對母液進(jìn)行量取和混溶

根據(jù)培養(yǎng)基成分單所列順序把貯存各種所需母液的試劑瓶擺放整齊，再根據(jù)配方用量順序?qū)Ω鞒煞帜敢哼M(jìn)行量取，并且，在燒杯中混溶。

7.將瓊脂將加進(jìn)水鍋

加熱到水鍋的溫度在90攝氏度左右，向水鍋內(nèi)加入稱量好的瓊脂，繼續(xù)加熱，不斷勻速攪拌，防止糊鍋。

8.將蔗糖加入

等到瓊脂完全溶化，將蔗糖撒入，不停地?cái)嚢琛?/span>

9.將母液混溶液加入

在蔗糖溶化后，停止加熱，一邊攪拌，一邊將母液混溶液慢慢倒入。

10.加水定容

將蒸餾水（或軟化水）加入一直到欲配培養(yǎng)基量的鍋壁標(biāo)記。

11.對pH值進(jìn)行調(diào)節(jié)

使用精密的pH試紙進(jìn)行測定，然后對比比色卡，如果偏酸性，則將1mol/L的NaOH液滴入，若偏堿則將1mol/L的HCl液滴入，少量多次滴加，一直到滿足要求為止。

12.對培養(yǎng)基進(jìn)行分裝

在擺好的培養(yǎng)瓶內(nèi)分別均勻分裝不同組培目的所需的每瓶培養(yǎng)基用量，然后將消毒好的棉塞或封口膜蓋在瓶口上。

13.使用高壓鍋進(jìn)行加熱

將進(jìn)水口及放氣閥關(guān)閉，將排氣閥打開，通電加熱。

14.培養(yǎng)基（瓶）封口

使用牛皮紙（或直接用封口膜）加蓋在棉塞上，并且使用棉線扎緊封口。

15.培養(yǎng)基（瓶）裝鍋

瓶口向上，略向ZX傾斜，瓶口不可貼于鍋壁（防止冷凝水進(jìn)入瓶內(nèi)）。碼放均勻，上方加蓋三層牛皮紙吸濕，裝鍋不可過滿，以加蓋后不堵塞安全閥和放氣閥的孔口為度。

16.將高壓鍋封蓋，滅菌

封蓋時(shí)應(yīng)當(dāng)順時(shí)針方向?qū)⒙菟〝Q緊固定。在高壓滅菌鍋控制面板上選擇溫度121℃，時(shí)間為20分鐘，將確認(rèn)鍵按下，滅菌。

17.培養(yǎng)基（瓶）出鍋

當(dāng)滅菌結(jié)束后，高壓滅菌鍋?zhàn)詣?dòng)斷電，將鍋蓋打開，將培養(yǎng)基取出。

18.存放培養(yǎng)基

在接種室的存放架上整齊平放出鍋的培養(yǎng)基（瓶），并且對于其培養(yǎng)對象（種類、品種）、培養(yǎng)目的（誘導(dǎo)、繼代、生根）或其它特定用途以及配制日期明確標(biāo)示。

19.高壓鍋排水

將排水閥打開，將鍋內(nèi)存水放盡，從而使積垢減少。